猫杯状病毒的分离鉴定及其全基因组的序列分析

本研究采用MDCK细胞从养殖场患病猪的鼻拭子样品中分离获得1株猫的杯状病毒(Feline calicivirus,FCV),命名为GX01-2013。采用RT-PCR方法扩增了该毒株的全基因组,并进行了序列测定和分析。结果表明,该毒株基因组全长7704 bp,与哈尔滨分离株HRB-SS较为相近,其核苷酸同源性为82.3%。根据FCV衣壳蛋白构建的遗传进化树分析,发现该病毒与F9、F4、225和2024疫苗株均不在同一分支,氨基酸同源性为84.2%~87.7%,各毒株间无明显地域差异。此外,VP1蛋白的E区(426~521aa)发现有4个中和性抗原位点发生改变。     

猫杯状病毒全基因组的克隆及序列分析

采用RT-PCR和重组PCR扩增了猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)CH-GD株的全基因,并进行了序列测定,用DNAStar软件对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比较分析。结果表明,首次分离于中国广东的CH-GD株与各参考毒株有较大的差异。CH-GD株与各参考毒株之间的同源性仅为75.4%~77.1%,明显低于各参考毒株之间的同源性(78.9%~99.9%)。同时遗传进化树显示,14个分离株形成两大分支,CH-GD株独自在一分支,各分离株无明显的地域性差异。对FCV衣壳蛋白6个区(A~F)的分析结果发现,CH-GD株中A~F区的特点与报道的相符。此外还发现,CH-GD株有3个区域的3个连续的氨基酸发生了变异,与参考毒株相比,CH-GD株在这3个区域的抗原性和亲水性也都发生了相应的变化。     

华东地区猫杯状病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为了解猫杯状病毒(FCV)在中国华东地区的流行状况及其遗传变异和演化特征,本研究采集30份疑似感染FCV的猫眼鼻拭子,通过常规方法分离鉴定出9株FCV,经RT-PCR和测序获得了 FCV VP1的基因序列,与文献报道的流行株、高致病力FCV(VS-FCV)株和疫苗株VP1基因同源性进行比对及遗传进化分析.结果显示,9株...     

猫杯状病毒基因组结构与结构蛋白功能研究进展

猫杯状病毒是一种引起猫的急性口腔溃疡、上呼吸道传染病和慢性胃肠炎等病的重要病原。近年来，随着对其研究的不断深入，在病毒分子生物学方面取得了很大的进展。本文主要从基因组结构、编码的结构蛋白功能、基因疫苗等方面系统阐述了猫杯状病毒的研究进展，同时提出了存在的问题和展望。为进一步研制猫杯状病毒基因工程疫苗及诊断试剂提供理论基础，以期能更有效地防治此病。     

猫杯状病毒不同分离株致病性的比较

为确定猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)SH、JL-1、JL-2分离株毒力强弱,将其分别人工接种6~11周龄健康非免疫家猫,分成接种组和对照组。接种前后分别测定各组猫体温、体质量,观察发病情况及临床症状,按照欧洲药典对症状进行计分。于感染后14d麻醉处死,制备病料组织切片,观察组织器官的病理变化。结果显示,家猫感染FCV后总发病率为100%,死亡率为66.7%;SH、JL-1、JL-2组临床症状平均得分分别为8、4、9,对照组得分为1。病理解剖观察发现,猫感染FCV后,以鼻、眼分泌物增加,口腔溃疡为特征,消化道病变较轻微,肺部出现不同程度的变性、出血,呈明显病理性肉样变;病理组织学观察发现,肺脏有数量不等的肺泡上皮细胞和巨噬细胞脱落,伴随少量纤维蛋白渗出和弥漫性肺泡损伤。结果表明,FCV SH、JL-1、JL-2分离株均有一定的致病性,其中以JL-2株的毒力最强。     

