甘蓝类植物小孢子培养及植株再生研究

对3个甘蓝类植物(甘蓝、青花菜、羽衣甘蓝)19个品种小孢子胚胎发生和植株再生的影响因素进行了研究,结果表明,基因型不仅影响供试材料的小孢子胚状体发生频率,也影响胚状体的质量;4℃低温预处理0 ～2d结合32.5℃热激1d,能显著提高供试基因型小孢子出胚率.胚状体先在NLN-13液体培养基中培养25d,有利于胚状体分化成苗;后在B5固体分化培养基中添加1％ ～1.2％琼脂,可有效促进胚状体萌发和植株再生.小孢子再生植株先使用流式细胞仪在生长初期鉴定倍性,后对单倍体植株采用200mg·L-1秋水仙碱浸根处理20h,并用流式细胞仪鉴定,此方法可快速、有效地获得双单倍体植株.     

利用小孢子胚离体培养筛选抗除草剂的油菜

选用4个甘蓝型油菜（Brassica napus L．）F、（7039，7040，282和5102）为小孢子培养供体材料，分别对小孢子胚在含草甘膦和盖草能的培养基上进行培养，以筛选出抗草甘膦和抗盖草能的胚状体，进而获得再生植株。其中，基因型7039和7040用于草甘膦筛选，282和5102用于盖草能的筛选。选取子叶期胚状体，在含0．006％的草甘膦及0．01％和0．02％盖草能的MS-2培养基上培养2周，不抗草甘膦和小抗盖草能的胚状体2周内变褐死去，抗草甘膦和抗盖草能的胚状体转绿。随后转绿胚状体转移至正常MS-2培养基中继续培养，直至获得再生植株。再生植株喷施0．25％的草甘膦液表明均抗草甘膦；而对植株喷施0．05％的盖草能液时，0．02％筛选出的植株大部分为抗盖草能，而0．01％筛选出的植株却大部分死去，表明用0．02％浓度筛选抗盖草能植株的方法更有效。用170mg／L秋水仙碱直接处理再生植株20和30h，染色体加倍率分别达到了34％和52％。     

小孢子培养有效获得松花型花椰菜DH再生植株

对5个松花型花椰菜杂种一代的小孢子培养研究表明，小孢子胎胚发生主要依赖于基因型，庆农65天的每花蕾胚状体产量最高，平均达15.5个。松花菜的胚状体萌发率一般在30%左右，并有效获得了大量的DH再生植株。冷击预处理能显著影响花椰菜小孢子的胚胎发生，但供体材料间存在不同的结果。结球期和开花结角期再生植株的生育期与育性出现较大分离，可育且能正常结角的比例约占全部小孢子再生植株的50%以上，因而不再需要加倍处理。     

小孢子培养获得松花型花椰菜DH再生植株

对5个松花型花椰菜(Brassica oleraceavar.botrytisL.)杂种一代的小孢子培养研究表明,小孢子胎胚发生主要依赖于基因型,庆农65天的每花蕾胚状体产量最高,平均达15.5个。松花菜的胚状体萌发率一般在30%左右,并有效地获得了大量的DH再生植株。冷激预处理能显著地影响花椰菜小孢子的胚胎发生,但供体材料间存在不同的结果。结球期和开花结角期再生植株的生育期与育性出现较大分离,可育且能正常结角的比例约占全部小孢子再生植株的50%以上,因而不再需要加倍处理。     

菜苔小孢子培养及再生植株的倍性鉴定*

以早熟菜苔(Brassica rapa ssp．parachinensis)品种油青四九为供体材料，研究了更新培养液和秋水仙碱分别直接处理分离的菜苔小孢子对胚发生频率的影响。分离小孢子先用NLN-17培养液32℃热激培养2d，换成NLN-10培养液后在24℃继续培养，比不换培养液直接用NLN-10培养液处理的胚状体产量明显提高，更新培养液并能改善胚状体质量。用秋水仙碱0．8mg／L直接处理分离小孢子能明显增加胚状体产量，秋水仙碱浓度过高不利出胚和胚状体萌发。流式细胞仪(FCM)鉴定菜苔小孢子再生植株的染色体倍性表明，有较高的自发二倍体率(70％)和四倍体率(8％)，而其它多倍体和混倍体比率相对较少。     

