北京地区警犬皮肤葡萄球菌分离鉴定及耐药性试验

<正>犬脓皮病,又称为犬细菌性皮肤病或犬细菌性毛囊炎,为由细菌引起的犬皮肤及其相关结构的感染~([1]),系犬常见病之一。该病具有发病率高、疗程长、易复发的特点,加上日益严重的细菌耐药问题,使得该病的治疗愈发困难。而葡萄球菌被认为是引起人与动物化脓感染的主要的病原菌之一~([1])。本试验对北京地区警犬脓皮病病例及健康警犬体     

动物源耐甲氧西林金色葡萄球菌的耐药性分析

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种人类共生菌,并引起全球感染。SA感染的高发率主要是由细菌很容易对抗生素产生耐药性导致的,而耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产生特别是多药耐药SA的出现使得动物临床治疗变得异常困难。本文针对MRSA的耐药机制和其多药耐药机制以及耐药基因的传播作简要概述,旨在为兽医临床合理指导抗生素用药和控制细菌耐药性的发展提供理论依据。     

2007至2020年浙江省动物源细菌耐药性监测进展

畜禽养殖中抗生素滥用造成动物源耐药细菌大量产生与传播,已经成为重点关注的公共安全问题。我国细菌耐药情况较为严重,对于动物源细菌耐药性关注度亟待加强。本文将从浙江省近年动物源大肠埃希菌、弗格森埃希菌、沙门菌、弯曲杆菌、肠球菌及葡萄球菌的分离情况、耐药情况以及所发现的获得性耐药基因方面进行综述,为畜禽养殖行业的科学合理用药提供理论指导,完善动物源细菌耐药监测网,为抗菌药减量化行动提供依据,以期更好地遏制浙江省动物源细菌耐药性问题。     

猪源大肠杆菌耐药基因研究获突破

<正>抗生素的滥用造成对抗生素有耐药性和多重耐药性超级细菌的产生,这一现象已成为全球性难题。为了探究细菌耐药性的分子机制,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究团队开展了猪源大肠杆菌携带多重耐药基因分子机制的研究,并取得重要进展,为解析细菌多重耐药机制提供了理论依据,也为消除细菌耐药性提供了解决方案。自2000年首次在松鼠葡萄球菌中发现cfr基因至今,该基因曾一度被认为专属于阳性菌的多重耐药基因。动物细菌病研究团队的张万江博士     

中国部分地区犬源伪中间葡萄球菌的流行特征分析

旨在调查犬源伪中间葡萄球菌的耐药性和分子特征，本研究自2017年11月—2019年4月收集601份送检至中国农业大学动物医院检验科和第三方检测机构的犬源临床样本，分离鉴定伪中间葡萄球菌；采用琼脂稀释法检测伪中间葡萄球菌对14种抗菌药物的敏感性；所有分离菌株均进行全基因组测序（WGS），并从WGS结果中获取耐药基因、多位点序列分型（ST）和葡萄球菌染色体基因盒（SCCmec）分型。结果显示，共分离到75株伪中间葡萄球菌（分离率为12.5%），其中包括42株（56%）耐甲氧西林伪中间葡萄球菌（MRSP）和33株（44%）甲氧西林敏感伪中间葡萄球菌（MSSP）；所有菌株均对青霉素、阿奇霉素、克林霉素、多西环素、环丙沙星、恩诺沙星、苯唑西林和氯霉素高度耐药，对利奈唑胺、万古霉素、阿米卡星和利福平敏感，多重耐药率达90.7%；所有MRSP均具有多重耐药性；75株伪中间葡萄球菌中检测到19种耐药基因，blaZ和aac（6'）-aph（2″）检出率最高，均为92%（69/75）；共发现70种ST型，54种为新ST型，无优势ST型；23株（54.7%） MRSP为SCCmec V型。综上表明，犬源伪中间葡萄球菌存在严重的多重耐药性；MRSP和MSSP均具有较大的遗传多样性。     

