副猪嗜血杆菌的分离鉴定及三价灭活疫苗免疫效力分析

副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道早期定植菌也是格拉泽病的病原体,给猪场带来较严重的经济损失。为了调查副猪嗜血杆菌血清型的流行情况,采用细菌分离培养、玻板凝集法及PCR方法,从广东、广西、山东、江苏、江西45个规模化猪场送检的疑似样品中共分离鉴定了34株副猪嗜血杆菌,其中6株(17. 65%)血清4型、9株(26. 47%)血清5型、8株(23. 53%)血清12型、4株(11. 76%)血清13型以及7株(20. 59%)未定型菌株。为了有效地防控副猪嗜血杆菌病的流行,以4、5、12血清型优势流行血清型制备3价灭活苗,用仔猪免疫/攻毒试验评价3价灭活疫苗免疫保护力。动物实验表明,该疫苗对副猪嗜血杆菌4型、5型和12型具有较好的免疫保护能力。     

锦州地区副猪嗜血杆菌血清型鉴定

本研究先后从锦州市太和区、凌海、北镇、黑山、义县等地采集以多发性浆膜炎为主要特征的病猪病料13份,在被检的13份病料中分离到6株疑似副猪嗜血杆菌菌株,同时对所分离的菌株进行了形态学检查、分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型鉴定,最终证实6株为副猪嗜血杆菌,血清型分别为:血清4型1株、血清5型2株、血清12型1株、血清13型2株.本研究初步确定了锦州地区副猪嗜血杆菌流行菌株的血清型,为猪场制定副猪嗜血杆菌病的防控措施提供理论依据.     

苏皖地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定与三价灭活疫苗的初步研制

近年来国内养猪场副猪嗜血杆菌病日益严峻,给相关猪场造成严重的损失。本研究主要对江苏省和安徽省部分养猪场的病死猪和健康猪进行副猪嗜血杆菌的分离鉴定,为副猪嗜血杆菌的防治提供流行病学数据。同时,本室初步研制副猪嗜血杆菌血清4型、5型和12型三价灭活疫苗,用BALB/c小鼠对其进行免疫保护力的评价。结果从病死猪中分离到8株副猪嗜血杆菌,其中5型3株、12型2株、14型1株及不可定型2株;从健康猪中分离到26株副猪嗜血杆菌(分离率为7.12%),其中12型10株、4型4株、11型3株、5型1株、13型1株及未定型菌株7株。初步研制的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的免疫保护效果要优于商品灭活疫苗,对副猪嗜血杆菌血清4型、5型及12型具有较好的免疫保护能力。     

辽宁地区副猪嗜血杆菌血清型的鉴定

为探明辽宁地区副猪嗜血杆菌菌株的血清型,先后从辽宁省的锦州、营口、沈阳、丹东、铁岭、阜新、抚顺、朝阳、葫芦岛等市县采集以多发浆膜炎、关节炎、脑膜炎以及急性死亡为主要特征病猪的病料样本236份,从被检的236份病料中分离到86株副猪嗜血杆菌菌株,最终有51株鉴定出副猪嗜血杆菌血清型,分别为:血清1型2株;血清4型5株;血清5型21株;血清12型3株;血清13型20株。通过本研究初步确定了辽宁省副猪嗜血杆菌主要优势血清型,为辽宁省规模化猪场制定副猪嗜血杆菌病的防控措施提供依据。     

镇江地区副猪嗜血杆菌分离鉴定血清型及耐药性检测

为了解镇江地区副猪嗜血杆菌血清型流行情况与耐药性情况,本试验采集患病仔猪的肺脏、肝脏、关节渗出液等病料组织85份,采用细菌分离、形态学观察、培养特征鉴定、PCR鉴定等方法对副猪嗜血杆菌进行鉴定,采用PCR法和K-B药敏纸片法分别检测副猪嗜血杆菌血清型及耐药性。结果显示,从85份病料组织中分离得到48株副猪嗜血杆菌;48株副猪嗜血杆菌具有7种血清型,其中,血清5型和12型为流行的主要优势血清型,分别占分离菌株的25.0%和31.3%; 48株副猪嗜血杆菌对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、庆大霉素等9种药物耐药率在50.0%～100.0%之间,对其他药物耐药率在12.5%～25.0%之间。说明该地区分离的副猪嗜血杆菌血清型流行情况复杂,且耐药性严重。本试验为该地区的副猪嗜血杆菌防控提供研究基础。     

猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

为查明贵阳市花溪区麦坪镇某猪场仔猪发生呼吸道疾病的病因,对送检的2头病猪采集病料进行细菌分离培养、染色镜检、生化试验、PCR扩增及测序、药敏试验。结果:从病料样本中分离得到1株细菌,根据形态学和生化试验初步鉴定为副猪嗜血杆菌;应用细菌16S rRNA序列分析技术从分子水平对分离细菌进行分型鉴定,运用DNAStar软件与不同血清型副猪嗜血杆菌基因序列进行比对,发现分离菌与不同血清型副猪嗜血杆菌菌株16S rRNA序列同源且相似性为97.4%～100%,其中与血清5型相似性最高;系统进化分析显示,分离菌株与血清5型副猪嗜血杆菌进化关系最近;分离菌株对利福平、头孢氨苄、阿米卡星、环丙沙星、万古霉素敏感。结论:综合分离细菌传统鉴定方法和分子生物学鉴定方法的实验结果,确定分离菌株属于血清5型副猪嗜血杆菌。     

华东地区副猪嗜血杆菌的分离、血清型鉴定与药敏分析

2008年1~6月从华东地区养猪场送检的病猪中分离到13株细菌,经细菌形态、染色镜检、培养特性和生化试验鉴定为副猪嗜血杆菌,同时对所分离的细菌进行了血清型的鉴定和药敏试验。结果显示,13株副猪嗜血杆菌分属6个血清型,其中血清1型2株,4型4株,5型2株,12型3株,10型和13型各1株。13株分离细菌对头孢类药物、沙星类药物和阿莫西林等敏感。本研究为华东地区规模化猪场的副猪嗜血杆菌病防治提供了临床指导依据。     

副猪嗜血杆菌的分离与血清型鉴定

为了解副猪嗜血杆菌的血清型流行情况,采用细菌分离培养结合PCR的方法,对2008年至2012年,从山东、河南、河北、湖南、江苏、上海的多个猪场送检的186份疑似样品进行副猪嗜血杆菌的检测,再通过琼脂扩散试验对分离菌株进行了血清型鉴定。结果表明,从186份疑似样品中最终分离鉴定到57株副猪嗜血杆菌,分离率为30.6%。结果提示,我国副猪嗜血杆菌病存在不同程度的感染,以血清4型和5型最为流行,其次是血清1、12、13型,且该病的发生与季节和猪的日龄有关。     

河南省安阳市副猪嗜血杆菌流行菌株调查与耐药性分析

为了解河南省安阳市副猪嗜血杆菌流行菌株的血清型和耐药性情况，2022年从该地区25家养猪场无菌采集临床疑似感染副猪嗜血杆菌的病死猪肝脏、肺脏、关节渗出液等组织病料175份，采用细菌分离纯化培养、形态学观察、“卫星生长”培养、生化反应和PCR鉴定等方法进行副猪嗜血杆菌分离鉴定，应用琼脂免疫扩散法进一步进行血清分型，采用Kirby-Bauer纸片法检测分离菌株对16种抗生素的耐药性。结果显示：从175份组织病料中检测出34株副猪嗜血杆菌，检出率为19.43%；分离菌在含有NAD和犊牛血清的TSA培养基上产生针尖大小、无色透明、光滑湿润的菌落，镜检可见革兰氏阴性、长杆状、细丝状等多形态菌体，在金黄色葡萄球菌周围菌落出现“卫星生长”现象，且无溶血，分离培养结果符合副猪嗜血杆菌特征。经PCR扩增测序，分离菌株与GenBank中公布的副猪嗜血杆菌16S rRNA序列同源性在97%以上；共鉴定出4型14株、5型4株、6型3株、13型8株和未定型5株，分别占41.18%、11.76%、8.82%、23.53%和14.71%;34株副猪嗜血杆菌对对阿莫西林、青霉素G、链霉素、土霉素4种抗生素耐药性最高，...     

