壳寡糖诱导烟草抑制TMV增殖的研究

采用ELISA-DSM法和半叶枯斑法,研究了壳寡糖诱导对普通烟(Nicotiana tabacum)体内TMV 增殖的影响。结果表明,普通烟经50μg/mL壳寡糖溶液诱导处理后,其对TMV的侵染表达了高水平的系统抗病性,显症推迟4～7 d,平均严重度降低了82．9％。ELISA-DSM法检测结果表明,壳寡糖诱导处理的普通烟植株体内病毒浓度明显降低;在接种后10 d,接种叶片OD值仅为0．400,相当于同期不诱导对照的23．0%;新生叶片OD 值为0．190,相当于同期不诱导对照的38．7％。以发病普通烟叶片为接种体,利用半叶法接种心叶烟(Nicotiana glutinosa),结果表明,壳寡糖诱导处理大大减少了枯斑数目;以接种后10 d的壳寡糖处理叶片为接种体,平均半叶枯斑数为9．25,仅为不诱导对照的19．5%;以同期新生叶为接种体,平均半叶枯斑数为0．630,为不诱导对照的 25．0%。以上两种方法的检测结果均证明,壳寡糖诱导处理可以有效抑制普通烟体内的TMV增殖。通过对壳寡糖 (低分子质量)处理与壳聚糖(高分子质量)处理的比较发现,分子质量的差异不影响其对病毒增殖的抑制效果。     

水杨酸诱导烟草抗TMV作用的研究

SA喷雾处理烟草叶片可诱导烟草获得对TMV的抗性.用不同浓度的SA溶液处理心叶烟(Nicotiana glutinosa)以测定其抑制病斑的最佳浓度,并测定烟草品种K326(N.tabacum)体内防御酶系变化.结果表明:8 mmol/L SA病斑抑制效果最好,抑制率达到57.14%,SA在心叶烟上的防效在诱导处理后7d达到最佳.同时,SA处理可导致烟草品种K326叶片的PAL、POD、SOD活性不同程度提高,表明SA可诱导烟草对TMV的抗性,提高烟草的免疫能力.     

草酸青霉菌果胶酶诱导烟草抗TMV的研究

本试验就草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)的固态发酵提取产物——果胶酶粗酶液诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)的抗性进行了研究。以不同浓度果胶酶粗酶液喷雾处理2个烟草品种,超过100 U/mL的各浓度处理,病斑抑制率均达到50%以上。通过果胶酶诱导烟草抗病的时效性、加强诱导的效果、系统诱导抗病性、处理方法不同对烟草抗TMV效果以及果胶酶液对TMV病毒毒性的研究,结果表明:诱导处理2、4d后接种TMV病毒,果胶酶的诱导抗病效果最明显,病斑抑制率在50%左右;二次加强诱导处理可以提高烟草抗TMV的效果;果胶酶可诱导烟草产生对TMV的系统获得抗性;叶面喷雾果胶酶处理方法,对烟草抗TMV的效果最显著;果胶酶液中不含有影响TMV致病力的因子。由此表明,果胶酶对TMV的防治是通过激发烟草植株体内一系列抗病防御反应而增强自身抗病能力的。     

抗烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草的初步选育

 病毒病是云南烤烟生产上的重要病害,目前尚无有效的防治手段,本研究试图采用植物基因工程技术,将TMV54KD蛋白基因转人云南烤烟栽培品种,获得抗TMV的转基因植株,减少由TMV危害造成的重大经济损失,用携带植物抗病毒基因表达载体的根癌农杆菌LBA4404菌株转化云南烤烟栽培品种红花大金元,获得了大量转基因植株,戴体质粒上含有卡那霉素抗性标记基因(NPTII)和CaMV35s启动子控制的烟草花叶病毒(TMV) 54KD蛋白基因,烟草叶片与携带载体质粒的根癌农杆菌共培养后,将其转移到含50μg/ml卡那霉素(Km)的MS+2.0mg/m16-BA+0.1mg/LNAA培养基上培养筛选,2-3周后分化出芽,切下小芽转移到含50μg/ml卡那霉素的MS+0.2mg/ml NAA的培养上进一步培养基筛选并使转化体生根,再对生根植株叶片进行Km抗性鉴定,结果表明,Km抗性标记基因(NPTII)在烤烟植株中已得以表达,间接证明TMV54KD蛋白基因已整合到烤烟植株的基因组中,抗性鉴定结果表明,转基因植株对TMV摩擦接种表现出明显抗性,选择抗性植株,单株收种子,以对其后代抗性的遗传稳定性研究.     