禽源产色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解禽源产色葡萄球菌的耐药性，本研究从发病金陵花鸡中分离到1株产色葡萄球菌GZQX2019，并进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析、药敏试验、部分耐药与肠毒素基因检测和动物回归试验。结果显示，分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面凸起、边缘整齐的溶血现象白色菌落；革兰氏染色镜检呈葡萄串状球菌。生化试验结果显示，分离菌蔗糖、精氨酸水解酶、木糖等反应阳性，尿素、木糖醇、麦芽糖等反应阴性。系统进化树显示，分离菌与产色葡萄球菌处于同一分支；药敏试验结果显示，分离菌对红霉素、头孢他啶、多西环素等6种抗菌药耐药，对头孢呋辛、头孢哌酮、新霉素等11种抗菌药敏感。耐药与肠毒素基因检测结果显示，分离菌能检测出热敏感细胞肠毒素基因Alt，耐大环内酯类基因ermB，β-内酰胺类基因VIM、TEM，四环素类基因tetB。动物回归试验结果显示，分离菌对小鼠和雏鸡致病能力不强或者没有致病力。试验成功分离到1株禽源产色葡萄球菌，丰富了禽源产色葡萄球菌的认知。     

宠物医院细菌消毒剂的抗性分析

室内环境中杀灭病原菌的有效手段是消毒,但不合理使用消毒剂会导致细菌对其抗性增加,存在大量致病菌的宠物医院更容易出现消毒剂抗性细菌。近年来,对消毒剂抗性的研究主要集中在抗性基因上,发现消毒剂抗性与细菌耐药之间在基因水平上存在联系,这将带来潜在的公共卫生问题。论文对宠物医院临床消毒剂的应用现状及使用效果进行分析,重点阐述细菌消毒剂抗性及其与耐药性之间的关系,以期为宠物医院的消毒工作提供依据。     

七类常见抗菌药耐药机制及耐药基因国内流行现状

为了解动物源细菌的抗菌耐药情况,加强耐药性的监测与控制,针对常见的七大类抗菌药物,阐述了它们的耐药机制以及耐药基因的国内流行现状。有研究显示:动物源细菌对各类抗菌药均有不同程度的耐药,且耐药基因种类繁多、分布广泛;流行率和检测率较高的耐药基因多数能在质粒、整合子、转座子等移动元件上被检出,并以水平传播的方式扩散;同一质粒上检测出数种耐药基因,这些质粒是细菌产生多重耐药现象的重要原因。本文对监管部门出台相应控制方案提供了理论依据。     

禽源产色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解禽源产色葡萄球菌的耐药性,本研究从发病金陵花鸡中分离到1株产色葡萄球菌GZQX2019,并进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析、药敏试验、部分耐药与肠毒素基因检测和动物回归试验。结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面凸起、边缘整齐的溶血现象白色菌落;革兰氏染色镜检呈葡萄串状球菌。生化试验结果显示,分离菌蔗糖、精氨酸水解酶、木糖等反应阳性,尿素、木糖醇、麦芽糖等反应阴性。系统进化树显示,分离菌与产色葡萄球菌处于同一分支;药敏试验结果显示,分离菌对红霉素、头孢他啶、多西环素等6种抗菌药耐药,对头孢呋辛、头孢哌酮、新霉素等11种抗菌药敏感。耐药与肠毒素基因检测结果显示,分离菌能检测出热敏感细胞肠毒素基因Alt,耐大环内酯类基因ermB,β-内酰胺类基因VIM、TEM,四环素类基因tetB。动物回归试验结果显示,分离菌对小鼠和雏鸡致病能力不强或者没有致病力。试验成功分离到1株禽源产色葡萄球菌,丰富了禽源产色葡萄球菌的认知。     

整合子-基因盒系统与金黄色葡萄球菌耐药相关性的研究现状

金黄色葡萄球菌在临床革兰阳性菌感染中的检出率居首位,金黄色葡萄球菌分离株的耐药率呈逐年升高趋势,并且多重耐药菌株也在不断增加。分析和阐明金黄色葡萄球菌耐药机制对控制细菌耐药性的产生与传播至关重要。整合子-基因盒系统能够识别外源性基因盒,通过位点特异性重组捕获或切除耐药性基因盒使捕获的耐药性基因盒表达,在细菌间耐药基因的扩散和多重耐药性的产生中起到重要作用。文章主要综述了整合子-基因盒系统与金黄色葡萄球菌获得性耐药之间的关系。     

