利用正交设计优化甘蔗SRAP-PCR反应体系

利用正交设计L16（45）对甘蔗SRAP-PCR反应体系的五大因素（Mg2＋、dNTPs、引物、模板DNA、Taq酶）在4个水平上进行优化,得到如下结论：各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次是：Mg^2＋、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA;通过对各因素进行筛选,建立甘蔗SRAP-PCR反应的最佳体系（20μL）为：dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.1μmol/L、Mg^2＋2.5 mmol/L、Taq酶0.25U和模板DNA 60 ng。     

利用正交设计建立洋桔梗RAPD最佳反应体系

利用正交设计法对影响洋桔梗RAPD反应的Mg2 、dNTPs、Taq DNA 聚合酶、引物和模板等主要因素的作用进行了比较分析,建立了洋桔梗RAPD的最佳反应体系:即在25 μL反应体积中,10×PCR buffer为2.5 μL ,Mg2 浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物浓度为0.2 μmol/L,模板浓度为50 ng/μL,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U;在此基础上,比较了不同退火温度对RAPD扩增产物的影响,退火温度经筛选选定为41℃;最后再将该反应体系应用于不同引物,结果表明该优化结果具有较好的稳定性和通用性.     

玫瑰SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

以玫瑰为试材,采用L16(45)正交设计和单因素试验2种方法,研究模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和Taq酶5个因素对玫瑰SCoT-PCR反应体系的影响,建立最优化的反应体系并筛选合适引物。结果表明:模板DNA浓度为1.50ng/μL,Mg2+浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.35mmol/L,引物浓度为0.70μmol/L,Taq酶用量为0.50U时,可建立玫瑰SCoT-PCR最佳反应体系,并筛选出20条扩增条带清晰、多态性丰富的SCoT引物。反应体系的优化及引物的筛选,为日后利用SCoT分子标记技术对玫瑰进行相关研究提供理论依据和技术支持。     

山梨SSR反应体系的建立及其稳定性验证

以山梨为试材,提取基因组DNA,运用5因素5水平正交实验设计,对SSR反应体系中的DNA模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和引物用量进行优化试验,确立适宜的SSR反应体系。结果表明:20μL反应体系中,模板DNA 10ng、Mg2+(20mmol/L)2.5μL、Taq酶1.25U、dNTPs(10mmol/L)1.0μL、引物(10μmol/L)1.5μL、10×PCR buffer 2.0μL;应用该SSR体系,在引物筛选试验及山梨×"幸水"后代群体中进行扩增,扩增效果较好,证实了该体系的适用性和稳定性。     

鸭梨ISSR-PCR反应体系的初步建立

以沧州泊头市鸭梨为试验材料,对鸭梨ISSR-PCR反应体系中的模板DNA用量、dNTPs浓度、引物浓度以及Taq酶浓度进行了探索,初步建立适合鸭梨ISSR-PCR反应体系为:在20μL反应体系中,含1×TaqPCRBuffer[1.5 mmol/L Mg2+]、0.15 mmol/L dNTPs、0.40 μmol/L...     

光核桃ISSR扩增体系的优化

为确保光核桃ISSR反应条件的稳定性,以改良的CTAB法提取光核桃基因组DNA,对模板DNA浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶用量、引物浓度等因素进行了优化,确立了光核桃ISSR反应体系。结果表明:最佳反应体系为模板浓度40ng/μL、引物浓度0.4μmol/L、Mg2+的浓度2.5mmol/L、酶浓度0.5U、dNTPs浓度0.5mmol/L,为光核桃这一优质的种质资源的遗传多样性研究奠定了理论基础。     

链格孢属小孢子种ISSR和RAPD-PCR最佳反应体系的建立

以13个链格孢属小孢子种菌株为试材,采用正交实验设计的方法,研究Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物4个因素在4个水平上对链格孢属小孢子种的ISSR和RAPD反应体系的影响。结果表明:链格孢属小孢子种ISSR和RAPD的最佳反应体系为25μL的ISSR-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.50mmol/L,dNTPs浓度为0.10mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在RAPD-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.15mmol/L,引物浓度为0.60μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在此基础上,对最佳反应体系的退火温度进行了筛选确定;在确定退火温度后,采用最佳反应体系,用ISSR引物UBC808和RAPD引物OPE07进行稳定性和通用性验证,结果表明该优化反应体系具有较好的稳定性和通用性。     

