一株拮抗放线菌NMG8-2的抑菌特性

为研究拮抗放线菌NMG8-2的抑菌活性,评价其在植物病害防治中的开发应用价值,对该菌株及其发酵液的抑菌活性、发酵液稳定性进行了研究。试验采用平板对峙法、抑制菌丝生长速率法和杯碟法测定拮抗放线菌NMG8-2菌株及其发酵液对18种植物病原真菌和6种细菌的抑制作用。结果表明:NMG8-2菌株及其发酵液对苜蓿茄镰孢根腐病菌、立枯丝核菌等16种植物病原真菌和胡萝卜软腐欧文氏菌、马铃薯环腐棒杆菌、青枯雷尔氏菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌5种细菌具有较强的抑菌作用;发酵液能抑制苜蓿茄镰孢根腐病菌的分生孢子萌发和芽管伸长。不同条件下的稳定性测定结果表明:该菌株发酵液的抑菌作用对碱、紫外线、高温和蛋白酶均比较稳定,但在强酸条件下稳定性较差;连续传接10代,抑菌活性仍然稳定。     

扩展青霉拮抗菌的筛选鉴定及其发酵液的抑菌效果

从水果表面及土壤中分离到几十株细菌,通过平板筛选到6株拮抗效果较好的拮抗菌,其中2株拮抗菌T3和T8的发酵液对扩展青霉（Penicillium expansum）表现出显著的拮抗效果。本实验对该两种菌的发酵液的抑菌作用进行了初步的研究。这两株拮抗菌T3和T8的发酵液稳定性表现出不同,分别用100℃高温或两种蛋白酶处理后,T3菌株的发酵液抑菌效果均有一定程度的下降但仍表现出较高的活性,而T8菌株的发酵液在100℃高温处理后,抑菌活性下降但仍保持部分活性,但用蛋白酶处理,其抗菌活性几乎丧失。T3与T8发酵液的抑菌活性在培养2天后几乎达到最大,T3的最适发酵培养基为BPA,T8的最适发酵培养基为PDA。两株菌的发酵液处理扩展青霉菌的菌丝后,引起菌丝畸形,原生质凝缩,出现空泡。根据细菌16SrDNA序列分析及其形态特征和生理生化特性,初步鉴定T3和 T8均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),两株菌之间基因序列的相似性为93.45%。     

一株拮抗辣椒炭疽病菌的放线菌筛选及鉴定

辣椒炭疽病是辣椒生产的主要危害之一,为了更好地防治辣椒炭疽病,采用土壤稀释法从云南等地土壤中分离得到100多株菌放线菌。采用平板对峙实验以及抑菌谱检测,筛选对辣椒炭疽病菌具有较好的拮抗作用的放线菌。结果表明：分离得到的100多株放线菌中,有10株放线菌的发酵液对辣椒炭疽病菌有较强的拮抗作用,其中以18号菌株抑菌效果最好,发酵液稀释10倍抑菌率达到68.2%。通过培养形态特征、生理生化特征,以及16S rDNA序列分析,初步鉴定该放线菌为华丽黄链霉菌(Streptomyces flaveus),其16S rDNA在GenBank的注册号为JX293177。     

几种杀菌剂和拮抗菌对葡萄白腐病的室内防治试验

葡萄白腐病是国内葡萄生产上危害严重的病害之一,为了该病害的防治,采用平皿抑菌试验的方法测定了7种常用杀菌剂和7株拮抗菌对葡萄白腐病菌的抑制作用,并采用室内离体果穗人工接种的方法测定它们在离体果实上的药效。结果发现：7种杀菌剂和2株拮抗菌对葡萄白腐病均表现一定程度的防病效果,其中,杀菌剂百菌清和多菌灵对葡萄白腐病菌抑菌活性较强,拮抗菌解淀粉芽孢杆菌BJ-6和放线菌F2的发酵液也具有较强的抑菌活性。     

放线菌菌株97发酵液中活性代谢产物的抑菌作用及稳定性测定

本实验室从采自山东临沂和日照的烟田土样中分离得到一株对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var. nicotianae)具有拮抗作用的放线菌菌株97,为了明确该生防菌的抑菌作用和抑菌因子的理化性质,采用菌丝生长速率法,对菌株97发酵液中活性代谢产物的抑菌作用及稳定性进行了研究。结果表明,发酵液中活性代谢产物对多种植物病原真菌均表现较好的抑制作用。此外,发酵液中活性代谢产物在低温贮藏下仍有很好的抑菌效果,在偏酸性或中性条件下稳定,有较强的热稳定性和抗紫外线照射能力,对蛋白酶K稳定性较好。     