虎源猫瘟热病毒的分离和鉴定

为了分离并鉴定发病虎粪便和脾脏中的1株疑似猫瘟热病毒(FPV),试验将金标记FPV试纸条初步鉴定阳性的虎粪样经无菌处理,接种于猫肾传代(CRFK)细胞。结果表明:经细胞传代成功分离猫瘟热病毒,命名为FPV-HLJ;该毒株接种细胞后能够产生明显细胞病变(CPE);病毒细胞培养液能凝集猪红细胞(凝集效价达26～28),但不能凝集鸡红细胞;电镜观察可见大量外观呈圆形或六边形,大小20～23nm的病毒粒子;对该病毒VP2全基因克隆并测序,该基因全长均为1755个核苷酸,编码584个氨基酸,与FPV标准毒株CU-4(GenBank登录号M38246)VP2基因大小相同,其决定抗原性、血凝性和宿主特异性的几个关键位点的氨基酸符合FPV的氨基酸序列特征,证明该毒株为猫瘟热病毒。     

猫杯状病毒CH-JL2分离株对猫的致病性研究

为研究猫杯状病毒(FCV)CH-JL2分离株对猫的致病性,本研究采用滴鼻方式分别以10~(8.97)TCID_(50)/mL、10~(7.97)TCID_(50)/mL与10~(6.97)TCID_(50)/mL的病毒液(0.5mL/只)感染6~11周龄健康未免疫中华田园猫,通过对临床症状、体温、排毒情况、组织病理变化以及组织中病毒分布情况的观察与监测,评价其致病性。结果显示,不同滴度的FCV CH-JL2分离株感染猫均可发病,发病率依次为100%、50%与25%,FCV感染5d后,感染猫开始排毒,出现体温升高、鼻眼分泌物增多、口腔溃疡等典型临床症状,但在感染猫的肺脏、心脏、脾脏、气管等全身组织脏器中均未检测到FCV的分布。结果表明CH-JL2分离株不同于FCV VSD株,感染猫后仅可引起上呼吸道感染,不能造成全身感染。本研究为FCV的防制奠定了基础。     

圈养东北虎源猫杯状病毒的巢氏PCR检测及ORF2基因遗传进化分析

为了解猫杯状病毒(Feline calicivirus, FCV)在圈养东北虎中的流行情况,试验在黑龙江省海林市横道河子东北虎林园与哈尔滨市东北虎林园共采集东北虎血液样本40份,采用巢氏PCR对FCV进行检测,并对阳性PCR产物进行测序和遗传进化分析。结果表明：40份样品中共有4份检测为FCV阳性,阳性率为10%。4株测序毒株分别命名为HB-1516、HD-068、HD-079、HD101,与FCV参考株的核苷酸相似性为76.6%～88.3%;4株测序毒株处在同一分支,且与猫源FCV亲缘关系最近,但与常用疫苗株(F4、F9、F65、FCV2024株)处在不同分支。说明可能存在FCV由猫传染虎的情况,提示目前使用的疫苗不能起到完全保护作用。     

猫杯状病毒分离鉴定及其VP1基因序列分析

为了解我国猫杯状病毒(FCV)流行情况,于2019年1月～3月从京津地区4家宠物医院收集并检测眼鼻肛拭子297份,FCV、猫疱疹病毒1型和猫泛白细胞减少症病毒阳性率分别为15.49%、30.98%、30.64%。病原学调查结果显示,未免疫的小于1岁幼猫对FCV更易感。将FCV单纯阳性病料接种于F81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光和测序分析等进行鉴定,分离的5株FCV分别命名为F2019TJ1株、F2019TJ2株、F2019TJ3株、F2019BJ1株和F2019BJ2株。研究显示,FCV对温度敏感,37℃存放4 d病毒含量下降1个滴度。对5株FCV的VP1基因进行测序分析,结果显示5株FCV核苷酸和氨基酸同源性分别为74.3%～87.3%和82.2%～92.2%,归属于2个不同毒株群,F2019BJ1株、F2019BJ2株和F2019TJ1株属于GI株群,与美国的UTCVM-H2株遗传距离较近;F2019TJ2株和F2019TJ3株属于GII株群,与国内的FCV-GD株遗传距离最近。研究结果为了解国内FCV流行及变异特点提供参考依据。     