花椰菜最适ISSR反应体系的建立及优化

以花椰菜9901A×9908杂交种为材料,用高盐低pH值法提取的基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中的镁离子浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶量、引物用量以及最适退火温度等影响因子进行了优化和筛选,建立了适合花椰菜的ISSR反应体系:20 μL PCR反应体系,含10×PCR反应缓冲液2 μL,2.0 mmol/L MgCl2,4×dNTP混合物0.2 mmol/L,引物0.5 μmol/L,Taq酶1.5 U,基因组DNA约30 ng,最适退火温度为52.8℃.     

山西省野罂粟种质资源亲缘关系的RAPD分析

为了明确分布在山西省不同地域的野罂粟材料之间的亲缘关系和遗传多样性,以在山西省采集的6份野罂粟和采集于内蒙古的1份野罂粟引种为研究对象,利用改进的CTAB法提取DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了模板、Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP和随机引物的浓度及用量,建立了山西省野罂粟RAPD技术扩增体系。结果表明:在20μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、模板、引物、Mg2+和dNTP 5种主要成分的适宜浓度和用量分别为:2.0U、20ng、1.2μmol/L,2.0mmol/L、150μmol/L,并在此基础上构建UMPGA聚类图,经过分析得知,地域分布为野罂粟聚类的主导因素,花色为野罂粟聚类的次要因素。     

新疆野生樱桃李SSR体系的建立及应用

为建立适宜新疆野生樱桃李的SSR分子标记技术体系,通过对PCR反应程序、反应体系(DNA模板量、引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶用量)以及退火温度进行了探索,建立了适宜野生樱桃李的SSR-PCR反应体系。结果表明:在25μL反应体系中,Mg2+1.0 mmol/L、引物0.5μmol/L、dNTPs 0.20 mmol/L、TaqDNA聚合酶1.0 U、模板DNA 30 ng、退火温度为60℃。SSR扩增程序:94℃预变性5 min,35个循环(94℃30 s,60℃1 min,72℃1 min),72℃延伸10 min,可筛选出稳定性好、多态性高的SSR引物。     

南瓜新品种科栗1号的选育

科栗1号是以S31-1为母本、S4-1为父本配制而成的南瓜一代杂种。植株蔓生,长势中等;分枝较少,叶小,节间短;第1雌花节位第9节左右;嫩瓜扁圆形,瓜皮绿色覆绿色斑点和浅色纵条斑纹,老瓜皮墨绿色。嫩瓜单瓜质量0.5~1.5kg,果实横径9cm左右,纵径13cm左右,糯性好,粉质,品质佳;春季露地和秋季设施栽培嫩瓜产量1500~2000kg·(667m2)-1,早春设施栽培嫩瓜产量3000kg·(667m2)-1左右。适宜浙江省及栽培条件相似的地区推广种植。     

鲜食马铃薯新品种天薯15号的选育

天薯15号是以陇薯7号为母本,天薯9号为父本杂交选育而成的鲜食型马铃薯新品种。从播种至块茎成熟119 d(天)左右,属晚熟品种。薯块椭圆形,皮黄色,薯肉淡黄色,芽眼浅。单株结薯4.4个,平均单薯质量92.2 g,商品率89.8%。每667 m~2产量在1 500 kg以上,在甘肃的天水、陇南、临夏、定西、平凉等地均可种植。     

马铃薯新品种青薯11号的选育

青薯11号是以同薯23号为母本,以青薯168为父本,通过有性杂交和系统选育育成的鲜食马铃薯新品种。中晚熟,出苗至收获107 d(天)左右;薯块椭圆形,粉红皮,薯肉黄色带红晕,芽眼浅;块茎淀粉含量17.96%,粗蛋白3.17%,VC240.3 mg·kg~(-1),还原糖0.279%。抗晚疫病。一般肥力条件下每667 m~2产量2 200~2 500 kg,高肥力条件下产量2 500~3 000kg。适宜在青海省各类地区种植。     