芳香作物精油对烟草苗期花叶病毒病(TMV)的预防试验研究

选择柠檬草、茶树、桉叶3个不同芳香作物精油,在烟苗4~6叶期,对烟苗花叶病毒病进行预防试验。结果表明,柠檬草精油具有良好的预防效果,施用浓度8万倍时仍有84%的预防效果,是烟草苗期花叶病毒病预防的生物制剂,具有较好的开发应用前景。     

PtWRKY14 基因转化烟草及对 TMV 的抗性影响研究

PtWRKY14 是从毛白杨中获得的WRKY 基因,为研究PtWRKY14 基因对植物抗病性的影响,构建了毛 白杨PtWRKY14 基因的植物表达载体pBI121-W14,通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,PCR 与Southern 杂交 进行转基因烟草鉴定。对获得的转基因烟草植株进行烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV）的接种试验,结果表 明PtWRKY14 基因的转化使烟草对TMV 的抗性增强。荧光定量PCR 检测结果表明,TMV 接种后,转基因烟草中 PtWRKY14 的表达量显著上调,同时转基因烟草中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD）、过氧化物酶(Peroxidase,POD）、过氧化氢酶(Catalase,CAT）的表达量均高于对照组。因此,PtWRKY14 可能通过上调SOD、POD、 CAT 的表达从而增强植物抗病性。     

壳寡糖诱导和TMV侵染烟草防御酶活性的变化

为了明确壳寡糖诱导烟草对TMV的抗病作用机理,以普通烟为供试材料,用壳寡糖(Chito-oligosaccharide)喷雾处理烟草叶片后再接种烟草花叶病毒(TMV),系统研究了壳寡糖处理对烟草防御酶活性变化的影响。结果表明,壳寡糖喷雾处理普通烟草24 h后再接种TMV,烟草叶片中过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和多酚氧化酶(PPO)活性较对照都有明显增加,最高活性高峰分别为空白对照的162.3%,118.4%,265.4%,162.3%,其中CAT和SOD峰值提前。壳寡糖处理后,随着酶活性增强,对TMV的系统诱导抗病性得到表达,其二者具有一定的相关性。     

不同品种(系)烟草普通花叶病(TMV)的抗病性鉴定

【目的】筛选地方性优质抗烟草普通花叶病(TMV)烟草种质,为湘中北烤烟抗TMV育种提供优良的种质资源。【方法】采用苗期温室病圃人工接种诱发方法结合大田病圃鉴定,以Coker176为抗病对照、革新3号为中抗对照、G140为感病对照,对9625、金星6007、小黄金0019、401-2、小黄金1025、NGLAUCA、延烟2号等18个烤烟品种(系)进行TMV抗病性鉴定。【结果】在供试品种(系)中,筛选出抗病品种(系)2个,分别为T61和9625,占供试品种(系)总数的11.1%;中抗品种5个,分别为金星6007、03-4-3、胎里黄1061、VESTA33和云烟98,占27.8%;感病品种(系)11个,分别为小黄金0019、401-2、311、小黄金1025、NGLAUCA、延烟2号、大白筋0522、沪金3号、大叶永烟、长脖黄和NC95,占61.1%。【结论】筛选出T61和9625两个抗TMV烤烟品种,可作为湘中北地区抗TMV育种的重要种质资源;同时可在湘中北地区进行T61和9625的示范性推广种植。     

水杨酸对感染TMV烟草叶片PAL活性的影响

用水杨酸(SA)和普通烟草花叶病毒(TMV)诱导且接种抗病烟草品种CV85和感病烟草品种G80,研究其对烟草叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响。结果表明,抗、感病烟草品种对照接种处理的PAL活性均较对照增加;抗病烟草品种CV85诱导和诱导接种处理的PAL活性也较对照增加,且较对照接种增加得更为明显,8d时可达活性高峰;而感病烟草品种G80诱导接种后,其PAL活性先增加后降低,而对照接种后PAL活性升高,17d时达到活性高峰;诱导接种并没有增加感病烟草品种的PAL活性,而增加了抗病烟草品种的PAL活性。可见,外源应用SA控制烟草花叶病毒病在抗病品种上表现更好。     

ChIFN-α基因在烟草中的表达及转基因烟草对TMV的抗性

动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和Western杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果表明ChIFN-α基因的转化赋予了转基因烟草对TMV的抗性,进一步的荧光定量PCR差异表达检测结果表明,该抗性可能与转基因烟草体内防卫基因PR-la、抗病N基因和信号转导MAPK基因受到上调表达有关。     