土壤拮抗细菌的分离与筛选

为了获得高效广谱的原始拮抗细菌菌株用于油茶病害的防治,并探索其生物防治效果。从土样中分离到223株细菌,采用平板对峙培养法、发酵产物活性测定进行拮抗菌筛选。结果表明：以油茶炭疽病菌和根腐病菌为指示菌,通过平板对峙培养初步选出抑菌效果较好的菌株21株,其抑菌圈宽度在5.0~12.5 mm,占分离到的细菌总数的9.9%,其中菌株Z26抑菌效果最好;复筛表明21个菌株发酵液对供试6种植物病原菌有不同程度抑制作用,其中有8株对油茶炭疽病菌抑菌效果良好,有4株对油茶根腐病菌抑菌效果良好,其抑菌圈宽度≥10.0 mm,分别占被测菌的38.1%和19.0%,菌株Z26抑菌效果最好;发酵产物活性测定表明6个菌株的发酵液能完全抑制油茶炭疽病菌生长,效果明显,过滤液抑菌率为33.3%~58.3%,效果不明显,抑菌率超过50.0%的只有Z17、Z26 2个菌株。由此可知,菌株Z17和Z26对油茶病害有较好的抑菌效果,具有一定的生防潜力,可作为油茶病害的备选拮抗菌株开展深入研究。     

土壤放线菌K2的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

筛选具有抑制植物病原菌活性的放线菌是农用抗生素开发的基础。通过平板对峙法筛选出8株拮抗放线菌菌株,采用生长速率法测定获得一株对植物病原菌有较好抑菌作用的菌株K2,并采用抑制菌丝生长速率法对其抑菌谱进行研究,以及进行菌种鉴定。生长速率法试验表明,放线菌菌株K2发酵液对10种供试植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中以对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)抑制效果最好,抑菌率可达57.38%。根据形态学特征、生理生化特征和基于16S rDNA序列比对,鉴定菌株K2属于链霉菌属(Streptomyces)的一个菌株。放线菌K2的代谢产物具有较广的抑菌谱,对植物病原菌的防治有很大的研究开发潜力。     

土壤放线菌X1的筛选及其抑菌活性初探

筛选具有抑菌活性的放线菌是开发农用活性抗生素的基础。本文采用生长速率法和孢子萌发法,测定了从土壤中分离出的6株拮抗放线菌的抑菌活性,并对抑菌活性较好的放线菌X1菌株进行初步研究。生长速率法试验表明,放线菌X1菌株发酵液对供试12种植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,发酵液对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑制率均为100%。孢子萌发试验表明,放线菌X1菌株发酵液对黄瓜枯萎病菌孢子萌发的抑制率为100%。在浓度为1 mg/mL时,放线菌X1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑菌率均大于90%。放线菌X1菌株抑菌谱较广,对植物病菌的防治有很大的研究开发潜力。     

胡麻枯萎病生防放线菌的抗菌活性研究

为了筛选对胡麻枯萎病有较好抗性的放线菌,试验对胡麻根围土壤进行了筛选,最终得到1株对胡麻枯萎病病原菌尖孢镰刀菌有较强拮抗作用的放线菌GS2-1.分别测定了它对不同地区分离得到的151株尖孢镰刀菌的抗性,发酵液对孢子和菌丝的抑制作用,研究了其最佳发酵条件,并对发酵液中的抑菌活性物质进行了初步提取和生物活性测定,最后对其在...     

棉花黄萎病拮抗细菌的筛选与抗菌物分析

对21株芽孢杆菌属细菌分别进行了摇瓶震荡培养,其发酵液上清液用硫酸铵盐析,杯碟法测定了沉淀物对大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)的拮抗活性,并对其中6株具有较强抑菌活性菌株的抗菌物进行了蛋白酶稳定性、热稳定性等分析.结果显示,BDT-25、JJ-5、DHT-12、80b-2、DHT-13和JJ-134菌株的抑菌活性较高;6株拮抗细菌发酵液沉淀物均对氯仿敏感,抗菌物溶液经蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶处理后活性丧失或显著下降,对温度也较敏感,认为这些抗菌物质为蛋白或多肽类物质.拮抗菌株产生的抗菌蛋白通过抑制大丽轮枝菌孢子萌发和使菌丝体原生质凝集而抑制其生长.     

