转录组学方法分析恩诺沙星联合用药对雄性SD大鼠肝脏毒性的研究

为了研究恩诺沙星与环丙沙星、氟苯尼考和磺胺二甲嘧啶三种抗生素的联合毒性及潜在机制,试验将16只雄性SD大鼠分为恩诺沙星+环丙沙星组(E+C组)、恩诺沙星+氟苯尼考组(E+F组)及恩诺沙星+磺胺二甲嘧啶组(E+S组)3个联合用药组和1个对照组(K组),每组4只,联合用药组中每种药物取等量混合制成100 mg/mL药物储备溶液,各组大鼠按体重0.005 mL/g灌服相应的药物储备溶液,对照组大鼠按体重0.005 mL/g灌服相应剂量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,以给药1 d停药2 d为一个用药周期,6个周期后麻醉并脱颈椎处死大鼠,剖检取出肝脏提取总RNA,然后进行转录组测序与分析。以对照组大鼠肝脏基因组作为参考,筛选出差异表达基因并进行GO功能注释和KEGG富集分析。结果表明：与对照组相比,E+C组、E+F组、E+S组分别筛选出2 155,2 130,727个差异表达基因,选择Cyp2e1和Cyp8b1等15个基因进行相对表达量聚类分析。E+C组GO功能主要注释在脂质、脂肪酸及有机酸等物质代谢过程等;E+F组GO功能主要注释在环氧合酶P450途径及激活MAPK次联途径等;E+S组GO功能主...     

标准加入法测定猪肉中磺胺二甲嘧啶和磺胺二甲氧嘧啶残留量

采用标准加入法测定了猪肉中磺胺二甲嘧啶和磺胺二甲氧嘧啶残留量。样品经乙腈提取正己烷液液分配去脂净化后上机测定。色谱柱为C₁₈(50mm×2.1mm,1.7μm),以乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子(ESI+)和多反应监测(MRM)模式测定,标准加入法定量。结果表明50、100、200μg/kg三个添加水平下,回收率在(71.79±1.20)%～(93.10±3.07)%之间。本方法可排除基质效应的影响,更为准确的测定猪肉中磺胺二甲嘧啶和磺胺二甲氧嘧啶残留量。     

恩诺沙星注射液中非法添加磺胺嘧啶HPLC-PDA检查法的建立

对恩诺沙星注射液中非法添加磺胺嘧啶的检测方法进行了研究.通过比较受试样品中未知峰与对照品色谱图保留时间的一致性和光谱指数图的匹配,建立了HPLC-PDA测定法,并进行相应的方法学研究.结果显示,磺胺嘧啶回收率为99.5％,RSD=0.4％;线性方程为y=873577x＋98154,R2 =1;检测限为5μg/mL,表明该检测方法准确可靠,可用于恩诺沙星注射液中非法添加磺胺嘧啶的检测.     

恩诺沙星联合用药对MRC-5细胞生长抑制的研究

本研究旨在评价恩诺沙星分别与3种抗菌药（环丙沙星、氟苯尼考和磺胺二甲嘧啶）的联合毒性。选用MRC-5细胞作为细胞模型模拟抗菌药的混合污染对肺细胞的损害,设置多个浓度梯度和混合比例,采用CCK-8方法检测4种抗菌药单药对细胞生长的抑制率及恩诺沙星分别与3种抗菌药混合后对细胞生长的抑制率,而后使用Chou-Talalay方法拟合中值效应曲线,计算出联合指数（combination index,CI）。结果显示,在检测浓度范围内,4种单药对MCR-5细胞的生长抑制率随药物浓度增加均呈阶梯状上升,其中氟苯尼考对MCR-5细胞的生长抑制率较低（<4.5%）。3种二元药物组合的混合毒性均表现出了浓度依赖性和混合比例的依赖性,联合使用恩诺沙星与环丙沙星在高、中剂量组下对MRC-5细胞表现协同毒性（CI<1）,极低剂量组下表现为抑制毒性（CI>1）;联合使用恩诺沙星与氟苯尼考对MRC-5细胞的毒性主要是相互抑制的（CI>1）;联合使用恩诺沙星与磺胺二甲嘧啶对MRC-5细胞的毒性可能表现相互促进（CI<1）,也可能表现相互抑制（CI>1）,具体表现与给药剂量和浓度比值有关。本研究表明,在抗菌药的毒性评价中,评估抗菌药的联合毒性是有必要的,使用Chou-Talalay方法可快速高效地完成细胞水平上对抗菌药联合毒性的评估。     

