26份海州常山种质资源遗传多样性的AFLP分析

采用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,简称AFLP)标记技术对来自国内主要分布区的26份海州常山(Clerodendrum trichotomum Thunb.)进行遗传多样性分析。从64对AFLP引物组合中,筛选出8对扩增条带清晰、多态性高的引物组合,8对引物共扩增出1 04条条带,其中多态性条带1 030条,多态性条带比例为98.85%,平均每对引物扩增出128.75条条带。结合POPGENE软件分析遗传多样性指数:等位基因数(Na)为1.562 5个,有效等位基因数(Ne)为1.226 0个,Nei's基因多样性(H)、香农信息指数(I)分别为0.142 0、0.225 5;26份海州常山间遗传相似系数在0.285 1~0.690 9之间,平均为0.518;根据遗传相似性系数进行聚类分析,在遗传相似性系数0.534处切割时,可将26份海州常山划分为7大类,对其中第三大类在0.57处分为4个亚群,聚类结果与资源的地理分布大致相符。以上结果表明,海州常山具有丰富的遗传多样性,这为今后海州常山的开发利用和资源保护提供了科学依据。     

豌豆品种(系)的RAPD分析

以１８个豌豆栽培品种及野生种材料为ＤＮＡ样品来源,采用７个１０碱基随机引物进行ＰＣＲ扩增。基因组ＤＮＡ的多态性,利用ＲＡＰＤ标记鉴定其品种间及品种内的遗传变异性。７个引物共扩增出６６位点,其中多态性位点５６个,占８４．８％。每个ＰＣＲ扩增产物分别以０和１记录存在与否。扩增产物间成对比较产生非相似性矩阵（Ｊａｃｃａｒｄ相似系数表）,此矩阵用于构建遗传相似性的树状系图谱（遗传树）。通过遗传树的构建将１０个Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ与８个Ｐ．ｆｕｌｖｕｍ群居为截然不同的两大组。     

32个银杏品种的RAPD遗传多态性及其分类

以32个银杏(Ginkgo bilobaL.)品种的鲜叶为材料,提取其总DNA,从56个随机引物中筛选出8个单引物和4对双引物进行RAPD扩增.以随机扩增多态性DNA(RAPD)标记方法进行遗传多样性分析,用NTSYS-pc2.10e软件计算样品间的Dice相似性系数,并按UPGMA法进行了聚类分析.结果表明,8个单引物和4对双引物扩增共得到85个位点,其中81个(95%)是多态性的,说明供试样品在DNA水平上有很高的遗传多样性.32个供试的样品可分为两大类,北京梅核、南雄上矽(雄)、华口大白果为一类,其它的为第二类.在四个泰兴品种中泰兴2号和泰兴3号的相似性系数为0.968,表明它们的遗传关系比较近.本研究在分子生物学方面为银杏的品种分类和遗传多样性提供了一些新依据.     

23种中国兜兰属植物亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对23种中国兜兰属植物进行种间亲缘关系研究.研究发现:从50条引物中筛选出6条引物进行扩增,共扩增出136条带,其中多态性条带136条,占总条带数的100％,平均每条引物扩增出的DNA条带数为22.7条;根据ISSR扩增结果,采用NTSYS-pc2.10e分析软件进行遗传相似性系数分析,发现23种兜兰的遗传相似性系数在0.145 5～0.780 5之间,平均遗传相似性系数为0.383 9;UPGMA聚类分析发现,在相似性系数为0.292时,23种兜兰被划分为3个类群,即兜兰亚属(Paphiopedilum)、宽瓣亚属(Brachypetalum)和小萼亚属(Parvisepalum),与形态学系统分类结果完全一致.     

内切酶接头引物对柿属SSAP分子标记扩增的影响

SSAP(sequence-specificam plification polymorphism,序列特异扩增多态性)是种质遗传多样性分析和系统进化研究的有力工具之一。根据10个SSAP引物组合对28份柿属基因型的扩增结果探讨内切酶因素对SSAP逆转座子分子标记扩增的影响。结果表明,在以MseI和EcoRI组合消化的SSAP反应系统,且均以3个碱基作为末端选择性碱基的前提下,MseI与逆转座子引物组合的SSAP扩增性能优于EcoRI与逆转座子引物组合。研究结果为有目的和高效选择内切酶引物进行植物种质资源SSAP分析提供参考。     