云南大型真菌提取物及其多糖组分对TMV的抑制作用

 对采自云南的17种大型食用真菌子实体的浸提液及其多糖组分,用半叶法在心叶烟上分别从预防(施用提取物24h后接种病毒)、钝化(提取物与病毒混合后接种)、治疗(接种病毒24h后施用提取物)3个方面进行抗TMV活性检测。结果表明,16种食用菌子实体的浸提液对TMV有较好的预防和钝化作用,预防效果最好的真菌为火碳菌,预防效果达到99.95％。火碳菌、奶浆菌、扫把菌、白奶浆菌、美味牛肝菌、黄虎掌、黄牛肝、黑虎掌、冬瓜菌、红乳菇、北风菌的水浸液对TMV的钝化效果均在80％以上。火碳菌、青杆菌等9种食用菌的多糖组分与其子实体浸提液对TMV的抑制效果相似,表明其多糖组分具有抑制TMV的主要活性成分。实验真菌的治疗效果总体不如钝化效果明显,治疗效果在70%以上的有扫把菌、黄虎掌和冬瓜菌。其中,火碳菌和黄牛肝等对TMV抑制效果较好的食用菌及其多糖可作为环保型农药及生物保健产品的开发对象。     

抗TMV的植物筛选及提取条件对抗病毒物质活性的影响

对26种植物样品进行了抗病毒(TMV)活性测定。结果表明,不同植物提取物对TMV侵染心叶烟的抑制效果不同,其中莲、榕树、柿子、杨梅、水蜈蚣、叶下珠、羊蹄甲和菊花对TMV的抑制率在90%以上;对高活性抗病毒植物莲叶而言,抗病毒物质的活性因提取溶剂和提取方法的不同而异,水作为溶剂提取时,提取物对TMV的抑制率仅约为70%,而以甲醇和体积分数95%的乙醇作溶剂提取时,提取物对TMV的抑制率约在98%以上;用体积分数95%的乙醇为溶剂,采用索氏提取、回流提取和冷浸提取时,所得提取物对TMV的抑制率均为100%。冷浸提取的优化条件是:以体积分数95%的乙醇为提取溶剂,料液比20∶180(1∶9)提取12h。     

烟草Ti245抗烟草花叶病毒的遗传分析及抗性基因定位

以含抗烟草花叶病毒(TMV)基因的烟草Ti245为抗病亲本,以K326为感病亲本,经杂交得到F1,F1自交得到F2群体,分析了Ti245抗TMV的遗传规律,并对抗性基因进行SSR标记定位.结果表明:Ti245对TMV的抗性由1对隐性基因控制;基因定位发现,Ti245抗TMV的位点位于LG9连锁群,标记*Tp217200...     

VA系统诱导烟草对TMV抗性与细胞内防御酶系统的关系

枯斑三生烟(Nicotiana tabacum L.“Samsum”NN)经植物源抗病毒剂VA诱导处理后第7天(清水处理作对照)，在其长出的新叶上接种烟草花叶病毒(TMV)。结果表明，VA可以诱导枯斑三生烟对TMV产生系统抗性，其枯斑抑制率可达57．25％，枯斑出现时间推迟10h。超氧物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POX)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)3种酶的活性均比对照明显提高，其中48h时增加幅度最大；VA处理使枯斑三生烟叶片内的丙二醛(MDA)含量降低，其中接种48h时降低幅度最大。此外，在接种TMV后的12h内，清水对照的枯斑三生烟新叶中POX和SOD活性呈下降趋势，PAL活性几乎无变化，随后呈上升趋势，而经VA处理的枯斑三生烟新叶中的POX、SOD和PAL，活性自接种后，一直呈上升趋势，且上升幅度也高于对照；MDA含量的变化与3种酶活性的变化呈相反趋势。     

VFB诱导烟草叶片生理生化变化与TMV抗性的关系

用VFB对烟草花叶病进行预防和治疗处理,对其抗TMV作用进行初步探讨。结果表明：用VFB的两种处理方式均可使受侵普通烟的叶绿素总含量明显升高,且预防处理要好于治疗处理;可显著降低丙二醛(MDA)的含量;可诱导普通烟中多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)的活性增强。可见,VFB是一种良好的植物源病毒抑制剂,可诱导植物产生抗病性,增强对TMV侵染的抵抗力。     

毛头鬼伞多糖诱导烟草体内水杨酸的积累

以烟草感病品种普通烟K326为材料,以毛头鬼伞多糖(CCP)为诱导因子,采用高效液相色谱法(HPLC)测定了CCP对烟草体内水杨酸(SA)含量的影响.结果表明,CCP可以诱导烟草感病品种体内SA含量增高,SA含量在接种烟草花叶病毒(TMV)后84 h达到最大值,为458.927 ng.g-1.     

浮盘消毒方式对烟叶TMV的影响分析

为在烤烟浮盘消毒这一环节,找到适宜的消毒方式,有效降低烟叶普通花叶病（以下缩写TMV）的发生,从而减少损失。通过采取不同的浮盘消毒方式,对烟苗TMV带毒率检测和大田TMV发生情况跟踪监测,结果表明：使用烟雾机浮盘消毒方式能减少烟苗TMV带毒率,降低大田TMV发病率,比常规消毒方式在预防和控制TMV上效果更好。