“全胚双氟碳法”制备禽脑脊髓炎琼扩抗原的研究

用禽脑脊髓炎病毒（AEV）Van Rockel毒株接种6日龄SPF鸡胚，感染11 d后，分别收集鸡胚、绒毛尿囊膜及尿囊液、鸡胚剔除羽毛、眼球、爪和喙后与绒毛尿囊膜一起，制成匀浆，反复冻融3次，通过2次氟碳（三氯三氟乙烷）从全胚匀浆中萃取制备AE琼扩抗原（AGP－Ag)用进口标准AE AGP试剂进行标化，结果发现：制备的AD AGP－Ag与标准阳性血清之间的清晰、致密的沉淀线，并与标准AE AGP－Ag的沉淀线完全吻合，表明两者的沉淀反应一致，从而了AE AGP－Ag制备新方法－“全胚双氟碳法”其制备AE AGP－Ag有如下特点：①产量高，平均每3个SPF鸡可获得1mL AE AGP－Ag; ②特异，与类症阳性血清无交叉反应；③敏感，AGP试验中毋需重复加样，普通琼脂即可出线；④稳定性好，保存期长；⑤与标准AE AGP－Ag阳性检出符合率均达100％。本研究表明用“全胚双氟碳法”制备的AEAGP－Ag达到了进口标准，AEAGP－Ag质量，可用于SPF鸡AE抗体的监测，且生产成本低，也可用于商品鸡AEV感染的检测。     

禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制

禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制卢中华张红英于晓军杨霞（河南农业大学，郑州４５０００２）王之岑（淮阳师范学校）张保亮（许昌县畜牧兽医技术中心）禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓＡＥ）是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病。１９３０年首次...     

禽脑脊髓炎冻干活疫苗安全性、最小免疫剂量及免疫效力试验

检测了4批自制禽脑脊髓炎冻干活疫苗的安全性和最小免疫剂量,并对疫苗进行了病毒含量测定和攻毒保护试验。结果表明,鸡接种疫苗后精神、食欲及发育均正常,疫苗安全性良好;接种病毒剂量为500 E ID50时,可使免疫鸡产生可靠的免疫力,抵抗AEV VR株强毒的攻击,降低鸡群发病率,所以该疫苗的最小免疫剂量≤500 E ID50/羽。4批疫苗病毒含量均大于103.5E ID50/羽份,攻毒后保护率均在87.5%以上。     

禽脑脊髓炎油乳剂灭活疫苗免疫效果及免疫机理的研究

 用禽脑脊髓炎病毒 (AEV)不同毒株分别接种易感鸡胚所制作的油乳剂灭活疫苗 ,分别给 4组正常 1周龄雏鸡接种免疫 ,另设 1组SPF雏鸡作空白对照。对免疫前后及攻毒后的雏鸡 ,以琼脂扩散试验 ,淋巴因子的提取 ,血清IgG的分离、纯化及检测 ,鸡胚敏感试验 ,病理学观察为检验手段 ,以期对本油乳剂灭活疫苗的免疫效果作出综合评定 ,同时根据各试验的结果对免疫机理作初步的探讨。结果表明 ,各组试验用疫苗均安全有效 ,雏鸡免疫后体内抗体持续保持高水平 ,雏鸡免疫期至少达 37周 ,子代鸡胚敏感试验保护率≥ 92 .3%以上。免疫机理方面 :以IgG为主的体液免疫在抵抗感染过程中起关键作用 ;细胞免疫也同时存在 ,并与日龄的增长存在一定的相关性 ,而与疫苗接种不存在相关性     

小反刍兽疫弱毒疫苗区域免疫试验研究

为进一步做好免疫工作,掌握免疫基础数据,为主管部门决策提供科学依据,根据农牧厅兽医局安排,青海省动物疫病预防控制中心在德令哈市开展小反刍兽疫弱毒疫苗区域试验,掌握山羊和绵羊进行小反刍兽疫弱毒疫苗免疫后体液免疫抗体消长规律,评价疫苗的安全性和免疫效果。结果表明,疫苗具有良好的免疫效果和较长的免疫持续期,大规模使用对山羊和绵羊的安全性能良好。     

苜蓿多糖对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的影响

用苜蓿多糖作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂对60日龄体重18～20 kg的仔猪进行免疫试验研究.B淋巴细胞和抗体水平监测结果表明,苜蓿多糖可使猪外周血液的B淋巴细胞增多,血清抗体水平提高.攻毒试验表明,参试的2批猪,试验组潜伏期（34～72 h和36～68 h）,明显长于对照组（12～48 h和14～48 h）,发热温度试验组为（40.5～40.9℃和40.6～40.8℃）低于对照组（41.4～42.0℃和41.2～41.7℃）,高热期试验组为（30～96 h和46～98 h）低于对照组（72～148 h和72～146h）.说明苜蓿多糖对猪瘟疫苗免疫效果具有明显的强化作用.     

酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎抗体方法的研究

利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)繁育禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,取其培养物 ,经差速离心提纯 ,做为酶联包被杭原 ,建立了检测AEV抗体的间接酶联免疫吸附试验 ,初步确定了各种反应条件 :抗原包被浓度 16 7μg/ml,待检血清 1∶10 0稀释 ,酶标抗体工作浓度 1∶5 0 0。以阴性血清OD值平均值加上 2个标准差作为界值 ,当待测样品OD值大于界值 0 2 7时 ,判为阳性 ,否则判为阴性。经交叉试验、阻断试验、重复试验和平行试验 ,证实了本试验建立的方法具有良好的特异性和重复性     

807系禽霍乱弱毒菌苗对水禽的免疫试验

经改进研制的807系弱毒菌苗除对火鸡和鸡安全有效外,对鸭和鹅也有良好的保护作用,安全性可靠。对鸭1～100亿活菌接种,经15天观察,既安全,又有较好的免疫性,2次免疫各1亿活菌,间隔15天,96天后攻毒,75％～80％保护。对鹅2～200亿活菌接种,经15天观察,安全性可靠,2次免疫各2亿活菌,间隔15天,80天后攻毒,100％保护。在禽霍乱流行鸭鹅群中作紧急接种,可迅速控制疫病继续发生,效果十分显著。     

母种鸡补充不同硒源对后代肉鸡硒沉积、抗氧化指标及生长性能的影响

选用39周龄岭南黄品种肉用母种鸡240只,按照饲养试验要求分成2组,每组3个重复,分别饲喂添加0.30 mg?kg-1硒水平的亚硒酸钠和DL-硒代蛋氨酸日粮;种蛋按重复分别孵化后,初生雏鸡各选60只,共计360只,饲喂不加硒的相同日粮56 d,研究母种鸡补充不同硒源对后代肉鸡硒沉积、抗氧化指标及生长性能的影响.结果表明:与亚硒酸钠组比,硒代蛋氨酸组显著提高了初生雏鸡、肉成鸡肝、肾和肌肉组织、雏鸡胸腺、肉成鸡血清及种蛋的硒含量(P0.01);提高了初生雏鸡肌肉GSH-Px、SOD和肾脏SOD活力(P0.05)、肌肉和肝脏T-AOC及肾脏GSH水平(P0.01),降低了肌肉和胰脏MDA含量(P0.05);增强了肉成鸡血清和肌肉GSH-Px活力(P0.01)、血清SOD活力、胰和肌肉T-AOC(P0.05);降低了后代肉鸡死亡率和料质量比(P0.05).上述结果提示,母种鸡补充DL-硒代蛋氨酸同比亚硒酸钠能提高种蛋及后代肉鸡组织硒含量,增强后代机体抗氧化功能,降低其死亡率,有利于生长并提高饲料转化率.     

种禽场A亚群禽白血病病原学调查及分离株遗传进化分析

【目的】了解广东地区种禽场A亚群禽白血病病毒(ALV-A)流行情况.【方法】从A、B、C、D 4个种禽场采集1 561份血浆样品,接种DF-1细胞,培养7 d后通过ELISA方法对细胞上清液进行p27抗原检测,通过PCR、间接免疫荧光试验2种方法对p27抗原阳性样品进行鉴定.【结果和结论】从4个种禽场共检出71份阳性样品,外源性禽白血病病毒分离阳性率为4.6%.其中,仅从C种禽场分离到2株ALV-A,命名为GD13-1和GD13-2,前病毒全基因序列分别为7 721和7 715 bp,且GD13-2与J亚群禽白血病病毒混合感染.与国内外其他ALV-A的LTR、gp85核苷酸序列进行分析比对,发现该研究分离的2株ALV-A与国内A亚群分离株SDAU09E2相似度最高,其中与LTR相似性分别为96.9%、97.2%,与gp85相似性分别为98.4%、98.7%;与广东地区5年前ALV-A分离株GD08的LTR核苷酸序列相似性分别为88.9%、89.5%,与gp85相似性分别为98.5%、98.8%.调查结果表明,广东地区部分种禽场内仍然存在ALV-A感染,但ALV-A已经不是流行毒株,且变异程度不大.     