1株血清7型副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

研究旨在确定河南省南阳市一猪场送检样品中的病原,对病例进行流行病学调查和临床症状观察,对送检病料进行细菌分离、纯化、鉴定和基因测序分析等检测。结果显示,送检病料中分离得到一株革兰氏阴性短杆菌,分离菌在常用细菌鉴别培养基上无法生长,在含有NAD的TSA培养基上呈露珠状;纯化得到的分离菌NY2020株和金黄色葡萄球菌共同培养具有“卫星现象”;采用副猪嗜血杆菌16S rRNA鉴定引物和血清7型引物均能够扩增出特异性条带。序列分析表明,该分离菌NY2020株与7型副猪嗜血杆菌处于同一进化树分支。研究表明,该分离菌为血清7型副猪嗜血杆菌。     

江苏地区副猪嗜血杆菌病流行现状调查

为了分析副猪嗜血杆菌病在江苏区域流行现状,选取江苏省不同地区疑似发病猪场,进行临床症状分析、病理学变化观察、病原分离鉴定、血清学检测等试验。结果显示:317份病料中副猪嗜血杆菌(Haemophlius parasuis, HPs)阳性率为11.54%～27.55%,平均感染率为20.50%;从发病猪场共分离到HPs 43株,其中优势血清型为12型(37.21%)、4型(16.28%)和5型(13.95%),未定型菌株9株(20.93%),分型菌株占所有菌株的79.07%;PCR检测显示,HPs与猪圆环病毒(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)存在混合感染现象,感染率达30.77%。研究结果为江苏地区副猪嗜血杆菌病的防制提供了参考。     

副猪嗜血杆菌分型血清制备及其四川地区流行病学

从澳大利亚昆士兰州动物研究所购买副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)15个血清型的标准菌株制备免疫原,采用皮下注射与耳缘静脉注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔,免疫结束后采集心血并分离血清,对血清进行特异性与抗体效价检测,结果显示血清特异性良好,抗体效价均达到1∶8以上,用于田间分离株的血清型鉴定有良好效果。本实验室于2014年从四川22个市区80个猪场中共采集498份病料,498份病料中共检出80株HPs。采用琼扩试验对80株HPS进行血清型鉴定,所分离的80株HPs中血清4型占28.75%、5型占35.00%、12型占6.25%、13型占7.50%、15型占1.25%、不能分型的菌株占21.25%,结果表明:血清型4、5、12、13为四川地区主要流行的血清型。     

广西副猪嗜血杆菌病流行病学调查

本研究于2009年5月至2010年11月调查了广西南宁、桂林、玉林、钦州4个市60个猪场发生副猪嗜血杆菌病的情况。采集病猪组织样品共86份进行副猪嗜血杆菌分离;对疑似菌株进行形态学观察、培养特性、生化特性和PCR鉴定;最终分离鉴定到26株副猪嗜血杆菌,分离率为30.2%;对分离菌株进行血清型鉴定、致病性和药敏试验。结果表明26株分离株中血清4型有5株,5型3株,9、11、13、14、15型各1株,有1株与2、9、10、11型血清均有凝集,其余12株未能鉴定出血清型。血清型5、13、14菌株和5个未能定型的菌株能引起小白鼠全部死亡,其他菌株对小白鼠致病性不强。药敏试验结果表明70%以上的菌株除对恩诺沙星和氟苯尼考高度敏感外,对其他药物敏感性不高。本调查结果将对广西副猪嗜血杆菌病的防治提供指导。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及相关特性研究