犬猫皮肤病细菌性病原分离鉴定及天然产物抑菌效果分析

【目的】 分离鉴定武汉市患皮肤病犬猫细菌性病原,并探索其对传统抗菌药物与天然活性产物藤黄酸(GA)和6-溴靛玉红-3’-肟(BIO)的敏感性。【方法】 对患皮肤病犬猫采样并分离病原,通过生长特性观察、革兰氏染色镜检、PCR等方法鉴定并利用SPF小鼠验证致病性;通过药敏纸片验证其对传统药物的耐药性,并测定天然产物对其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。【结果】 分离得到2株金黄色葡萄球菌、3株伪中间型葡萄球菌、2株猫葡萄球菌、1株犬链球菌及1株奇异变形杆菌。SPF小鼠皮肤创伤感染验证分离菌株均有致病性。犬链球菌及奇异变形杆菌对各自受试药物均敏感;葡萄球菌对复方新诺明、青霉素、红霉素、四环素、左氧氟沙星、苯唑西林、庆大霉素、克林霉素及氯霉素存在不同程度耐药。天然活性产物GA和BIO对上述9株菌均具有良好抑菌效果,且除分离菌株F5外GA对分离菌株的MIC值均小于BIO。【结论】 本研究共分离得到5种、9株犬猫皮肤细菌。犬链球菌、奇异变形杆菌对传统抗菌药物均敏感,部分葡萄球菌存在耐药。GA和BIO对犬猫皮肤病原菌均有明显抑菌活性,显示其可作为防控犬猫细菌性皮肤病的候选药物。     

无乳链球菌毒力基因与耐药性的相关性研究进展

乳房炎是奶牛养殖业中最常见的一种疾病，会造成奶牛乳腺发炎肿胀，使产奶量大幅下降。作为一种多因素性疾病，奶牛乳房炎发病原因复杂，饲料污染、病原菌感染以及环境因素均可以导致乳房炎的发生。无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）作为奶牛乳房炎的主要致病菌，常会造成乳腺组织的局部炎症，随着无乳链球菌分离率的增加以及抗菌药物的滥用，其对抗菌药物的耐药性逐步攀升，给临床治疗带来了一定的困难。此外，无乳链球菌能够定植于宿主体内，破坏宿主的免疫系统，而其自身毒力因子会引起宿主机体疾病的产生。随着相关研究的深入，发现毒力与耐药性本身互为关联，耐药性的增强以不同的方式影响毒力，表明了耐药性与毒力因子之间存在着一定的相关性。笔者主要回顾了国内外链球菌以及其他细菌毒力基因与耐药性之间相关性的研究进展，从无乳链球菌毒力因子及耐药性等多种角度入手，分析了无乳链球菌的毒力机制以及毒力基因，并对近5年国内不同地区无乳链球菌耐药性进行统计，从细菌种类、环境和相关机制对链球菌的毒力和耐药性之间的关系展开综述，以期为无乳链球菌所引起的临床症状筛选出合理的抗菌药物并对毒力基因与耐药性的相关性研究提供理论参考。     

Prevalence of antimicrobial-resistant staphylococci in nares and affected sites of pet dogs with superficial pyoderma

Currently, antimicrobial-resistant staphylococci, particularly methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP), are frequently isolated from canine superficial pyoderma in Japan. However, little is known regarding the nasal prevalence of MRSP in pet dogs. Here, we determined the prevalence of antimicrobial-resistant staphylococci in nares and affected sites of pet dogs with superficial pyoderma. Of the 125 nares and 108 affected sites of pet dogs with superficial pyoderma, 107 (13 species) and 110 (eight species) staphylococci strains, respectively, were isolated. The isolation rate of S. pseudintermedius from pyoderma sites (82/110 strains, 74.5%) was significantly higher than that from nares (57/107 strains, 53.3%) (P<0.01). Notably, the prevalence of MRSP (18/57 strains, 31.6%) in nares was equivalent to that in pyoderma sites (28/82 strains, 34.1%). Furthermore, the phenotypes and genotypes of antimicrobial resistance in MRSP strains from nares were similar to those from pyoderma sites. Our findings revealed that the prevalence of antimicrobial-resistant staphylococci in the nares of pet dogs with superficial pyoderma is the same level as that in affected sites. Therefore, considerable attention should be paid to the antimicrobial resistance of commensal staphylococci in companion animals.     