读者入会

忠实读者（吉林四平）：请问磺胺间甲、磺胺对甲、复方磺胺嘧啶钠注射液的区别？ 编辑部：磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）用于全身感染;脑炎首选磺胺嘧啶钠（SD）：此外,磺胺甲曙唑（SMZ）用于泌尿道、消化道和呼吸道感染：乳腺炎首选磺胺二甲氧嘧啶（SM2）。     

问答

忠实读者（吉林四平）：请问磺胺间甲、磺胺对甲、复方磺胺嘧啶钠注射液的区别？ 编辑部：磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）用于全身感染；脑炎首选磺胺嘧啶钠（SD）：此外，磺胺甲曙唑（SMZ）用于泌尿道、消化道和呼吸道感染：乳腺炎首选磺胺二甲氧嘧啶（SM2）。     

猪肉中磺胺类药物残留检测操作要点

目前我国磺胺类药物残留检测对象主要是猪肉,使用的检测方法是(以下简称方法).该检测方法用于测定动物可食性组织中磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺喹恶啉(SQ)单个或混合物的残留量.     

恩诺沙星与磺胺间甲氧嘧啶联合药敏试验

为研究氟喹诺酮类药物和磺胺类药物在治疗鸡大肠杆菌病时的相互作用,本试验采用肉汤稀释棋盘法,用恩诺沙星和磺胺间甲氧嘧啶对鸡致病性大肠杆菌进行了体外联合药敏试验。单药恩诺沙星和磺胺间甲氧嘧啶的最小抑菌浓度（MIC）分别为32、256μg／mL;联合用药的MIC分别为8μg／mL和32μg／mL,经计算FIC指数为0．375。结果表明,恩诺沙星与磺胺间甲氧嘧啶联合用药对大肠杆菌呈现协同抗菌作用。     

饲料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑的检测方法

试验的目的是建立测定饲料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑含量的反相高效液相色谱方法。以ZorbaxSB-C18为色谱柱;乙腈-冰乙酸-水(18+1+81)为流动相;紫外检测波长为285nm;柱温为40℃;进样量为10μl。结果表明,线性在20～160mg/kg良好,平均回收率较高;检测限达到10mg/kg。该法准确度高、精密度好、简便快速。     

HPLC法测定复方磺胺对甲氧嘧啶片中磺胺对甲氧嘧啶的含量

建立了兽药复方磺胺对甲氧嘧啶片中磺胺对甲氧嘧啶的高效液相色谱测定法,以C₁₈为固定相,0.1%磷酸溶液－乙腈(80：20)为流动相,流速为1.0ml/min,柱温40℃,检测波长为270nm。磺胺对甲氧嘧啶的线性范围为5.0－100μg/mL,回归方程为Area=33.5583726*Amt－12.147672(n=5),相关系数为0.99997。     

Evaluation of Joint Toxicity of Enrofloxacin and Three Antimicrobials on MRC-5 Cells

