试管奶山羊的研究

1990年6月7日,1只“试管奶山羊”在我校家畜生殖内分泌研究室降生,这是国内首例、世界第二例。 家畜精子体外获能与体外受精是本世纪80年代以来迅速发展起来的一项胚胎工程技术,是纯粹通过体外培养条件达到生产“试管动物”的先进繁殖技术。体外受精研究己有120多年历史,1951年张明觉和Austin分别发现精子获能现象后,开创了哺乳动物体外受精研究的新纪元。当今,通过此项技术已有20种动物获得成功,其中10种动物获得试管后代,包括牛、猪、绵羊和山羊等家畜。 精子体外获能与体外受精主要包括以下技术:(1)精子体外获能;(2)获能精子与成熟卵母细胞共同培养;(3)受精卵的体外培养与移植。其中精子体外获能是关键技术之一。     

牛胚胎体外生产技术概要

胚胎体外生产也称体外受精技术,是继人工授精、胚胎移植技术之后,家畜繁殖领域的第三次革命。牛胚胎体外生产包括卵子的成熟培养、精子获能、体外受精和胚胎早期培养等4个连续过程。自1982年以来,家畜体外受精技术,尤其是牛体外受精技术的发展十分迅速,仅仅10年时间,就已从理论     

奶山羊精子体外获能异体受精试验

关于哺乳动物体外受精的研究,已经历了120多年,直到80年代才获得了第一例“试管家畜”。近年来,尽管“试管婴儿”平均每天有4例问世,但到1990年4月10日为止,全世界获得的“试管家畜”仅有130例,其中“试管牛”54头,“试管猪”52只,“试管绵羊”23只,“试管山羊”只有1只。 为了克服山羊体外受精的难点,Rao等将山羊输卵管卵母细胞输入事先经子宫输入新鲜羊精的假孕兔输卵管,培养24～36h,有37.0％完成了异体受精。将这些受精卵移植给9只受体羊后,有1只正常分娩,获得了首例异体受精山羊羔。我们将超排羊输卵管卵母细胞移入事先经阴道输入新鲜羊精的假孕兔输卵管,获得了44.8％的异体受精率。但迄今尚未证实,山羊体外获能的精子与超排卵母细胞在假孕兔输卵管内能否完成受精过程和产出正常后代。本试验旨在研究山羊体外获能的精子与超排的输卵管卵异体受精及受精卵移植后产羔的可能性。     

荧光原位PCR定位动物精子介导转移的外源基因

用荧光原位PCR对经体外介导外源基因转移方法处理的家畜精子进行检测。结果证实,牛,山羊和绵羊的精子在一定条件下能够携带所转移的外源基因,其平均转移效率分别为：绵羊27.12%,牛31.16%,山羊30.57%,同时发现外源基因已进入精子细胞内并位于核及其外围区域。     

家畜繁殖生物技术研究现状及趋势

牛胚胎移植技术已趋于成熟。我国新疆牧科院用一步细管法移植牛冻胚受胎率达41%;牛和羊鲜胚四分胚移植也产下1头犊牛和6只羔羊。家畜体外受精,因卵子体外成熟和受精卵体外培养尚不过关,目前仍停留在实验室阶段。胚胎性别鉴定,1990年Koopman发现单拷贝基因,该基因是Y染色体的性决定区,命名为SRY,可利用PCR技术制成雄性特异DNA探针盒,进行马、牛、羊、猪早期胚胎性别鉴定。北京农学院等单位用PCR扩增牛SRY序列进行奶牛胚胎性别鉴定准确率达100%。英、日、法等国已获得牛胚胎细胞核移植后代;我国也获得1只核移植兔。北农大和新疆牧科院合作以绵羊精子为载体导入牛生长激素基因rMTbGH DNA成功,外源基因整合率为3%。     

牛的体外受精技术——关于精子获能的预处理

本文主要阐述关于牛的体外受精的一般操作过程:卵母细胞的采集、体外成熟培养、授精前精子获能的预处理,体外授精及受精卵的培育。试验结果表明对冷冻精液进行离心清洗可以提高体外受精率,其中无清洗或1次清洗后的精子受精率均为0;2次或3次清洗的精子受精率分别达36.1%和43.65。     

简讯

我校畜牧系繁殖研究室于1987年接受了农业部“七五”计划重点科研项目——猪的体外受精。一年多来,进行了猪卵母细胞的体外培养成熟、精子体外获能和体外受精等技术的研究。目前,用从屠宰场采集的卵母细胞经体外培养18小时后卵丘细胞扩展率为95.58％(216/     

显微分割扩张孵化胚泡获同卵双生山羊羔

通过分割孵化囊胚之前不同发育阶段的胚胎,国外已分别在牛、绵羊、山羊、马、猪等家畜上取得同卵双生试验的成功。但国内至今尚无通过显微分割获得家畜同卵双生后代的实例。作者等于1986年10月至1987年5月进行了山羊胚胎分割和半胚移植试验,1987年4月18日和5月25日,两只受体孕羊各产1对同卵双生山羊羔,在国内首次获得家畜同卵双生后代。     

猪精子的体外获能与体外受精

通过5个实验研究了应用咖啡因，肝素和I－A23187促进猪精子体外获能的效果，比较了不同受精次数和不同种类的精液进行猪卵子体外受精的效果，试验表明，用肝素和咖啡因协同作用，猪精子体外获能的效果好，采用2－3次受精法进行体外受精可以提高受精率，使用新鲜精液，新鲜附睾精液或冷冻附睾精液进行体外受精，其效果差异不显著。     

牛体外成熟卵母细胞死精子微注射受精研究

本研究主要目的是应用死精子微注射法探索一种提高牛成熟卵母细胞体外受精的方法。试验划分为三个部分：试验１体外成熟卵母细胞分为４个处理组。１组和３组成熟卵母细胞分别用１μｍｏＬ·Ｌ－１和５μｍｏＬ·Ｌ－１的钙离子Ａ２３１８７激活；２组和４组卵母细胞在１μｍｏＬ·Ｌ－１和５μｍｏＬ·Ｌ－１的钙离子Ａ２３１８７激活前去除颗粒细胞。精子获能用４０ｍｇ·Ｌ－１肝素。在试验２和试验３，成熟卵母细胞的激活方法和颗粒细胞的去除同试验１，精子获能分别用５０ｍｇ·Ｌ－１和１００ｍｇ·Ｌ－１肝素。当卵和精子经上述处理后，一个获能后的死精子微注射到卵细胞质中。试验结果表明：体外成熟的牛卵母细胞，当用５μｍｏＬ·Ｌ－１钙离子Ａ２３１８７激活后，经死精子显微注射，受精率明显地高于１μｍｏＬ·Ｌ－１的钙离子激活组。当精子获能用不同剂量的肝素处理后，对牛体外成熟的卵母细胞受精率未产生明显的影响。在死精子显微注射受精过程中，当成熟牛卵细胞在钙离子激活前去除颗粒细胞将明显地降低其受精率。