乌头干药材基因组提取及RAPD分析

对收集自四川阿坝,云南丽江、曲靖、东川等地的6个乌头属药用品种样品提取了基因组DNA,并利用RAPD技术对其遗传多样性进行了分析。从117个引物中筛选出15个多态性引物,共扩增出97条DNA带,其中88条为多态性条带,占总条带数的90．7％。用NTSYS-pc2软件进行UPGMA聚类分析。并算出5个样品间的遗传相似性系数。     

马蔺种质资源AFLP标记遗传多样性分析

利用AFLP技术,选择EcoRⅠ/MesⅠ这一酶切组合,应用18对EcoRⅠ 3/MesⅠ 3引物组合进行选择性扩增,检测10个马蔺种群的基因组DNA多态性.共扩增出1 164个遗传位点,其中752个多态位点,多态率为65.11%.并通过Jaccard的方法将电泳带矩阵转化为遗传相似性系数矩阵,进行UPGMA聚类分析.结果表明,当取阈值为0.74时,可以将10个种群分为4大类群.长春马蔺与其他种源的亲缘关系较远,单独聚为一类;宁夏固原、甘肃民勤、武威、北京、山东泰山5个种群亲缘关系较近,聚为一类;内蒙古太仆寺和西乌旗、新疆乌鲁木齐聚为一类;河北涿洲马蔺种群单独聚为一类.马蔺群体间的亲缘关系远近与其所处的地理位置有很大的关系,尤其与纬度因子的关系十分密切.     

秭归空心李RAPD反应体系的建立及其遗传多样性分析

采用RAPD分子标记技术对湖北省秭归县杨林桥镇秭归空心李4个居群的21个样品进行了多态性分析,从100个随机引物中筛选出6个引物对秭归空心李进行了扩增并对扩增结果进行了聚类分析.结果表明:当遗传距离取 0.266 2～0.346 2 cM时,所有的群体聚为一类;当遗传距离取 0.059 5～0.063 9 cM时,4个居群各为一类;4个居群的相似性系数为 0.707 3～0.942 3,说明杨林桥镇4个居群的秭归空心李遗传背景比较一致,亲缘关系很近.     

橄榄种质资源遗传多样性分析及指纹图谱构建

利用ISSR分子标记技术，对101份橄榄种质资源进行遗传多样性分析，并绘制指纹图谱。从96条ISSR引物中筛选出10条引物，对广东省农业科学院果树研究所橄榄资源圃和潮州市果树所资源圃内101份资源进行分子标记，使用UPGMA聚类分析橄榄种质资源遗传多样性，从10对引物中挑选扩增条带清晰、多态性好的核心引物进行遗传多样性分析，并构建橄榄DNA指纹图谱。分析结果显示，10条ISSR引物对101份橄榄样品进行扩增，共得到136条条带，其中多态性条带135条，多态率为99.26%,平均每条引物扩增得到条带13.60条，平均每条引物扩增得到多态性条带13.50条，表明供试材料间遗传多样性较高。通过UPGMA聚类分析可知，101份橄榄种质资源样品间的遗传相似性系数为0.58～0.97,表明品种间亲缘关系较近。在遗传相似性系数为0.68时，可将101份橄榄种质资源分为5组，第1组包含种质48份，第2组包含种质45份，第3组包含种质5份，第4组包含种质2份，编号C74的大纳甜橄榄单独为第5组，说明该品种与其他样品相比发生了明显的遗传变异。利用筛选得来的6条核心引物组合成功构建了橄榄DNA指纹图谱，为供...     

利用RAPD分子标记分析玉米种质遗传多样性

以RAPD分子标记技术对玉米的10个品种的全基因组DNA进行PCR扩增,再用Popgene32软件和SPSS13.0软件分析扩增结果,研究10个玉米的种质资源遗传关系。结果表明:(1)所选20个引物可扩增出214条RAPD条带;(2)所选引物扩增条带的多态性比率为86.4%,RAPD分子标记扩增10个玉米品种间的相似性系数分别在0.316￣0.654之间;(3)用RAPD-PCR扩增条带的分析结果建立了遗传相关系数矩阵、构建了分子树状图、可将10个玉米品种分为3个类群;(4)RAPD分子标记适合于构建玉米的DNA指纹图谱,进行品种鉴定和遗传分析。     

