牙鲆仔鱼核酸与生长关系的研究

随机采取不同日龄健康的牙鲆仔鱼,用电子目镜和天平测定其全长（L）、体质量（m）,运用整体匀浆法测定鱼体中核酸和总蛋白浓度、RNA／DNA （a）比值和总蛋白／DNA比值（b）,研究了牙鲆仔鱼的生长,DNA、RNA和总蛋白的变化规律,探讨了核酸、总蛋白和生长的关系。试验结果表明,牙鲆仔鱼体质量、全长与RNA／DNA比值均呈线性负相关,关系式分别为 m＝-19．85 a＋82．79（r2＝0．89, P＜0．01）,L＝-7．41 a＋33．53（r2＝0．85,P＜0．05）。上述关系式说明,牙鲆仔鱼时期的生长以细胞增殖为主,大量消耗前期合成的蛋白质。牙鲆仔鱼体质量、全长与总蛋白／DNA 比值也呈线性负相关,关系式分别为 m＝-0．61 b ＋34．54（r2＝0．93, P ＜0．01）,L＝-0．22 b ＋15．33（r2＝0．86, P ＜0．01）。随着牙鲆仔鱼养殖日龄的增加,总蛋白／DNA比值下降的幅度大于RNA／DNA比值。核酸指标能从细胞水平上分析仔鱼的生长。     

褐牙鲆♀×大西洋牙鲆♂杂交育种研究

为探讨褐牙鲆和大西洋牙鲆杂交育种的可行性，通过繁殖调控使褐牙鲆和大西洋牙鲆同步性成熟，采取正反交试验，获得了褐牙鲆（♀）×大西洋牙鲆（♂）杂交F1代——花关牙鲆（Paralichthysolivaceus早×Pdentatus6）。花关牙鲆受精卵卵径平均1．01mm；孵化适宜温度15—21℃，盐度25～35，孵化率平均71．3％，初孵仔鱼全长2．5～2．7mm；仔鱼在16—20℃下36d后伏底变态，变态个体全长平均11mm，育成率32．5％；反交受精率和孵化率极低，未获得杂交后代。简述了其发育时序和形态特征，探讨温度、盐度对花关牙鲆胚胎和仔鱼发育的影响，比较亲本与杂交鱼早期生长特征，初步分析反交不成功的原因。     

几种工业废水对牙鲆仔稚鱼的急性毒性及联合毒性作用

印染废水、电镀废水、农药废水都是常见的、易进入近岸海域的工业废水。本文通过室内实验，研究了这3种工业废水及其混合物对牙鲆仔稚鱼的急性毒性作用。结果表明，印染废水、电镀废水、农药废水及其混合物对牙鲆初孵仔鱼48hLC50(95％置信区间）和96h LC50（95％置信区间）分别为2．28％（1．39％－3．74％）、0．21％（0．18％－0．27％）、0．47％（0．37％－0．60％）及0．42％（0．07％－2．54％）和0．58％（0．15％－0．76％）、0．10％（0．04％－0．25％）、0．23％（0．18％－0．29％）及0．17％（0．12％－0．23％）；对牙鲆后期仔稚鱼48h LC50(95%置信区间）和96h LC50（95％置信区间）分别为2．95％（1．65％－5．29％）、0．22％（0．15％－0．31％）、0．71％（0．50％－1．01％）及0．77％（0．50％－1．19％）和0．69％（0．51％－0．93％）、0．14％（0．10％－0．20％）、0．38％（0．23％－0．61％及0．24％（0．16％－0．35％）。以对牙鲆仔稚鱼半致死浓度为指标，这几种工业废水的毒性顺序为电镀废水＞农药废水＞印染废水，初孵仔鱼较后期仔稚鱼对这些废水更为敏感。这些废水以等体积混合时，对初孵仔鱼和后期稚鱼的联合毒性作用表现为相加作用。     

牙鲆营养需要的研究

研究了牙鲆幼鱼对营养的需要，旨在改变目前牙鲆养殖业病害日趋严重的现状，从而提高经济效益。结果显示：蛋白质含量为52．78％、碳水化合物15．80％、脂肪8．78％时幼鱼增重率最高；添加EPA为0．5％、DHA1．5％时增重率最高。另外，对微量元素及维生素含量也做了对比实验。     