坦布苏病毒鸡源分离株全基因组及遗传变异分析

为了解引起鸡产蛋骤降的坦布苏病毒全基因组分子特征,本试验运用RT-PCR技术克隆测定了2株坦布苏病毒鸡源分离株全基因组序列,其基因组为10 990nt,包含1个10 278nt的开放阅读框架,与GenBank数据库中登录的坦布苏病毒参考株一致,与2010年以来的坦布苏病毒毒株核苷酸及推导氨基酸同源性均在98%以上,与2010年前的坦布苏病毒核苷酸和氨基酸序列同源性仅分别为88%和96%左右。基于坦布苏病毒全基因组序列的分子系统进化分析,发现2株鸡源坦布苏病毒与2010年以来分离的各种禽源坦布苏病毒株均处于同一大的进化分支,且相互间的遗传距离均小于2%。以上研究结果表明,坦布苏病毒鸡源分离株与其他禽源病毒分离株的基因组差异不明显,各分离株亲缘关系非常近。     

猫杯状病毒分离株VP1基因序列与致病性分析

旨在了解上海地区猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)VP1基因与致病性,采用常规方法分离鉴定出13株FCV,经RT-PCR和测序获得分离株VP1的基因序列,与参考株VP1基因进行同源性和遗传演化分析,对2株分离株进行动物致病性试验。结果显示,13株上海地区分离株VP1基因核苷酸序列相互间相似性为74.3%～99.8%,与参考株核苷酸序列和氨基酸序列相似性也较低,符合FCV易突变的特征;进化树分析表明,上海地区FCV流行株主要来自国内北方地区,少数毒株来自国外地区;通过对宿主临床症状、VP1进化树和VS-FCV特征性氨基酸位点进行分析,筛选出7株FCV强毒株;动物致病性试结果验表明,FCV-SH202101株和FCV-SH202113株可导致感染猫发病和死亡,潜伏期为1～2 d,接种后第3天即可检测到排毒,不同年龄段猫的病程不一致,可导致幼猫5 d后死亡,成年猫病程可持续11～18 d, 2株分离株在致病性方面均符合VS-FCV特征。本研究丰富了中国FCV的分子流行病学资料,为VS-FCV毒株的筛选提供了有力的证据,也为FCV疫苗的研究提供了技术支持。     

猫杯状病毒的分子生物学

猫杯状病毒（FCV）是猫的上呼吸道感染、口腔水疱性疾病及慢性胃炎等疾病的重要病原。该病毒具有典型的杯状病毒结构。其基因组为单股正链含polyA的RNA，全长约7．6kb，编码3个开放读码框（ORFs)。其中ORF1约5．3kb，编码1763个氨基酸（aa)的非结构蛋白；ORF2长约2．1kb，编码671aa的结构蛋白，ORF3位于基因组3‘末端，长320bp，编码106aa的蛋白。该病毒结构蛋白分子量为58－76kDa，分为6个区，各区具有特殊功能。非结构蛋白包括3C多肽，3C半胱氨酸蛋白酶和3DRNA依赖的RNA聚合酶样区等结构。FCV的基因工程疫苗研究已有一定的进并取得了相应的应用价值。FCV分子生物学的研究有助于研究该病毒的毒力和致病机理以及新型疫苗的研制。     

圈养白化孟加拉虎感染猫杯状病毒的诊断和防治

长沙生态动物园步行区虎馆圈养的3只白化孟加拉虎相继发生以精神沉郁、采食困难、流涎、口腔溃疡等为主要特征的传染疾病。采集病虎分泌物(唾液),使用猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)快速检测试剂盒检测,结果显示阳性,初步确诊为猫杯状病毒感染。通过抗病毒、抗继发感染、维持电解质和酸碱平衡等治疗后病虎康复痊愈。     

猫杯状病毒的分离鉴定及超变区基因序列分析

为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCV HRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与疫苗株CVXPOLYCAP同源性最高,为78.2%,而与中国分离株CH-JL和GD的同源性最低,仅为67.9%和68.8%;推导氨基酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与12Q087-5、UTCVM-NH12和FCLF4的同源性最高,为86.7%,而与中国分离株的同源性仅为73.9%。系统发育树分析结果显示,HRB-SS分离株与中国分离株亲缘关系较远。本研究结果表明,FCV HRB-SS与我国FCV具有不同的遗传起源。     