AFLP分析西南区扁穗牛鞭草种质资源

利用AFLP分子标记技术,选用8对EcoR I/M seI的引物组合,对不同生境类型的48份扁穗牛鞭草种质资源进行分析,共扩增出可辨认带312条,其中多态性带285条,平均每对引物得到35.6条多态性带,多态性达88.60%,48份野生牛鞭草材料的相似系数范围0.6867-0.9090,遗传距离为0.3133-0.1810。结果说明西南地区野生扁穗牛鞭草具有丰富的遗传基础和遗传多样性,加强西南地区扁穗牛鞭草种质资源系统化研究,对于资源的保护,优质、高产、适应性强新品种的选育及畜牧业的发展都具有重大意义。     

中国中北部青檀的AFLP分析

为揭示中国中北部青檀的遗传多样性,本研究从贵州、北京、甘肃、江苏、安徽、山东、河南7省12个种群收集了31 份青檀样品,对其进行AFLP分析。利用从26 对AFLP引物组合中筛选出的6对引物对样本DNA进行扩增,共产生223条谱带,其中211 条为多态性条带,比率达94.26%。结果显示中国中北部的青檀材料之间存在较高的遗传多样性,且AFLP 技术可以有效地对其进行分析。31 个样品的遗传相似系数在0.6413-0.9193之间,平均为0.7489,聚类分析结果显示样品首先按照种群聚在一起,但也有交叉。     

烟草属植物遗传多样性和亲缘进化关系的荧光AFLP分析

【目的】研究烟草属不同亚属以及不同类型栽培烟草的遗传相似性关系,为明确烟草野生种和栽培烟草的遗传多样性水平、研究栽培烟草起源演化提供依据。【方法】利用CEQ8000遗传分析系统,对烟草属内4种类型的5份栽培烟草以及28份烟草野生种进行荧光AFLP分析,估算其遗传相似系数,并对28份烟草野生种、5份栽培烟草及其可能的祖先种分别进行UPGMA聚类分析。【结果】利用10对AFLP引物在33份种质中共扩增到2 423个片段,2 394个具有多态性。烟草属33份种质的遗传相似系数在0.021—0.860,平均为0.269。当相似系数为0.309时,28份野生烟草按其亚属聚为3类。2个栽培烟草种的5份不同类型烟草与其对应的可能祖先种首先聚为一类。在不同类型普通烟草中扩增到的AFLP共有片段,有97.7%可以在其可能的祖先种中找到。【结论】烟草属植物具有丰富的遗传多样性。栽培烟草进化过程中,其假设的祖先亲本都有一定贡献,其中N.sylvestris对普通烟草的形成贡献最大。     

烟草属植物遗传多样性和亲缘进化关系的荧光AFLP分析#br#

【目的】研究烟草属不同亚属以及不同类型栽培烟草的遗传相似性关系,为明确烟草野生种和栽培烟草的遗传多样性水平、研究栽培烟草起源演化提供依据。【方法】利用CEQ8000遗传分析系统,对烟草属内4种类型的5份栽培烟草以及28份烟草野生种进行荧光AFLP分析,估算其遗传相似系数,并对28份烟草野生种、5份栽培烟草及其可能的祖先种分别进行UPGMA聚类分析。【结果】利用10对AFLP引物在33份种质中共扩增到2 423个片段,2 394个具有多态性。烟草属33份种质的遗传相似系数在0.021-0.860,平均为0.269。当相似系数为0.309时,28份野生烟草按其亚属聚为3类。2个栽培烟草种的5份不同类型烟草与其对应的可能祖先种首先聚为一类。在不同类型普通烟草中扩增到的AFLP共有片段,有97.7%可以在其可能的祖先种中找到。【结论】烟草属植物具有丰富的遗传多样性。栽培烟草进化过程中,其假设的祖先亲本都有一定贡献,其中N.sylvestris对普通烟草的形成贡献最大。     

Research of Genetic Diversity in Seven Kobresia by AFLP in Tibetan Plateau

This work analyzed the genetic diversity of Kobresia accessions at the molecular level, and further obtained the necessary information for breeding and germplasm evaluation. Genomic DNA of Kobresia was amplified with four E+3 and M+3 primer combinations with AFLP (amplified fragment length polymorphism). AFLP analysis produced 164 scorable bands,of which 154 (93.96%) were polymorphic. The mean Nei's gene diversity index (H) was 0.2430, and the Shannon's information index (I) was 0.4012, indicating the abundant genetic diversity of Kobresia. The 11 Kobresia accessions from Tibetan Plateau, China, can be classified into five groups after cluster analysis based on the UPGMA (unweighted pair group method arithmetic average) method. In general, there was abundant genetic diversity among Kobresia accessions resources, and the genetic coefficient was unrelated to their geographic latitude. Natural habitats influenced genetic differentiation of Kobresia.     

