甘蓝型油菜原生质体培养和植株再生

从甘蓝型油菜试管苗下胚轴和幼叶分离的原生质体，在含２．４－Ｄ０．８ｍｇ／１，ＮＡＡ０．５ｍｇ／１，６－ＢＡ０．５ｍｇ／１的改良ＢＧ培养基中浅层液体和固体平板培养６天，分裂细胞为８％－２０％，至１５天形成３２细胞的细胞团。愈伤组织在含ＮＡＡ０．２ｍｇ／１，ＩＢＡ０．１ｍｇ／１，６－ＢＡ１．０ｍｇ／１的ＭＳ分化培养基上培养基上培养３－４周，产生不定芽，并在附加ＩＢＡ０．５ｍｇ／１，６－ＢＡ０．２ｍ...     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株

油菜是重要的油料作物,我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界首位。提高油菜籽粒含油量是育种的主要目标之一。我们利用拥有自主知识产权的反义PEP(phosphoenolpyruvate carboxylse）技术获得了超高含油量油菜＾[1]。将超高含油量特性与油菜杂种优势结合是使超高油油菜尽快应用于生产,实现产业化生产的重要途径。而超高含油量不育系的选育是杂种优势利用的前提之一。通过不对称体细胞杂交能“一步法”快速选育不育系＾[2]。为此,建立重演性好、再生额率高的原生质体培养系统十分必要。甘蓝型油菜原生质体的培养已有一些成功的报道＾[3-6],但愈伤组织分化频率都不高。本文以甘蓝型油菜下胚轴为材料,通过琼脂糖包埋法,建立了原生质体高频分裂及植株再生体系,为通过不对称体细胞杂交快速选育超高含油量不育系提供一些科学依据。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种６０１的子叶中游离出原生质体，采用液体浅层培养，获得持续分裂的细胞。培养基中的２，４－Ｄ浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须继代培养（ＭＳ培养基补加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ，ｋｔ２ＭＧ／Ｌ）后，再转至ＭＳ分化培养基（补加ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ３ｍｇ／Ｌ）上，才能分化出芽。分化的芽在ＭＳ生根培养基（补加ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ）上，可以形成完整植株。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种601的子叶中游离出原生质体,采用液体浅层培养,获得持续分裂的细胞。培养基中的2,4-D浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须经继代培养(MS培养基补加2,4-D 0.2mg/L,KT 2mg/L)后,再转至MS分化培养基(补加NAA0.01mg/L,KT 3mg/L)上,才能分化出芽。分化的芽在MS生根培养基(补加IBA0.5mg/L)上,可以形成完整植株。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究

以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株。结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根。研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据。     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

甘蓝型油菜与菘蓝原生质体融合及植株再生体系的研究

以甘蓝型油菜(Brassica napus)和菘蓝(Isatis tinctoria)叶片为材料提取原生质体,采用PEG-高钙高pH法融合亲本原生质体,采用固液双层培养法诱导愈伤组织的形成.研究适宜原生质体分离的酶种类及浓度,并考察了激素种类和用量对愈伤组织诱导和分化的影响.结果表明,5 mg/L纤维素酶+3 mg/L离析酶适合甘蓝型油菜和菘蓝的酶解.各培养基中适宜的激素浓度分别为,诱导培养基PellB 1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+0.25 mg/L 2,4-D;增殖培养基PellC 2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L2,4-D;分化培养基PellE 2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+0.02 mg/L 2,4-D.获得了15株再生植株,杂种幼苗叶片均呈深绿色,叶表面覆有厚的蜡质,叶片肥厚,植株在成熟期时株高比甘蓝型油菜矮,开花较晚,雄蕊发育不完全,杂种体细胞染色体数目为48～66.     

玉米原生质体培养再生植株

将玉米自交系“330”成熟胚诱导的愈伤组织,在附加2mg/L2,4—D的MSB培养基上继代、筛选,产生了三种类型的愈伤组织。用结构疏松,生长迅速的Ⅱ型胚性愈伤组织分离原生质体,在KPR或N_6ap培养基中以1×10~5/ml密度进行液体浅层培养,植板率为5.6%—7.4%。采用分步分化法得到了正常的绿苗,并经过壮根,炼苗后移栽成活。     

甘蓝型油菜下胚轴离体培养再生植株研究

[目的]为进一步通过基因转化获得预期优良性状的甘蓝型油菜提供借鉴。[方法]以甘蓝型油菜的下胚轴为外植体,研究不同苗龄、不同基因型、不同预培养条件以及各种生长调节剂组合对油菜外植体高频率再生的影响。[结果]试验中,7 d苗龄的甘蓝型油菜下胚轴再生频率可达35.83%;经3 d预培养处理的油菜下胚轴芽再生频率可提高至57.78%,油菜品种史力丰下胚轴的芽分化率较高,达35.00%,其次是N481-1,而N370-1的芽分化率最低;其最高分化率的激素组合为6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,达38.89%。史力丰品种6~8 d无菌种子实生苗的下胚轴在预培养基MS+2,4-D 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L上预培养3 d,在最适分化培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO35.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L中培养,再生频率最高。[结论]建立了甘蓝型油菜下胚轴离体培养高频率再生植株模式。     