饵料蛋白量对于日本对虾幼虾生长,消化效率和氮排泄的影响

研究了饵料蛋白量对日本对虾（Ｐ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）幼虾生长、消化率、氨和尿素排泄的影响。按照同等热量主要以蟹蛋白配制了５种蛋白（２１％～６１％）干饵料，并且在３０ｄ中每天按体重的６％比例来投喂对虾（平均初湿重为０．４ｇ）。在试验结束时，以蜕皮中期的对虾（湿重０．５～２．０ｇ）用作计算干物质和蛋白质的消化率和氨与尿素的排泄率。投喂含２１％和３１．４％蛋白饵料的对虾的增重、特定生长率（ＳＧＲ）和饵料     

中华绒螫蟹对11种饲料原料蛋白质和氨基酸的表观消化率

以氧化钇（Y2O3）作为指示剂，按照“70％基础饲料＋30％试验原料”的原则配制饲料，测定了体重（97．34±7．36）g的中华绒螯蟹对不同饲料原料蛋白质和氨基酸的表观消化率。试验选取鱼粉、血粉、肉骨粉、乌贼内脏粉、虾壳粉、啤酒酵母、豆粕、棉籽粕、菜籽粕、花生粕、玉米蛋白粉共11种商品蛋白质饲料原料。试验结果表明，中华绒螯蟹对不同饲料蛋白源的粗蛋白表观消化率为40．62％～89．75％，其中，鱼粉和血粉组的粗蛋白表观消化率分别为86．07％和89．75％，显著高于其他原料组；而菜籽粕（42．41％）和玉米蛋白粉组（40．62％）的粗蛋白消化率则明显低于其他饲料蛋白源（P〈0．05）。其他蛋白源的消化率大小顺序依次为：豆粕（77．94％）〉啤酒酵母（76．90％）〉虾壳粉（74．02％）〉肉骨粉（73．78％）〉棉籽粕（71．63％）〉花生粕（65．90％）〉乌贼内脏粉（63．51％）。在动物性蛋白源中，中华绒螯蟹对血粉和鱼粉的氨基酸消化率较高，二者的总氨基酸消化率均高于90％，试验结果还显示，蟹对乌贼内脏粉的氨基酸消化率最低，仅为63．51％；单细胞蛋白源啤酒酵母的总氨基酸消化率（86．77％）高于其他植物性蛋白源；在植物性蛋白源中，对棉籽粕的总氨基酸消化率最高（85．37％），其次是豆粕（79．41％）。本研究结果对评价不同饲料蛋白源的营养价值，以及开发中华绒螯蟹氨基酸营养平衡的人工配合饲料提供了参考和依据。     

几种国产和进口鱼粉的部分营养成分及对牙鲆消化率的比较

本文通过对随机抽取的几种国产与进口鱼粉的几种重要品质指标进行比较，研究了牙鲆对几种单一饲料的蛋白质和干物质的消化率。结果表明：采用粪分析法测定牙鲆对饲料蛋白质和干物质的消化率的方法是行之有效。据检测结果：从常规成分检测的均值上看，国产鱼粉粗蛋白含量偏低，水分、灰分、粗脂肪偏高。国产鱼粉抽样中蛋白质和干物质的平均消化率分别为79．61％和73．39％，而进口鱼粉为87．4％和81％，都比国产鱼粉高。根据试验结果，分析了国产鱼粉与进口鱼粉的优劣，提出了国产鱼粉加工工艺改进的方向，对提高国产鱼粉质量，生产优质国产鱼粉具有指导意义。     

牙鲆3个养殖群体遗传结构的微卫星分析

采用微卫星标记分析技术,用5个多态性的微卫星标记对来自3个不同国家（中国、日本和韩国）的牙鲆养殖群体进行了遗传多样性研究。研究结果表明,3个牙鲆群体平均等位基因在4．8～5．6之间,平均观测杂合度（H0）在0．3917～0．5643之间,平均期望杂合度（HE）在0．5981～0．6264之间。有多个位点在不同的群体中偏离哈代-温伯格平衡。遗传距离分析表明,中国群体与日本群体遗传距离最近,韩国群体与日本群体遗传距离最远。分子方差分析（AMOVA）表明,群体内遗传变异与群体间遗传变异分别占总遗传变异的92．44％和7．56％,固定系数（R）为0．0752（P〈0．001）,表明牙鲆3个养殖群体遗传分化显著。     