The aim of this study was to evaluate the combined toxicity of enrofloxacin with each of three antimicrobials (ciprofloxacin,florfenicol and sulfamethazine).MRC-5 cells were used as a cell model to simulate the damage of lung cells caused by mixed contamination of antimicrobials.Multiple concentration gradients and mixing ratios were set.CCK-8 method was used to determine the inhibition rate of cell growth caused by four antimicrobials and the inhibition rate of cell growth caused by enofloxacin mixed with three antimicrobials,respectively.Then Chou-Talalay method was used to fit the median effect plot and to calculate the combination index (CI) value.The results showed that the growth inhibition rates of MCR-5 cells caused by four single drugs went up in a step-like manner with the increase of drug concentration in the tested concentration range,among them,the growth inhibitory rate of MCR-5 cells by florfenicol was low (<4.5%).The combined toxicity of the three binary combinations showed a concentration-dependent and mixing-ratio dependence.Mixing enrofloxacin and ciprofloxacin showed synergistic toxicity (CI<1) on MRC-5 cells at high and middle concentration groups,and antagonistic toxicity (CI>1) at the very-low-concentration groups.Mixing ciprofloxacin and florfenicol mainly showed an inhibited toxicity (CI>1).Binary combination enrofloxacin and sulfamethazine might present either a synergistic joint toxicity (CI<1) or an antagonistic joint toxicity (CI>1) as the concentration and mixing ratio changing.This study showed that it was necessary to assess the combined toxicity of antimicrobials in the toxicity evaluation of antimicrobials.Using Chou-Talalay method,the joint toxicity of multiple antimicrobials could be quickly and efficiently determined at cellular level.     

乳酸恩诺沙星对小鼠的急性毒性试验

研究了乳酸恩诺沙星对小鼠的急性毒性,用寇氏法计算实验小鼠的半数致死量(LD50)和95%置信限。结果表明,乳酸恩诺沙星对小白鼠灌胃染毒及腹腔注射染毒的LD50分别为3579mg/kg和571.3mg/kg,其95%可信限分别为3011～4255mg/kg和498.3～655.1mg/kg。研究提示,乳酸恩诺沙星属低毒物质,其可溶性粉能用于开展药效试验。     

恩诺沙星微囊的制备及急性毒性试验

采用乳剂制备技术与微囊制备技术相结合的方法,以甲基纤维素和可溶性淀粉为囊材,制备了恩诺沙星微囊。结果表明,制备的恩诺沙星微囊分散状态良好,平均粒径为47．6μm,粒径分布在20μm～70μm 范围内的微囊占88％,载药量为12．5％±0．40％,具有一定的缓释作用。急性毒性试验结果显示恩诺沙星微囊的 LD50为5968．81 mg／kg,95％可信限为5164．06 mg／kg～6978．86 mg／kg,表明恩诺沙星微囊毒性很低,可以进行药效学试验研究。     

恩诺沙星与乙酰甲喹联用体外抗菌活性研究

为考察恩诺沙星与乙酰甲喹的联合抗菌活性,采用肉汤稀释棋盘法测定了恩诺沙星与乙酰甲喹单用及联用对大肠杆菌、沙门氏菌临床菌株的体外抗菌活性。结果显示:恩诺沙星与乙酰甲喹单独使用对大肠杆菌的最小抑菌浓度为8μg/m L和32μg/m L,对沙门氏菌的最小抑菌浓度为16μg/m L和256μg/m L。两药联用对大肠杆菌和沙门氏菌的FIC指数为0.5和0.75,分别表现为协同作用和相加作用。试验表明,恩诺沙星与乙酰甲喹联用可以增强对大肠杆菌和沙门氏菌感染的治疗效果。     

磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究

试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。     

恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备及质量评价

研制恩诺沙星肺靶向明胶微球(ENR-GMS)并对其进行质量评价。采用乳化-化学交联法制备恩诺沙星肺靶向明胶微球,油镜下观察微球粒径大小及形态,并用显微照相机(Olym-pusDP12-2)拍照做记录。通过紫外分光光度法检测微球中恩诺沙星(ENR)的含量,进而计算得出其载药量和包封率,并通过溶出度测定法探讨其体外释放规律。制成的恩诺沙星肺靶向明胶微球为淡黄色粉末,油镜下大小较均匀,形态圆整、分散性较好,其内可见被包裹的黄色ENR粉末,平均直径约10.26μm。就粒径分布而言,5～12μm的微球占86.66%,载药量为4.51%,包封率为31%,在pH7.4的PBS缓冲液中的释药符合缓释特征,t1/2约为3.8h,比单纯的ENR延长3个多小时。体外释放实验显示前2.5h时释药量约37.02%,至第5.0h之间释药量达80.87%,之后逐步释放,至10h时药物释放累积量占总药量的87.96%。结果表明,制备出的恩诺沙星明胶微球符合肺靶向给药系统的要求,具有较好的缓释性和肺靶向性。     

HPLC法测定恩诺沙星可溶性粉含量

采用HPLC法测定恩诺沙星可溶性粉的含量,色谱柱选用Waters Symmetry C18柱（4.6×150mm,5μm）,流动相为0.025 mol/L磷酸（用三乙胺调节pH至3.0）—乙腈（83∶17）,检测波长为278 nm,柱温25℃,流速1.0 mL/min.结果表明恩诺沙星在20～80 μg/mL的范围内,呈现良好的线性关系,平均回收率为99.3％.通过试验确定本法的检测限为15 μg/mL,定量限为50 μg/mL,且具有良好的专属性和耐用性.运用本法对来自四个不同厂家的恩诺沙星可溶性粉进行含量测定,并与紫外分光光度法测定结果比较,说明HPLC法能准确测定恩诺沙星可溶性粉的含量.     

应用发光细菌法检测饲用抗生素单一及联合毒性的研究

以HgCl2为毒性参照,以等毒性配比法研究了饲用盐酸金霉素、吉他霉素、盐霉素和黄霉素对发光细菌的单一及联合毒性。结果表明:盐酸金霉素、吉他霉素、盐霉素、黄霉素对明亮发光杆菌的急性毒性EC50分别为9.21、146.13、4.24 mg/L和134.68 mg/L,发光细菌的相对发光强度(RLU)随着抗生素浓度的提高而降低,并分别在2~16、25~200、1~8 mg/L和25~200 mg/L范围内呈良好线性关系;多元饲用抗生素对发光细菌具有联合毒性的作用,吉他霉素与盐酸金霉素、盐霉素和黄霉素3种抗生素的二元组合对发光细菌的联合毒性表现为较强的协同作用,而盐酸金霉素、盐霉素和黄霉素两两分别组合对发光细菌的联合毒性表现为拮抗作用;三元及四元抗生素混合体系对发光细菌的联合毒性均表现为拮抗作用。     

Pharmacokinetics of Enrofloxacin and Its Metabolite Ciprofloxacin after Intramuscular Administration of Enrofloxacin in Goats

The pharmacokinetics of enrofloxacin and its active metabolite ciprofloxacin were investigated in goats after a single intramuscular administration of enrofloxacin at 2.5 mg/kg body weight. The plasma concentrations of enrofloxacin and ciprofloxacin were determined simultaneously by a HPLC method. The peak concentrations (C _max) of enrofloxacin (1.13 g/ml) and ciprofloxacin (0.24 g/ml) were observed at 0.8 and 1.2 h, respectively. The elimination half-life (t _1/2), volume of distribution (V _d(area)), total body clearance (Cl_B) and mean residence time (MRT) of enrofloxacin were 0.74 h, 1.42 L/kg, 1329 ml/h per kg and 1.54 h, respectively. The t _1/2, area under the plasma concentration–time curve (AUC) and the MRT of ciprofloxacin were 1.38 h, 0.74 g h/ml and 2.73 h, respectively. The metabolic conversion of enrofloxacin to ciprofloxacin was appreciable (36%) and the sum of the plasma concentrations of enrofloxacin and ciprofloxacin was maintained at or above 0.1 g/ml for up to 4 h. Enrofloxacin appears to be useful for the treatment of goat diseases associated with pathogens sensitive to this drug.