彩叶芋薄层培养及胚状体发生的组织学研究

以彩叶芋叶柄薄层组织为外植体,接种在附加2.0 mg,L BA 和0.05～0.1 mg/L NAA 的 MS 培养基上,诱导愈伤组织和胚状体的发生。培养4周后,外植体形成瘤状愈伤组织。培养8周后,从愈伤组织分化出胚状体,胚状体进一步发育成正常植株。经12周培养可再生出大量植株。组织学观察表明,其胚状体的发育和结构与典型单子叶植物合子胚的特点很相似。从一至几个细胞原胚、球形胚,至逐渐发育成棒状时,便开始胚芽、胚根、胚轴和子叶的分化,即形成完整的胚状体。胚状体的发育不同步,因而在同一块愈伤组织上可见到不同发育时期的胚状体。愈伤组织内部产生胚状体多于表面。     

类番茄茄基因渗入栽培番茄的研究

用栽培番茄作母本 ,类番茄茄作父本杂交 ,结实率为 40 %。通过离体胚培养获得杂种 1代 ,用栽培番茄作母本与之回交 ,得到回交 1代种子 ,结实率达 1 5 6% ,获得种子发育成苗 2 3株。但该回交 1代植株自交不结实 ,与栽培番茄 2次回交表现不亲和。用类番茄茄与栽培番茄的杂交 1代作母本 ,潘那利作父本杂交 ,结实率为 1 1 % ,得到复合杂种植株 5株 ,用该复合杂种作母本 ,潘那利作父本进行回交 ,结实率达 1 5 6% ,得到回交后代 2 5株 ,该代植株自交结实 ,并与栽培番茄杂交亲和。     

苹果体细胞无性系变异的RAPD评估

以苹果栽培品种Gala试管苗叶片为材料 ,将叶片刺伤后接种于附加了BA1mg L、2 ,4 D 0 5mg L和NAA 5mg L的MS培养基 ,黑暗培养 7d后转移至附加BA1mg L的MS培养基 ,继续暗培养 40d ,97%叶片发生直接类型体细胞胚胎 ,单位叶片平均再生体细胞胚胎 2 5个。对来自同一植株上的前 3片展开叶中的 1片叶进行组织培养 ,再生得到 1 5株直接体细胞胚胎发生、植株再生后代。应用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析技术 ,以供体 (原初供体 )为对照进行了供体和再生体间及再生体彼此之间体细胞无性系变异研究 ,没有观察到供体和再生体间及再生体彼此之间有DNA多态性 ;接着用同样的方法对上述 1 5株体细胞胚胎植株随机抽取 7个单株单叶进行培养 ,得到二代直接体细胞胚胎植株 ,分别从 7个单株单叶再生的二代植株中各随机抽取 1株 ,再次用RAPD方法进行原初供体和二代再生体间及二代再生体之间体细胞无性系变异分析 ,结果二代直接体细胞胚胎植株 5和引物OPF 0 6组合中出现一条多态带 ,其分子量约为 90 0bp,命名为OPF 0 690 0 ,重复 3次多态性稳定。结果表明 ,苹果离体叶片直接体细胞胚胎发生途径再生植株的体细胞无性系变异率接近自然变异率     

乌拉尔甘草胚状体的诱导及再生体系的建立

用L9(34)正交试验设计方法研究了乌拉尔甘草外植体、植物生长调节剂对胚状体诱导的影响,并对胚状体诱导和成苗技术进行了探索。结果表明:适宜乌拉尔甘草胚状体诱导培养的最佳外植体为芽,优化培养基为MS+甘氨酸0.3g/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+2,4-D0.2mg/L;2,4-D对胚状体诱导具有促进作用。适宜胚状体诱导成苗的最佳外植体为芽,培养基为MS,成苗率达到66.67%,外源激素对胚状体诱导成苗具有抑制作用。     

我国主要栽培木薯品种体细胞胚胎发生与芽器官发生的研究

本研究对我国10个木薯(Manihot esculenta Crantz)主要栽培品种离体培养,研究结果表明不同品种之间在体细胞胚胎发生和器官发生的能力上因基因型不同而差异显著.以组培苗茎段侧芽或顶芽为外植体,在添加Picloram和2,4-D的体细胞胚胎发生诱导培养基上暗培养2周后,可诱导胚状体的形成.生长素浓度中,2,4-D在6mg/L及Picloram在12mg/L为最佳使用浓度,并且Picloram的效果明显优于2,4-D.NZ188、SC124和SC205体细胞胚胎发生的频率可达到80%以上.诱导的胚状体经循环继代培养可形成次生胚状体.次生胚状体在成熟培养基上经2～3周的光培养可形成绿色子叶的体细胞胚,进而萌发形成再生植株.NZ188及SC8体细胞胚萌发频率最好,可达80%以上.以培养2周的子叶胚切块置于体细胞胚胎发生诱导培养基上可诱导形成次生胚状体,诱导频率都在77%以上.子叶胚切块置于器官发生培养基上可诱导芽器官发生,2周后可形成芽原基及不定芽,诱导频率在34.4%到72.2%之间,其中NZ188、NZ199和SC124诱导效果较好.再生培养附加乙烯抑制剂AgNO_3可明显抑制愈伤组织的形成,提高芽器官发生的能力,包括再生频率及芽再生的数目,浓度以4 mg/L为宜.从含AgNO_3的培养基上再生的芽有利于进一步生长和移栽成活.     