牙鲆干扰素调节因子核心区序列的克隆及初步表达

采用逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）方法，从牙鲆（Paralichthys loivaceus)肝脏总RNA中扩增出干扰素调节因子（fIRF)的核心区序列，定向插入质粒pUC18，克隆的牙鲆IRF cDNA序列分析表明，与Yabu报道的牙鲆IRF cDNA相比有1个碱基差异，但与推断的氨基酸序列完全一致，将牙鲆IRF的核心区序列 cDA定向插入原核表达载体pBV220，构建成牙鲆IRF表达载体pBVfIRF22，SDS－PAGE分析表明，经42度诱导，含pBVfIRF22质粒的大肠杆菌可表达一分子量约12000的特异蛋白。     

淡水闭合循环养殖条件下养殖密度和个体大小对漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)幼鱼生长的影响

以新疆伊犁河生态渔业中心漠斑牙鲆循环水养殖系统为实验平台，在生产规模上研究了闭合循环淡水养殖条件下养殖密度和个体大小对漠斑牙鲆幼鱼生长的影响。结果表明：漠斑牙鲆池底覆盖率低于34％时，养殖密度对漠斑牙鲆生长的影响不显著（P〉0．05）；养殖密度对个体大小的分化具有显著影响（P〈0．05），加强养殖管理可以降低该影响；漠斑牙鲆全长120mm时，性别分化基本完成，雄鱼规格和生长速度明显低于雌鱼。     

褐牙鲆白细胞介素21基因克隆及表达分析

利用转录组测序数据信息和PCR技术克隆褐牙鲆白细胞介素21(IL-21)基因的编码区序列,并进行生物信息学分析及表达模式分析。试验结果显示,白细胞介素21基因开放阅读框429 bp,编码142个氨基酸,分子量16.0 ku,在N端具有19 bp信号肽序列。分子系统发育树分析表明,褐牙鲆白细胞介素21蛋白与尖吻鲈以及深裂眶锯雀鲷白细胞介素21蛋白亲缘关系最近。实时荧光PCR结果显示,白细胞介素21基因在所检测的褐牙鲆7种健康组织中均有表达,其中肝脏的表达量最高。用提取的迟钝爱德华氏菌脂多糖免疫刺激褐牙鲆后,白细胞介素21基因的表达在头肾和脾组织中产生不同程度上调,表明该基因参与了脂多糖诱导的免疫应答。利用RNA干扰技术沉默髓样分化因子(MyD88)基因后,白细胞介素21基因的表达出现下调,当再用提取的迟钝爱德华氏菌脂多糖免疫刺激后,MyD88和白细胞介素21基因的表达又均开始逐渐回升,暗示白细胞介素21与MyD88通路具有一定关联性。     

褐牙鲆中miRNAs与甲状腺激素受体TRβ的相互作用研究

甲状腺激素通过与其受体结合对褐牙鲆变态起重要的调控作用,而miRNAs通过结合靶基因3′-UTR在转录后水平调节靶基因的表达。为探讨miRNAs在褐牙鲆变态中的作用,通过生物信息学方法预测褐牙鲆TRβ基因3′-UTR存在的miRNAs结合位点,并利用3′-RACE方法克隆TRβ基因的3′-UTR序列,通过体外DNA重组技术构建应用于miRNAs靶向基因检测的双荧光素酶重组报告载体,利用细胞转染和双荧光素酶报告技术分析多个miRNAs与TRβ基因的作用关系。研究结果显示,克隆得到了一段长为437 bp的褐牙鲆TRβ基因的3′-UTR序列,发现3′-UTR序列上存在pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p、pol-miR-138和pol-miR-125a*的结合位点,成功构建了双荧光素酶重组报告载体,命名为pmirGLO-TRβ-3′-UTR。双荧光素酶报告分析结果表明,pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p和pol-miR-138均为作用于褐牙鲆TRβ的靶向miRNAs,而pol-miR-125a*对TRβ基因无直接的调节作用。研究结果将为后续深入研究miRNAs与TRβ在褐牙鲆变态发育中的功能及其作用机制提供基础。     