应用PCR对来源于AA肉种鸡的鸡胚、雏鸡进行CAV和ALV检测

应用PCR方法,对来源于山东省3个不同AA肉种鸡场的鸡胚、1日龄雏鸡中的CAV和ALV进行检测,从而了解CAV和ALV在此阶段对肉鸡的感染情况。试验直接采集样品的肝脏、胸腺、骨髓、脾脏、肾脏、法氏囊等组织提取DNA,进行PCR扩增及PCR产物的克隆和序列测定。结果显示,被检的3个肉种鸡场均有这两种病毒的阳性检出,其中CAV的阳性率是20.18%;ALV的阳性率13.49%,二者共感染的阳性率是6.24%。而且感染鸡各组织含量也有所差异,其中CAV以脾脏的最多,ALV以肾脏最多。同时对肝脏进行细菌分离培养时发现存在大肠杆菌、沙门氏菌和霉形体的混合感染。由此可见,在鸡胚和雏鸡体内存在CAV、ALV的感染以及与细菌性疾病的共感染。     

鸡传染性支气管炎疫苗对雏鸡的多重免疫研究

将 2 0 0只 1日龄健康雏鸡随机分为 6组 ,第 1～ 5组分别用 H1 2 0 、H52 和 IB二价油佐剂灭活苗进行单独或多重组合的免疫接种 ,于接种后每隔 7d测 1次 HI抗体 ,并于第 73天用肾型 IBV强毒攻击 ,观察各组的保护率 ,第 6组不免疫作为对照。结果显示 ,H1 2 0 弱毒苗单独免疫组、H1 2 0 +IB二价油佐剂灭活苗组、H1 2 0 +H52 弱毒苗组、IB二价油苗 1次免疫组和 IB二价油苗 2次免疫组的保护率分别为 5 7.1% ,85 .8% ,6 7% ,83.3%和 80 % ,非免疫对照组保护率为 5 0 %。试验结果表明 ,H1 2 0 与 H52 弱毒苗对肾型 IBV的保护力弱 ,H1 2 0 +IB二价油佐剂灭活疫苗与 IB二价油佐剂灭活苗 1次和 2次免疫均可获得对肾型 IBV较高的保护率 ,且 H1 2 0 与 IB二价油佐剂灭活苗同时免疫可获得长时间的保护性抗体     

Effect of in ovo zinc injection on the embryonic development,tissue zinc contents,antioxidation, and related gene expressions of broiler breeder eggs

Two experiments were conducted to investigate the effect of in ovo zinc(Zn) injection on the embryonic development, tissue Zn contents, antioxidation and related gene expressions of fertilized eggs of Arbor Acres broiler breeders. Experiment 1 was conducted to determine an optimal embryonic age for early in ovo injection. A total of 720 fertilized eggs with similar weights were randomly allotted to 4 treatments with 6 replicates per treatment and 30 eggs per replicate in a completely randomized design. The eggs were injected with 0.1 m L sterilized water at 3, 6 and 9 embryonic days of incubation(E3, E6 and E9) or non-injection(the control), respectively. The results from experiment 1 showed that E3 and E6 injections increased(P0.05) the embryonic mortalities, and decreased(P0.05) hatchabilities compared to the non-injected control, but no differences(P0.05) between E9 injection and the non-injected control were observed in either embryonic mortality or hatchability. The findings suggest that the E9 is the optimal embryonic age for early in ovo injection. In experiment 2, a total of 672 fertilized eggs with similar weights were randomly allocated to 7 treatments with 6 replicates per treatment and 16 eggs per replicate in a completely randomized design. The eggs were injected with 0(the negative control), 50, 100, 150, 200, or 250 μg Zn/egg as reagent grade Zn SO4·7 H2 O in a 0.1-m L solution, or non-injection(the positive control), respectively at E9–10. The results from the experiment 2 demonstrated that no differences(P0.05) among 50 and 100 μg Zn/egg groups and the negative control were observed in the embryonic mortality and hatchability, however, the injection of 200 μg Zn/egg increased(P0.05) the embryonic mortality, and injections of 150 and 200 μg Zn/egg decreased(P0.05) hatchabilities compared with the controls. The embryonic tibia Zn contents at E20 were increased(P0.05) by injections of 150, 200 and 250 μg Zn/egg. Zinc injection did not affect(P0.05) malonaldehyde(MDA) contents, copper-and Zncontaining superoxide dismutase(Cu Zn SOD) activities and m RNA expression levels in the liver and heart of chick embryos at E15 and E20. Compared with the negative control, injections of 50, 150 and 200 μg Zn/egg up-regulated(P0.05) the metallothionein(MT) mR NA expression levels in the embryonic liver at E20. These results indicated that in ovo Zn injections increased Zn contents in the embryonic tibia and MT m RNA expression levels in the embryonic liver at E20, however, injections of 150–200 μg Zn/egg were harmful to the embryonic development.     