本试验从2013年北京地区疑似副猪嗜血杆菌病病料中分离到19株革兰氏阴性短小杆菌,对分离株进行培养特性、荚膜染色、生化特性、血清型分型及PCR鉴定,结果显示分离的19株细菌均为副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,Hps）,分别属于血清4、5、7、12及13型。对分离株进行药敏试验及致病性试验,结果表明各分离株均有多重耐药性,且各分离株除GS-3外均有较强毒力。     

江苏部分规模化猪场副猪嗜血杆菌病的调查与分析

为了调查江苏省规模化猪场副猪嗜血杆菌病的流行状况,以便采取有效的防控措施,试验采集江苏省18家规模化猪场的29份病料进行分离培养、形态观察、培养特性检验、生化鉴定、PCR鉴定。结果表明:分离出15株副猪嗜血杆菌;15株分离菌中血清1型5株,12型3株,4型和5型各2株,未定型3株;筛选出了3株强毒株;大部分菌株对头孢吡肟敏感,对其他抗生素均有不同程度的耐药。说明副猪嗜血杆菌病在江苏部分地区广泛流行,并有增长的趋势。     

猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定技术探讨

目的:研究和探讨猪场副猪嗜血杆菌感染的分离培养鉴定的相关技术问题.方法:从山西省多个猪场送检的270例疑似样品实施副猪嗜血杆菌检测.然后再用琼脂扩散的试验对分离菌株实施血清型进行鉴别和评定.结果:在270例疑似样品中最后分离鉴定出了75株副猪嗜血杆菌,分离率为27.8%.结论:目前,副猪嗜血杆病有不同程度的感染,有血清1,4、5,12,13型,其中最为流行的是血清4型和血清5型.患上此类疾病跟季节以及猪的日龄是有关系的.     

2014年猪群常见细菌性疫病的分离鉴定与流行病学调查

2014年华中农业大学动物疫病诊断中心对湖北、湖南、河南、广东、浙江等21个省市送检的12 452份临床病料进行细菌分离、生化试验和PCR方法鉴定,共分离出3 926株致病菌,并对其中所分离到的225株副猪嗜血杆菌和231株链球菌采用玻片凝集方法进行血清型分型。结果表明链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、波氏杆菌、致病性大肠杆菌和猪丹毒丝菌等9种病原菌已严重影响我国规模化养猪业的健康生产。     

猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定

目的:研究和探讨猪场副猪嗜血杆菌感染的分离培养鉴定的相关技术问题。方法:从山西省11个市的多个猪场送检的270例疑似样品实施副猪嗜血杆菌检测。然后再用琼脂扩散的试验对分离菌株实施血清型进行鉴别和评定。结果:在270例疑似样品中最后分离鉴定出了75株副猪嗜血杆菌,分离率为27.8%。结论:目前,副猪嗜血杆病有不同程度的感染,有血清1,4、5,12,13型,其中最为流行的是血清4型和血清5型。患上此类疾病跟季节以及猪的日龄是有关系的。     

副猪嗜血杆菌广东流行株的分离鉴定与基因分析

本研究从广东省各个地区送检病料中成功分离鉴定了4株副猪嗜血杆菌,并且针对副猪嗜血杆菌16S rRNA基因特异性进行PCR检测和基因测序同源性分析,通过GenBank联机比对分析,所分离的菌株与国内外菌株16S rRNA序列同源性在98.2%以上,分离菌株之间同源性在99.6%~100%之间,证明了所暴发的菌株是副猪嗜血杆菌。     

广东地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定

采用细菌分离的方法,结合PCR检测,生化鉴定,对广东地区2007年9月~2008年9月37个患病猪场送检的372份病料进行副猪嗜血杆菌分离鉴定,通过数据统计分析,显示副猪嗜血杆菌分离率达24.00%,副猪嗜血杆菌感染猪场阳性率达40.54%,表明副猪嗜血杆菌病在广东地区已普遍流行。