广西猫杯状病毒全基因组序列测定及其遗传进化分析

为了掌握广西猫杯状病毒(FCV)的流行情况及其变异规律。本研究于2018年3月至2019年9月采集疑似FCV鼻拭子59份,其中阳性检出率49.2%(29/59)。将阳性病料接种CRFK细胞,成功分离获得一株FCV毒株,命名为NN01-19。为深入了解其遗传进化规律和分子特征,本研究通过RT-PCR方法扩增获得该毒株的全基因组序列,并对其ORF2基因进行了遗传进化和序列分析。结果表明,NN01-19毒株基因组全长7709 bp,其中ORF2基因全长2010 bp。遗传进化分析发现该毒株与广西早期分离株GX01-13同属基因I群,但核苷酸和氨基酸同源性仅为77.9%和86.5%。其中,超变区(E区)抗原线性表位新增T448A、T450G、G451Q和T454S四个突变位点。重要的是,该区域还发生了V430T的突变,符合VS-FCV致病性氨基酸突变特点。本研究为深入了解FCV的流行特点及其变异规律提供了参考依据,同时也为今后防控FCV提供了重要的理论基础。     

猫杯状病毒单克隆抗体的制备

制备猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)的特异性单克隆抗体,为FCV的免疫学诊断方法提供材料。本研究将经蔗糖梯度离心纯化的FCV灭活后免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,并对其进行一系列鉴定。结果成功获得1株能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株3B11。MAb 3B11抗体类型鉴定其重链属于IgG₁、轻链为κ链。MAb 3B11能与FCV-SH192发生特异性反应;小鼠腹水MAb 3B11对5株FCV毒株具有较高的ELISA效价;与5株FCV毒株具有间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot, WB)结合特性。本研究制备的MAb 3B11对FCV具有良好的特异性、免疫反应性及广谱识别性,为FCV诊断方法的优化、流行毒株筛选以及基础研究提供生物原料。     

杭州地区猫杯状病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析

猫杯状病毒(feline calicivims, FCV)是引起猫呼吸道疾病的一种常见病原,呈世界性分布,常在猫群中爆发流行。为了解我国FCV的流行情况及分子生态学特征,本研究对杭州地区收集的48份疑似FCV感染病料,进行了PCR鉴定、病毒分离培养,以及基于VP1基因序列的系统发育树分析。RT-PCR鉴定的结果显示,有32份病料可判为阳性;这32份病料接种的F81细胞,均出现明显的细胞病变。VP1基因序列分析显示,32株分离毒间的核苷酸同源性为69.2%～99%,氨基酸同源性为82.1%～99.9%。与国外分离株相比,32株分离株同国内分离株的同源性更高。系统发育树分析显示,32株分离株有12株与国内分离株遗传关系较近,15株与英国株遗传关系较近,别外4株与多国分离株形成独立分支。对VP1 D-E区的B细胞线性表位分析发现,D区和conE区的2个表位比较保守,而5′HRV区的表位存在较大变异。尽管32个毒株分离于同一地区和相近的时间段,主要抗原VP1基因差异仍然较大,多数达20%～30%不等。以上结果表明,FCV在杭州地区广泛流行,且呈现明显的遗传多样性,给病毒的分子流行病学监测和疫苗防控带来巨大挑战。     

猫杯状病毒分离鉴定及其VP兽医临床1基因序列分析

为了解我国猫杯状病毒(FCV)流行情况,于2019年1月～3月从京津地区4家宠物医院收集并检测眼鼻肛拭子297份,FCV、猫疱疹病毒1型和猫泛白细胞减少症病毒阳性率分别为15.49％、30.98％、30.64％.病原学调查结果显示,未免疫的小于1岁幼猫对FCV更易感.将FCV单纯阳性病料接种于F81细胞进行病毒分离,通...