基于转录组学技术分析绿原酸对鸡源大肠杆菌抑菌及耐药消除的作用机制

为探究绿原酸对鸡源抗生素耐药大肠杆菌抑菌及耐药消除的作用机制，以影印法分离绿原酸浓度为1.25 mg/mL（亚抑菌浓度，1/2 MIC）的LB肉汤培养的第3代禽源大肠杆菌耐药逆转菌株，以微板法测定耐药逆转菌株的左氧氟沙星最小抑菌浓度（MIC），并进一步通过转录组测序方法分析绿原酸消除大肠杆菌耐药性的分子机制。结果显示：耐药逆转菌株对左氧氟沙星的MIC由16 μg/mL降低至4~8 μg/mL，说明1.25 mg/mL的绿原酸可在一定程度上消除耐药大肠杆菌的左氧氟沙星耐药性。为进一步解析绿原酸对鸡源大肠杆菌耐药消除作用的分子机制，通过转录组测序方法对耐药性消除前后鸡源大肠杆菌基因表达水平进行对比分析发现：绿原酸作用后共有12个基因的表达量发生显著下调，通过荧光定量PCR验证结果基本一致。经过GO功能富集分析和KEGG代谢通路富集分析发现，差异表达基因在功能上集中于膜组成成分和DNA重组，在代谢通路富集中差异基因均与代谢相关，差异基因中bhsA、cysP为Coli-HB染色质转录RNA（GenBank登录号：CP020933），oqxA、oqxR、emaA、pinR、xerD、folA、repA、repC、adhP、IS26为Coli-HB质粒1转录RNA（GenBank登录号：CP020934）。从差异表达基因的分布可以看出，绿原酸可以抑制细菌DNA重组、使细菌抗逆性减弱、抑制耐药基因活性等，在一定程度上消除大肠杆菌的左氧氟沙星耐药性，起到抑菌及耐药消除作用。     

广西地区禽致病性大肠杆菌的耐药性分析

禽致病性大肠杆菌(APEC)是一种能引起鸡、火鸡和其他鸟类肠外感染的致病性大肠杆菌,可以导致肉鸡气囊炎、败血型全身感染、蜂窝织炎和蛋鸡输卵管炎、腹膜炎。为了了解广西地区禽致病性大肠杆菌的耐药表型以及耐药基因的携带情况,本实验室对2019年从广西分离到的69株APEC采取K-B药敏纸片法进行药敏试验,药敏结果显示,69株APEC对氧氟沙星(56.5%)、恩诺沙星(69.6%)、氟苯尼考(79.7%)、氨苄西林(91.3%)、四环素(98.6%)耐药率较高,而对美罗培南、丁胺卡那霉素、呋喃妥因均不耐药;其中,多重耐药现象严重,对10种抗菌药物以耐4种、5种、6种的情况居多。同时用PCR扩增的方法对其耐药基因,包括碳青霉稀类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、黏菌素类、喹诺酮类、四环素类在内的6大类共计17种耐药基因进行了检测。特别值得关注的是,发现了7株携带mcr-1基因的多黏菌素耐药APEC。药敏纸片法检测菌株的耐药表型和耐药基因存在一定关联度。本研究可为养禽场临床用药提供参考,同时为减缓耐药菌传播、降低对人类健康和公共卫生安全威胁提供依据。     

Antimicrobial-resistance trends in bacterial isolates from companion-animal community practice in the UK

We conducted a longitudinal, retrospective investigation of antimicrobial resistance in bacterial isolates obtained from canine and feline clinical cases in veterinary community practice in UK (1989–1997). Individual-drug resistance was examined using isolates of Escherichia coli and Staphylococcus spp. as Gram-negative and Gram-positive indicator organisms, respectively. The annual prevalence of resistance was calculated for each organism to each of nine (for E. coli) and 11 (for Staphylococcus spp.) selected antimicrobials. The annual prevalence of multiple-drug resistance (MDR) was calculated for E. coli, Proteus spp., Pseudomonas spp., staphylococci and streptococci.

Using a chi-square test for trend, significant rising trends were identified in individual resistance of E. coli to clavulanate-amoxycillin and streptomycin, and in MDR of E. coli, Proteus spp. and Pseudomonas spp.. Declining trends were identified in individual resistance of Staphylococcus spp. to ampicillin and penicillin. Comparison with previously reported results from a contemporaneous investigation of companion-animal hospital patients indicated that selection pressures acting on the two populations overlapped but were not identical.     

中草药对细菌耐药质粒的消除作用研究

动物养殖中常见病原菌对抗菌药物的耐药性呈逐年上升的趋势,引起了广大科研工作者的极大关注。病原菌耐药性的产生主要与质粒有关,质粒能够将耐药基因传递给环境中的其他细菌,进而引起多重耐药菌株的出现。本文就细菌耐药现状、细菌耐药性与质粒关系、中草药对细菌耐药质粒的消除效果、中草药消除耐药质粒的机理、存在的问题、中草药对耐药质粒消除的展望这些方面进行简单综述。     

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12：i：1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。