茄子游离小孢子培养中小孢子发育的细胞学观察

本文以茄子（Solanum melongena L.）杂交F1代的植株为试验材料，通过游离小孢子的培养，对小孢子脱分化、再分化形成再生植株的发育途径，进行了较为详细的形态细胞学观察。其结果如下：（1）小孢子进行均等分裂和营养细胞分裂两种方式都能形成胚状体或愈伤组织。生殖细胞仅分裂1-2次。（2）多细胞小孢子从花粉沟或萌发孔突出来脱掉花粉壁。（3）花药组织在胚状体形成过程中起着重要作用。（4）从获得的再生植株中，随机取37株进行根尖细胞染色体观察发现，22株为单倍体，14株为二倍体，1株为四倍体。     

玉米小孢子胚胎发生的细胞形态学观察

通过观察玉米小孢子胚胎发生的细胞形态学特征,发现：离体培养条件下单核后期的花粉可以通过均等分裂和不均等分裂两条途径形成胚状体,与前人的研究结果一致。淀粉的积累,多核小孢子的液泡化以及花药壁的衰退都可影响雄核发育。将诱导培养3周的花药转移到降低蔗糖浓度、去除TZBA并附加KT的分化培养基上,有利于球形胚和梨形胚的极性分化和成熟,而发育较迟的胚状体则停止发育,趋向退化。因此胚状体之间出现明显的两极分化。     

玉米小孢子胚胎发生启动的超微结构观察

利用透射电镜观察了玉米花培养过程中小孢子胚胎发生启动的超微结构特征,发现培养１ｄ的小孢子细胞器丰富,核仁,核膜清晰,培养３ｄ后,开始进行第１次有丝分裂,不均等分鲜明以后即在生殖核的外围产生细胞壁,有的线粒体,质体以缢缩方式增殖,表明营养细胞处于代谢活跃状态,有可能进一步发育,按营养细胞途径形成胚状或愈伤组织。     

Productivity and Chemical Composition of Tomato and Cucumber Plants Growing in Natural Soils Fertilized with Biona‐312

This study was carried out to evaluate the effect of small additions of ion exchange substrate, Biona‐312, to soil on the yield and mineral composition of cherry tomato cv. ‘Koralik’ and cucumber cv. ‘Hermes F₁.’ The test plants were grown under greenhouse conditions and subjected to 0, 2, and 5% (mass) Biona‐312 doses introduced into the soil. The study results showed that Biona‐312 introduced into soil significantly increased the yield of the test species at the flowering and fruiting stage. Soil enrichment with 2 and 5% Biona additions generally increased the nitrogen–phosphorus–potassium (N‐P‐K) content in tomato and cucumber organs at the flowering and fruiting stage with parallel magnesium (Mg) and calcium (Ca) content decrease. Introduction of nutrients together with the ion exchange substrate did not cause negative effects of overfertilization, and thus the ion exchange substrate can be recommended as a fertilizer in tomato and cucumber cultivation.     

静电场处理对贮藏番茄品质及生理变化的影响

为探讨静电场对番茄贮藏品质的影响,以“朝研219”绿熟番茄为试材,从控制软化和转红出发,筛选了适宜的静电场处理条件为：场强-200 kV/m,频度2 h/d。研究静电场处理对贮藏番茄品质和生理变化的影响,结果表明：静电场处理能显著延缓番茄果实硬度的下降,抑制由绿转红的过程;可以延缓果实可溶性糖含量的下降和可滴定酸含量的上升;经负高压静电场处理的番茄,呼吸跃变推迟6 d出现,乙烯峰的出现也延迟了3 d,相对电导率与丙二醛含量较对照明显降低,说明静电场处理可调控果实细胞膜透性的变化。     

Tomato and eggplant scions influence the effect of rootstock under Na2SO4 salinity