兰属品种间遗传多样性的AFLP分析

为从分子水平上研究兰属植物的遗传多样性和建立适合的分子标记反应体系.本研究采用AFLP分子标记技术,对兰属植物的9个品种进行了遗传多样性分析.结果表明,筛选得到的8对引物共扩增出965条DNA片段,其中多态性条带为931条,平均1对引物扩增条带121条（多态性带116条）,多态性位点频率为95.87％,说明遗传多样性丰富.用NTSYS2＆#183;10进行UPGMA聚类分析,属于同种的品种聚在一起,与表型分类基本吻合.兰属植物间遗传相似系数变化范围为0.416-0.606.此分子标记技术体系可为兰属分类及种质遗传多样性分析提供技术依据.     

中国甘薯主要育成品种的遗传多样性及遗传趋势

用ISSR和AFLP分子标记手段,对中国不同时期不同甘薯种植区的26份主要育成品种进行遗传多样性和遗传趋势分析,结果表明:①17条ISSR引物共扩增出410条多态性谱带,平均每条引物扩增24.1条多态性谱带,10对AFLP引物共扩增出203条多态性谱带,平均每对引物组合扩增20.3条多态性谱带,2种标记均具有较高的分辨力,可以用于甘薯品种的遗传多样性分析.②甘薯主要育成品种的遗传相似系数为 0.487 7～0.774 3,平均0.564 0,表明中国甘薯主要育成品种的遗传多样性程度低,遗传相似程度高,遗传基础狭窄.通过UPGMA聚类分析,26份品种在遗传相似系数为0.55处可分为2类.③南方薯区主要育成品种的遗传多样性和遗传差异高于长江中下游薯区和北方薯区,北方薯区和长江中下游薯区主要育成品种之间的遗传差异较小,但与南方薯区主要育成品种之间的遗传差异较大.④1990年前甘薯主要育成品种的遗传相似程度高,1990年后育成品种的遗传相似程度依然很高,遗传多样性程度没有明显改变.因此,在未来甘薯遗传改良中,可以通过加强不同薯区育种亲本的交换,逐步改变目前中国育成品种遗传基础狭窄的局面.     

板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。     

滇杨优树遗传多样性的AFLP分析

以收集于云南和四川的52株滇杨优树为试验材料,并以1株大叶杨、1株北京杨和2株黑杨做类外对照,采用AFLP分子标记技术进行基因组DNA水平检测。结果表明,筛选出的8对EcoRⅠ+3/MseⅠ+3引物组合对52株滇杨优树共扩增出264条带,其中多态性条带174条,多态带百分率为64.52%,检测到有效等位基因数（Ne）为1.184,基因多样度（H）为0.121,Shannon信息指数为0.201,平均遗传相似系数为0.877;对56份杨树样本共扩增出325条带,其中多态性条带共247条,多态带百分率为75.21 %,检测出有效等位基因数（Ne）为1.185,基因多样度（H）为0.122,Shannon信息指数为0.209,平均遗传相似系数为0.876。UPGMA聚类分析结果显示,除滇杨优树QXB007与QXJ030外,其余杨树分析样本均能够被鉴别。基于采集地和遗传相似系数的模糊聚类分析表明,52株滇杨优树除开远采集地外,丽江采集地样本与其他采集地样本之间均有交集,说明丽江可能是滇杨的分布中心和起源中心。该研究结果为滇杨人工选择育种、遗传改良、种质资源收集与保存等提供了理论依据。     

Preliminary Analysis of Genetic Characteristics of Edible Fungus Tricholoma matsutcke Isolated from Yajiang, China, by AFLP Technique

A total of 10 Tricholoma matsutake strains isolated from Yajiang County, Sichuan Province of China were analyzed by using AFLP technique. The results showed that the genetic characteristics of Tricholoma matsutake strains can be properly revealed by AFLP, and among the 10 Tricholoma matsutake strains, the genetic aspects were very similar. At the level of 90 % similarity, all the strains collected together, and at the similarity of 92 %, three AFLP groups formed. Simultaneously, the effects of quantity of the primers on the second AFLP PCR were determined. The optimal quantity of Eco+1/Mse+ 1, Eco+2/Mse+2 and Eco+3/Mse+3 primer pairs used in the AFLP was 1 pmol/5 pmol, 0. 6 pmol/10 pmol and 0.1 pmol/8 pmol, respectively.