The nucleotide sequence of the gene encoding GCAT from Aeromonas salmonicida ssp. salmonicida

The nucleotide sequence of the gene encoding GCAT (glycerophospholipid: cholesterol acetyltransferase) in Aeromonas salmonicida ssp. salmonicida has been determined. The sequence revealed an open reading frame of 1005 bp encoding 335 amino acids, an 18-amino-acid signal peptide and a 317-amino-acid mature polypeptide with a deduced molecular mass of 35 380 Da and an estimated pI of 6.25. Within the encoding region, the homology with the corresponding gene fromAeromonas hydrophila was 92.9% for the nucleotide sequence and 93.7% for the deduced amino acid sequence.     

Multiple taste functions of the umami substances in muscle extracts of yellowtail and bastard halibut

Boiled muscle extracts obtained from yellowtail Seriola quinqueradiata and bastard halibut Paralichthys olivaceus were treated with two kinds of purified enzymes (acid phosphatase and glutamate decarboxylase), and the change in contents of nucleotides, related compounds, and free amino acids was examined. The change in taste qualities was also investigated by a taste test. The enzyme treatment resulted in a marked decrease in the contents of such umami substances as inosine 5′-monophosphate (IMP) and glutamic acid (Glu). The taste test revealed that the treatment of these fish muscle extracts with both or either of the enzymes caused a sharp decrease in umami intensity and also an increase in sourness but not a change in pH. The treatment also effected marked decreases in thickness and overall taste intensity. These findings suggest that IMP and Glu function not only to intensify the thickness and overall taste as well as the umami, but also to repress the sourness sensation elicited by the fish muscle extracts.     

三角鲂形态特征和胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的序列分析

对三角鲂(mEGALOBRAMA TERMINALIS)形态学特征进行研究，用RT—PCR的方法从三角鲂肝脏克隆了三角鲂胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的cDNA序列。三角鲂传统的形态学数据与团头鲂相似。序列分析表明，三角鲂ICE-Ⅰ cDNA由486个核苷酸构成，编码161个氨基酸，包含整个信号肽、B、C、A、D和E区，与鲂属团头鲂比较，三角鲂与团头鲂IGF-Ⅰ cDNA序列同源性为99．8％，氨基酸序列同源性为99．4％。由此可见三角鲂的遗传学特征与团头鲂非常相似。     

圆斑星鲽sox9基因的克隆与表达

本研究筛选到圆斑星鲽(Verasper variegatus)的性别相关基因sox9,并通过RACE技术获得了全长序列,基因全长为3287 bp,包括1431 bp的ORF,编码477个氨基酸,368 bp的5¢ UTR和1488 bp的3¢ UTR。在3¢ UTR中有多聚腺苷酸尾和加尾信号AATAAA。通过荧光定量PCR测定了sox9基因在圆斑星鲽成鱼不同组织中的表达水平,发现sox9基因在圆斑星鲽的脑、眼、鳃、心、肝、胆、肠、精巢、卵巢、肾和肌肉等各个组织中都有不同程度的表达。在鳃、脑和精巢组织中检测到较高水平的sox9转录,其中精巢中的转录水平显著高于其他组织,sox9基因在性腺中的表达显示出性别两相性差异。其在精巢中的表达水平要显著高于卵巢,说明sox9基因与雄性性腺发育相关。通过测定sox9基因在圆斑星鲽幼鱼不同发育时期(20、30、40、50、60、70和80日龄)的表达水平,发现其在20~50日龄表达量逐渐下降,在60日龄时表达量上升,推测表达量上升可能与幼鱼性腺分化相关。     