苹果原生质体培养获得再生植株

苹果由于其童期长及基因高度杂合,使其常规育种效益较低。原生质体培养,开辟了苹果育种的新途径。Patat-Ochatt等(1988)首次报道了苹果砧木M9、MM106和品种斯巴坦原生质体再生研究的结果。但是,迄今为止,能够再生植株的品种还相当有限,特别是较好的栽培品种。因此建立普遍适用的苹果原生质体再生系统,是应用原生质体培养进行苹果育种的关键。 本研究于4月底采集犬蕾期苹果花蕾,诱导胚珠愈伤组织,培养基为MS附加2.0mg/L214-D、0.1mg/LBA。取松散的胚珠愈伤组织,转入含2.0mg/L2,4-D、0.1mg/LBA、2.0mg/L Vc、100meg/L水解乳蛋白的MS液体培养基中,在120 r/min摇床上     

枣树原生质体培养及其植株再生

以无核小枣和鸡蛋刺两个刺品种的胚性悬浮细胞经酶获得的原生质体为材料，采用不同种类的培养基，不同含量的ＭＡＡ和ＺＴ激素组合及不同原生质体培养密度对两个枣品种的原生质体进行培养，以获得适宜的培养基种类，较佳ＮＡＡ和ＺＴ的激素组合及适宜的培养密度。     

人工合成甘蓝型油菜游离小孢子培养及其植株再生研究初报

利用游离小孢子培养技术对5个人工合成甘蓝型油菜品系进行了离体小孢子培养。从大田非控温控光条件下生长的供体植株第一朵花开后3～12d,取长度2．5～3．5mm的花蕾分离小鬼子,在NLN13液体培养基中进行薄层培养诱导成胚状体,然后用无激素的MS培养基诱导植株再生。对不同的供试材料、取蕾时期和培养基蔗糖浓度对小孢子胚胎发生能力的影响作了初步研究。供试的5个材料中有4个对培养有反应,但不同材料的小孢子胚胎发生能力有较大的差异。小孢子取样的时期以主花序第一朵花开后6d左右为宜,培养基蔗糖浓度以13％的效果最好。     

二倍体马铃薯原生质体培养与植株再生

原生质体培养是体细胞杂交的基础,同时也是获得变异材料的重要手段。以引进的4个二倍体马铃薯为材料,研究了渗透浓度、酶液组成、酶解时间及材料预处理对原生质体产量和活力的影响。结果表明:预处理是原生质体成活、分裂及后期发育的重要条件,处理D预处理效果最好,原生质产量和活力最高,且有较多细胞分裂;马铃薯原生质体适宜的渗透浓度为0.35~0.40mol·L-1;RH2和RH3酶解时间以4h为宜,RH1和RH4酶解时间以4.5h为宜;酶解液为2.0%纤维素酶和0.2%果胶酶的混合液。基因型对原生质体培养影响较大。经过培养,有2个二倍体材料获得了再生植株。     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李（ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ．）原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０７个／ｇ和９５％．以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

草莓原生质体的培养和植株再生

通过对已分离提纯的草莓原生质体的培养研究 ,比较得出以KM为培养基 ,以 0 .4mol L葡萄糖和 0 .1mol L蔗糖或仅以 0 .5mol L葡萄糖作碳源 ,采用低溶点琼脂糖包埋的培养方式 ,培养密度采用 1× 10 6个 mL ,原生质体出现分裂和小愈伤组织形成的时间都较早。以MS1 、MS2 、MS3 为培养基、采用分步诱导的方法 ,能顺利诱导产生新植株 ,并在MS培养基上生根良好     

籼稻原生质体游离培养及再生植株

籼稻(Oryza sativa L.)推广品种“秋桂矮11”成熟种胚在N6+2,4-D培养基上诱导选择胚性愈伤组织,然后转入N6+2,4-D及高浓度脯氨酸的液体培养基悬浮培养。继代近6个月后建成胚性细胞悬浮系.悬浮细胞通过酶解游离产生大量原生质体,经合适渗透压的KpR琼脂糖培养基包埋,在无哺育培养条件下,分裂频率为11.36％,细胞克隆转至N6分化培养基再生出完整绿色小植株,分化频率为9.4％。     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０＾７个／ｇ和９５％。以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／＝Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０＾５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。