马铃薯新品种农天2 号的选育

农天2 号是以自育品系天99-5-4 为母本，天薯7 号为父本杂交选育而成的马铃薯新品种。从出苗至块茎成熟121 d（天）左右，属晚熟品种。薯块圆形，黄皮黄肉，芽眼浅。单株块茎数3.7 个，大中薯率90.5%。每667 m2 平均产量为1 500 kg，适于甘肃天水、临夏、定西、平凉、陇南等地种植。     

蜜本类南瓜桂丰1号的选育

桂丰1号是以自交系802为母本,以自交系801为父本配制的蜜本类南瓜一代杂种。中熟,生长势强,果实发育期约35d(天),全生育期约120d(天),第1雌花着生节位为第21~26节,以后每4~6节着生1朵雌花;老熟瓜橙黄色、长棒锤形,瓜肉深橙红色,瓜顶部膨大,纵径47.7cm,横径16.5cm,平均单瓜质量5.1kg;肉厚3.8~4.6cm,口感粉、甜。春种每667m2产量2180kg,秋种每667m2产量1830kg。可在广西全区和气候相近地区种植。     

马铃薯新品种天薯12 号的选育

天薯12号是以品系天97-8-98为母本,庄薯3号为父本杂交选育而成的马铃薯新品种。从出苗至块茎成熟126 d（ 天）
左右,属晚熟品种。薯块椭圆形,黄皮黄肉,芽眼浅而紫。单株结薯4.1 个,平均单薯质量105 g,大中薯率87.4%。每667 m²
产量在1 500 kg 以上,适于甘肃天水、临夏、定西、平凉、陇南等地种植。     

黄瓜新品种绿园7号的选育

绿园7号黄瓜是以华北型雌性系72为母本,华北型自交系R34为父本配制而成的一代杂种。植株长势强,第1雌花着生在主蔓第4～6节,以后节节为雌花;商品瓜长32 cm左右,瓜把短,果皮绿色有光泽,蜡粉轻,多刺,瘤小,心腔小,果肉浅绿色,风味品质好。温室栽培平均产量7 000 kg·(667 m~2)~(-1)以上。抗白粉病,中抗霜霉病,适宜辽宁、吉林、山东等地越冬、春季温室及春季塑料大棚栽培。     

番茄新品种汴粉13号的选育

汴粉13号是以优良自交系Ks184作母本、自交系Ks109作父本配制而成的番茄一代杂种。无限生长类型,早熟,生长势强,耐低温、弱光,抗逆性好,连续坐果能力强;成熟果粉红色,高圆形,果面光滑,平均单果质量178.2g;果实硬度高,耐贮运;果实均匀一致;可溶性固形物含量4.93%,VC含量170.0mg·kg-1,糖酸比7.4,果肉质沙,品质佳;田间表现抗叶霉病和番茄花叶病毒病。适宜河南、河北、陕西、山东等地早春保护地栽培。     

翻心型大白菜新品种连狮1 号的选育

连狮1 号是以连云港地区菜农提供的中狮头自留种为原始种,经4 代自交提纯选育成的大白菜新品种。株型紧凑, 整齐度较好,叶球为长筒翻心形,叶片呈长倒卵形,叶表面具有较深核桃纹并带稀疏茸毛。株高35 cm,外叶数约10 片, 叶球高28～32 cm、横径22～27 cm,单个叶球质量3.5～4.0 kg,每667 m² 叶球产量4 700 kg 左右,净菜率达83%。生育期 为90～95 d（天）,田间抗病毒病、霜霉病、根肿病能力优于对照中狮头,适合在江苏、安徽、山东等地及其相近气候条件 地区秋季种植。     

加工型马铃薯新品种陇薯17号的选育

陇薯17号是以L0020-14为母本,以D1533为父本,通过有性杂交和系统选育而成的加工型马铃薯新品种。晚熟,生育期132 d(天)左右。植株生长势较强,枝叶繁茂,结薯集中,单株平均结薯5个,商品薯率91%。薯块椭圆形,薯皮网纹,薯肉淡黄色,芽眼浅,薯形好。干物质含量25.66%,粗淀粉19.16%,粗蛋白2.84%,VC 150.9 mg·kg~(-1),还原糖0.128%。每667 m~2产量2 000 kg左右。田间对晚疫病的抗性强于对照陇薯6号。适宜在甘肃省临夏州、定西市等二阴地区栽培。