2株放线菌的抗菌活性及分类学地位

旨在对2株放线菌HD-103和HD-109的抗菌活性和发酵液稳定性进行比较分析,并明确2株菌的分类学地位。以13种植物病原真菌为靶标菌,利用琼脂柱法分析2株生防菌的抗菌谱;以尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporumf.sp.glycines)为指示菌,利用杯碟法检测2株生防菌发酵液的热稳定性、pH稳定性及紫外稳定性,并进行比较分析;在此基础上采用多相分类法对2株菌进行鉴定。研究结果显示：2株菌的抗真菌谱均较广,其中HD-103对禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearumf.sp.Glycines)的抑制效果最显著,抑菌圈直径达到23.7mm,HD-109对烟草赤星病菌(Alternariaalternate)抑制效果最好,抑菌圈直径达25.0mm;HD-103的抗菌活性物质较HD-109的活性物质更为稳定;分类学鉴定结果表明,菌株HD-103与HD-109为微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)的2个菌株。菌株HD-103与HD-109能够抑制多种植物病原真菌,其发酵液具有较好的热稳定性和酸碱稳定性,具有开发为新型生物农药的潜力。     

烟草赤星病菌拮抗放线菌的筛选与鉴定

采用稀释平板分离法从张家界金鞭溪采集的土样中分离到20株放线菌。以烟草赤星病菌为靶标菌进行筛选,通过平皿对峙培养的方法,筛选出S-1,S-6,S-16,S-20等4株抑菌效果明显的菌株(抑菌率≥50%),抑菌率分别为51.7%,53.4%,51.9%,71.4%。进一步应用管碟法对菌株发酵液的代谢产物进行测定,结果表明,菌株S-20的抑菌圈直径为26.3 mm,抑菌带最宽,对烟草赤星病菌的抑制作用最显著。为了加深对该菌株的了解,本研究还对其形态特征、培养特征以及生理生化特性作了测定,初步鉴定菌株S-20为链霉菌属(Streptomycesspp.)的球孢类群(Globis-porus)。最后,抑菌谱试验表明,菌株S-20不仅对烟草赤星病菌作用明显,对其他病原真菌同样有抑制作用,抑菌谱广。     

外源水杨酸诱导伽师瓜采后抗链格孢病害效果的研究

研究了离体条件下不同浓度的水杨酸(0、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mmol/L)处理对链格孢菌菌丝生长和孢子萌发的影响,并以新疆伽师瓜为试材,在单因素试验的基础上,通过正交试验确定了外源水杨酸诱导控制伽师瓜链格孢病害的最佳处理条件。结果表明,离体条件下,低浓度(0.1~1.0 mmol/L)的水杨酸对链格孢菌的菌丝生长和孢子萌发均无显著的抑制作用;外源水杨酸诱导控制伽师瓜链格孢病害的最佳处理参数为:水杨酸浓度0.5 mmol/L,处理时间10 min,诱导间隔期48 h,该诱导处理可有效控制由链格孢菌侵染引起的伽师瓜采后黑斑病,病情指数达到最低。     

冬枣贮藏期浆胞病病原分离与鉴定

在天津地区栽培的冬枣上发现冬枣贮藏期浆胞病真菌病害,从病果上分离出2种真菌菌株,回接后,发现病症与自然发病症状完全一致,而且从接种病果上又重新分离到了此病病原真菌,经鉴定和致病性测定,确认为链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissl)和裸孢壳属(Emericella nidulans(Eid.)),其中裸孢壳属(Emericella nidulans(Eid.))在冬枣上还属国内外首次报道.     

中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌“种”的初步鉴定

从中国棉花主产区部分地区采集棉轮纹斑病叶,分离获得17个致病链格孢(Alternaria spp.)菌株。根据链格孢菌菌体和孢子形态学观察结果,结合ITS序列测定和分析结果,明确A1等16个菌株为链格孢菌(Alternaria alternata),A3菌株为大孢链格孢菌(Alternaria macrospore)。     

砀山梨黑斑病分子检测技术研究

黑斑病是砀山梨上最重要的病害之一,建立一套砀山梨黑斑病的分子检测技术对该病害的早期及时防治及口岸检验检疫具有重要的意义。本研究通过分析比较砀山梨黑斑病菌与其他19种不同真菌的ITS序列,设计了1对特异性引物,能够从该病菌中特异性地扩增出1条398 bp的条带,而其他测试真菌中不能扩增出该条带。在灵敏度检测中,该菌的基因组DNA检出限为10 pg/μL,同时在发病的砀山梨果实组织样品和接种梨黑斑病菌的梨果实组织样品中检测出梨黑斑病菌。因此,可以将该对引物用于梨黑斑病早期诊断及病菌的PCR检测,为指导果农及时进行药剂防治提供有效的技术支撑。     