6株水产动物源气单胞菌安徽分离株的毒力基因的克隆与序列分析

根据气单胞菌主要黏附素基因（ahal）、溶血素基因（hly）和细胞兴奋性肠毒素基因（alt）完整开放阅读框（0RF）设计3对特异性引物，对6株气单胞菌安徽分离株进行ahal、hly和alt基因的PCR扩增、克隆和测序。测序结果显示，安徽分离株aim、hly和alt基因的ORF大小分别为1056--1068bp、1482bp和1104N1107bp，各编码351-355、493和367-368个氨基酸。序列分析显示：（1）属于alt^＋aim^＋hly^＋毒力基因型的3个安徽分离株间aha1核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性均很高，分别为98.8％-99．3％和97％-97．6％，且与国内参考株mh／Trionyx sinensis／Guangzhou（Guangdong）／AF276639的同源性高达98．5％-99％和96.8％-97．6％。而alt^＋ahal^＋hly^-HA6安徽分离株与国外参考株Ah／Fish／Barcelona（Spain）／AF183931间的核苷酸序列和氨基酸序列同源性较高，分别为95.8％和97．2％。（2）不同表型种气单胞菌安徽分离株之间及其与国内外其他分离株之间的hly核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性均较高，分别介于88．4％-100％之间和90.8％-98．7％之间。（3）5个安徽分离株（RA16、CA1、HA6、HA7和GA1）之间及其与惟一参考株之间的alt核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性分别高达93．5％-99．9％和80．2％-98．3％，但与BA17分离株间的核苷酸序列同源性（81．6％-81．7％）和推测的氨基酸序列同源性（77．5％-84．9％）均较低。这些结果表明，气单胞菌ahal和alt基因在不同毒力基因型间存在一定差异性，hly基因在不同表型种间存在较高保守性，该基因可作为研制气单胞菌基因工程亚单位疫苗的候选成分。     

IGF-I of Orange Spotted Grouper Epinephelus Coioides: cDNA Cloning, Sequencing and Expression in Escherichia Coli

Insulin-like growth factors I and II (IGF-I and IGF-II) are two highly homologous mitogenic peptides that are expressed ubiquitously and show diverse effects on development, growth, and metabolism. The cDNA encoding IGF-I of a teleost, the orange spotted grouper (Epinephelus coioides) was produced from liver by RT-PCR, and rapid amplification of cDNA ends, RACE. Typically, the deduced 186 amino acid protein contains a signal peptide, B, C, A, D and E domains. On the amino acid level, grouper IGF-I shares 97.3% similarity with black seabream (Sparus macrocephalus) with the differences focusing on the B and C domains. The analysis of the E domain showed that grouper IGF-I belonged to Ea-4 type. When mature amino acid sequence was compared with other vertebrates, it revealed higher similarity with black seabream and halibut, while lower similarity with human and mouse. The expression of IGF-I mRNA in adult tissues was studied using RT-PCR. IGF-I mRNA expression level in the liver was significantly higher than those in the brain and muscles. In other tissues, low amount of IGF-I mRNA expression was also detected. The coding region of IGF-I cDNA for mature IGF-I protein was subcloned into an expression plasmid pTRX and fused with E. coli thioredoxin (Trx). Moreover, we have successfully developed an expression system in E. coli to overproduce recombinant grouper IGF-I. Using western blotting, we found that the fusion protein could blot with antiserum to barramundi IGF-I further confirming the immunoactivity of the recombinant IGF-I.     

Complete nucleotide sequence of a cDNA encoding a myosin heavy chain from mantle tissue of scallop Patinopecten yessoensis

ABSTRACT: It has been reported that the amino acid sequences of striated and catch muscle myosin heavy chains from two scallop species ( Argopecten irradians and Placopecten magellanicus ) are almost identical, but that the ATPase activities between these myosins vary several-fold. These myosin sequences have been useful for identifying the region that modulates the ATPase activity of scallop myosin. In the present study, a cDNA encoding a myosin heavy chain was isolated from the mantle tissue of scallop Patinopecten yessoensis . The cDNA is composed of 6067 base pairs (bp) including an open-reading frame of 5841 p, which encodes an amino acid sequence of 1947 residues. The deduced amino acid sequence of P. yessoensis mantle myosin had a high identity of 90%, 92%, and 91% to P. magellanicus , A. irradians , and Pecten maximus striated muscle myosins, respectively. Interestingly, while the deduced amino acid sequences of around adenosine triphosphate-binding and actin-binding sites of the mantle myosin are homologous to those of A. irradians striated muscle myosin, the subfragment 2 hinge region and the non-helical tail region are similar to those of catch muscle myosin.