A short-term experiment was conducted to investigate whether the effect of rootstock on plant response to salinity depends on the solanaceous species used as scion. Tomato cv. ‘Ikram’ and eggplant cv. ‘Black Bell’ were grafted onto two tomato interspecific hybrids (‘Beaufort’ and ‘He-Man’). Plants were grown in an open soilless cultivation system and supplied with two nutrient solutions: non-saline control and a saline solution (adding 15 mM Na₂SO₄, 3.7 dS m^?1). Plant dry biomass production and partitioning were influenced by salinity, but its effect was depending on the rootstock/scion combination. ‘Beaufort’ eliminated the deleterious effect of salinity when tomato was used as scion, but reduced (?29.6%) the shoot biomass of eggplant. ‘He-Man’ had a different effect on scion growth under saline conditions: shoot biomass was less reduced in eggplant (?20.6%) than in tomato (?26.8%). Under salt stress, ‘Beaufort’ reduced the accumulation of Na⁺ in tomato leaves more than in eggplant, whereas no differences were observed between tomato and eggplant grafted onto ‘He-Man’. Stem Na⁺ accumulation followed a different pattern. The increase of Na⁺ in the stems was similar for tomato and eggplant grafted onto ‘Beaufort’, whereas stems of tomato accumulated more Na⁺ compared to eggplant grafted onto ‘He-Man’. The opposite response of the tested rootstocks to salt stress when the scion was either tomato or eggplant seems to be partially related to the capacity of the rootstock and scion to exclude Na⁺ from the shoot. However, the results of nutrient accumulation within plant tissues imply that other mechanisms in addition to ion competition are involved in the salt resistance of grafted plants.     

乙烯受体基因LeETR1和LeETR4的克隆及在番茄果实中的表达

摘要：为研究野生型番茄（Lycopersicon esculentum Mill. cv . Lichun）和转反义ACS 番茄果实中乙烯受体基因LeETR1和LeETR4的表达与乙烯的关系，实验用RT-PCR方法扩增了乙烯受体基因LeETR1和LeETR4片段，用两片段作探针进行Northern 杂交。结果表明：两受体基因的表达在番茄果实成熟进程中变化不明显，LeETR4在同一时期的果实外果皮中表达水平低于其在辐射壁和中柱的表达。转反义ACS番茄果实中LeETR1和LeETR4的表达水平显著低于野生型番茄果实，外源乙烯处理转反义ACS番茄果实，促进两个受体基因的表达。可见果实中LeETR1和LeETR4的表达受乙烯调控的影响。     

番茄EBF2基因的克隆、亚细胞定位与遗传转化

为研究番茄EBF2基因的功能,利用RT-PCR技术从番茄果实cDNA中扩增了全长EBF2基因,将其与绿色荧光蛋白(GFP)构建成融合表达载体,在烟草原生质体中进行瞬时表达。结果表明,该基因定位于细胞核内。将该基因定向克隆到植物表达载体pCambia1301,构建成由组成型启动子CaMV35S启动的植物表达载体pCambia1301-EBF2,通过农杆菌介导方法转化MicroTom番茄。经PCR及GUS组织染色检测,外源基因已整合到番茄基因组中。     

The influence of diluted seawater and ripening stage on the content of antioxidants in fruits of different tomato genotypes

The aim of this study was to investigate if the combined effect of diluted seawater and ripening can improve the beneficial nutritional properties of tomato fruits from an antioxidant point of view. To reach the goal, different tomato cultivars and breeding lines, genetically modified for ripening, were investigated, and analysis of NADPH and NADP+ as well as of the main antioxidants such as ascorbic acid, lipoic acid, and tocopherols was performed at two ripening stages. The research was conducted on berries of the following genotypes of tomato: cv. Jama, Gimar wild type, Gimar gf, and Gimar nor. The mutant gf is a typical "stay green" mutant, characterized by an incomplete loss of chlorophyll; the nor mutation is characterized by a reduced biosynthesis of ethylene and carotenoids. Both ripening and salinity induced an oxidative stress, and the sensitivity to salt treatment was genotype-dependent. The genotypes cv. Jama and Gimar gf line showed increases in ascorbic acid, lipoic acid, and alpha-tocopherol during both ripening and salt treatment whereas total ascorbate and tocopherols decreased in the berries from salt-treated plants of Gimar wild type. Ripening also determined decreases in ascorbate and tocopherol amounts in the Gimar nor line where a positive effect of ripening and salinity was observed.