鸡传染性支气管炎弱毒苗的毒力返强检测

将鸡传染性支气管炎疫苗毒接种10日龄鸡胚,并传至12代,观察鸡胚病变,于72 h收集尿囊液进行负染电镜观察和血凝试验.透射电镜观察到典型的冠状病毒颗粒,致鸡胚的典型病变作用和血凝活性随培养代次的增加显著增强.结果表明,该弱毒苗病毒毒力返强,存在安全隐患.     

H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律的研究

通过对父母代肉鸡、水禽禽流感病毒H5血清血凝抑制抗体水平连续跟踪监测。探讨Hs亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律。结果表明：雏鸡7日龄时母源抗体水平达最大值,20日龄时母源抗体下降到极低水平,雏鸡最佳首次免疫日龄为10日龄左右,二次免疫应根据鸡群母源抗体水平于首次免疫后100d左右进行。雏鹅、鸭3日龄进行首次免疫,水禽对禽流感疫苗产生良好的免疫应答,并于免疫后25-30d达到抗体高峰,但首次免疫抗体维持时间不长,最佳二次免疫时间应在首次免疫后30d左右进行。     

抗生素与新城疫疫苗联合应用对肉鸡抗体生成的影响

为探讨抗生素与新城疫I系疫苗联合使用对肉鸡抗体生成的影响,选取青霉素、链霉素、利高霉素和头孢噻呋分别与新城疫I系疫苗联合使用,测定各组疫苗稀释液的pH值,并对9日龄鸡胚接种,检测鸡胚尿囊液血凝(HA)效价。同时对20日龄的肉鸡进行肌肉注射免疫,并于免疫当日及免疫后第7、14、21、28 d采血,测定血清抗体血凝抑制效价(HI)。结果表明,各加药疫苗稀释液的pH值与生理盐水疫苗组对比差异极显著;各加药疫苗组的鸡胚HA效价、HI效价与生理盐水疫苗组对比均无无显著差异。研究表明,青霉素、链霉素、利高霉素和头孢噻呋与新城疫I系疫苗联合使用不会降低免疫效果,可以联合使用。     

减毒沙门氏菌介导H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用研究

构建获得含有H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组真核表达质粒pCAGGS-HA。重组质粒电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,获得重组沙门氏菌SL7207(pCAGGS-HA)。重组菌SL7207(pCAGGS-HA)以5×109cfu的剂量2次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡后,再以油乳剂灭活疫苗加强免疫1次,并设立重组菌单独免疫组、灭活苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。联合免疫组和重组菌单独免疫组的小肠黏膜抗体效价与其他组之间存在显著差异(P<0.05),且两组的攻毒免疫保护水平与空载体组之间差异显著(P<0.05),其中联合免疫组的免疫保护率最高,达100%,而灭活苗免疫组保护率为80%,表明减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用具有良好的免疫协同作用。     

不同样品对黄羽种鸡禽白血病病毒净化检测效果的影响

【目的】评估黄羽种鸡禽白血病的净化工作,比较源于同一鸡群不同样品对禽白血病病毒(ALV)检测结果的影响.【方法】采用ALV抗原ELISA方法对广东一黄羽种鸡场采集的2 691枚种蛋进行检测,根据检测结果采集其中70份不同S/P区间所对应的母鸡抗凝血,分离血浆后分别同时接种于CEF和DF-1细胞,用病毒分离方法进行检测,并用PCR方法进行亚群鉴定.【结果和结论】从送检种蛋蛋清共检出ALV p27阳性样品243份,阳性率为9.03%(243/2 691);蛋清不同ELISA S/P区间所对应的病毒分离情况分别为:蛋清ELISA S/P≥2.0的鸡只其血样CEF和DF-1细胞病毒分离率均为100%;1.5≤S/P2.0的鸡只病毒分离率均为88.9%;1.0≤S/P1.5的鸡只病毒分离率均为85.7%;0.2≤S/P1.0的鸡只病毒分离率分别为60%~75%(CEF)和40%~50%(DF-1);0.1≤S/P0.2的鸡只病毒分离率为62.5%(CEF)和50%(DF-1);S/P0.1的鸡只分别为27.2%(CEF)和9.1%(DF-1)的病毒分离率.PCR结果显示,所有7份CEF+DF-1-的CEF培养物中有6份为内源性ALV-E.研究表明,在蛋清ELISA检测时,S/P越高的阳性蛋清样品其对应母鸡越可能是外源性ALV病毒血症阳性;有一定比例S/P较低的阳性蛋清样品是由对应母鸡体内的内源性ALV排毒所致;而净化初期少数蛋清S/P为阴性的蛋清,其对应母鸡仍可能检出外源性ALV,说明在黄羽种鸡外源性ALV净化方案中单独使用1次蛋清ELISA检测可能会给禽白血病的净化检测造成一定的"误诊"和"漏检".