Identifying the Pathogen of Cotton Leaf Spot Based on the Analysis of rDNA-ITS and Histone 3 Gene Sequence in Xinjiang

[Objective] The objective of this experiment is to identify pathogens causing cotton leaf spot in Xinjiang. [Method] Two hundred and six leaf samples displaying typical leaf spot symptoms were collected from 30 loci in 7 different regions of Xinjiang in 2016 and 2017. The fungal isolates were purified using conventional methods. Ten representative fungal strains were selected for further tests based on different sampling times, locations, and colony characteristics. The strains were identified based on their morphological characteristics and the sequence analysis of both rDNA internal transcribed spacer and histone 3 gene. [Result] In north of Xinjiang, Alternaria alternata and A. tenuissima were the dominant pathogens at the seedling stage (from May to June), whereas in August and September, A. tenuissima was the main pathogen and few were A. alternata and A. macrospora. In south of Xinjiang, A. tenuissima was the main pathogen at the seedling stage, whereas in August and September, A. tenuissima and A. macrospora dominated. Further, Gossypium hirsutum and G. barbadense was mainly infected with A. tenuissima and A. macrospora, respectively. [Conclusion] The main pathogens causing cotton leaf spot in Xinjiang are A. alternata, A. tenuissima and A. macrospora.     

苹果早期落叶病广谱拮抗菌株的筛选、鉴定与抑制作用研究

采用平板对峙法、平皿叶片法,从苹果树根际土壤样品中分离筛选得到7株苹果早期落叶病广谱拮抗菌株,其中菌株BS24对苹果早期落叶病主要病害斑点落叶病和褐斑病的病原菌拮抗效果最佳,抑菌带宽度分别为9.5 mm、9.2 mm。综合菌株形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,将其鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。试验表明菌株BS24无细胞培养滤液可显著抑制苹果早期落叶病主要病原菌的菌丝生长和孢子萌发。菌株抑菌谱较广,对苹果其他几种病害如灰斑病、圆斑病、轮斑病、腐烂病、轮纹病、炭疽病等的病原菌均有明显拮抗效果。菌株BS24具有良好的苹果早期落叶病生防应用的潜力。     

聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑对苹果斑点落叶病菌的联合毒力

为明确聚六亚甲基双胍盐酸盐(Polyhexamethylene biguanidine hydrochloride, PHMB)与氟环唑(epoxiconazole)混配对苹果斑点落叶病菌(Alternaria alternata f. sp. mali)的联合作用类型及最佳配比。本研究采用菌丝生长速率法测定了聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑混配对苹果斑点落叶病菌的毒力。结果显示：聚六亚甲基双胍盐酸盐、氟环唑对苹果斑点落叶病菌的EC50分别为30.604、0.621 mg/L,二者以10:1、7:1、4:1、1:1、1:4、1:7、1:10这7个配比混合对苹果斑点落叶病菌的增效系数分别为1.41、1.55、1.59、1.57、1.09、1.12和1.14。氟环唑对苹果斑点落叶病菌的室内生物活性明显高于聚六亚甲基双胍盐酸盐。聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑以7:1、4:1、1:1这3个配比组合的增效系数均大于1.5,它们对苹果斑点落叶病菌均有增效作用。     

新疆薄皮核桃污染霉菌的分离鉴定

为了解新疆薄皮核桃受霉菌污染情况及污染微生物种类,以新2核桃为试材,采用稀释涂布法和三点法对污染霉菌进行分离纯化,经形态学和ITS序列分子分析法相结合进行鉴定。结果表明,薄皮核桃污染霉菌共有10种,通过菌株的生长特性得出米根霉（Rhizopus oryzae）、深绿木霉（Trichoderma atroviride）、黑曲霉（Aspergillus niger）和黄曲霉（Aspergillus flavus）4种霉菌是影响核桃品质变化的优势霉菌,其他6种霉菌分别为扩展青霉（Penicillium expansum）、腐皮镰刀菌（Fusarium solani）、拟轮枝镰刀菌（Fusarium verticillioides）、红贝俄氏孔菌（Earliella scabrosa）、歧皱青霉（Peni-cillium dierckxii）和交链格孢菌（Alternaria alternata）。研究结果可为薄皮核桃品质劣变问题的研究及防治提供参考。