灰梨孢菌产孢培养基筛选

【目的】筛选操作方法简便、产孢效果好、适宜于大多数灰梨孢菌的产孢培养基,为灰梨孢菌研究提供一定的技术支持。【方法】从水稻、香蕉和杂草马唐上分离获得6个灰梨孢菌菌株,接种于紫花鸭趾草、高粱粒和大麦粒等9种培养基上,测定不同培养基对灰梨孢菌产孢量的影响,并比较分析紫花鸭趾草培养基对病菌致病力的影响。【结果】高粱粒、大麦粒和紫花鸭趾草培养基对6个菌株孢子形成均有明显的促进作用,以紫花鸭趾草培养基的促进作用最明显。与常用的高粱粒培养基相比,6个菌株在紫花鸭趾草培养基上形成的病菌分生孢子对香蕉和水稻的致病力没有明显差异。在4℃冰箱中,用紫花鸭趾草培养基保存蕉瘟病和稻瘟病菌菌种,两年后病菌仍具有生活力。【结论】紫花鸭趾草培养基是适宜于灰梨孢菌分生孢子形成的理想培养基,紫花鸭趾草培养基也适合于保存灰梨孢菌。     

培养基对尖孢镰刀菌非致病力菌株281产孢量的影响

选择8种培养基,采用液体培养法,研究培养基质对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.)281菌株小孢子产生量的影响,结果表明,在PDA培养基上培养144h得到最大小孢子产量1.283×109cfu/ml,与其它培养基产孢量差异显著(P=0.05)。培养至192h时,ATCC培养基的小孢子数量达到1.325×109cfu/ml,与PDA培养基之间无显著差异(P=0.05),与其它6种培养基之间差异显著(P=0.05)。综合比较8种培养基,PDA培养基培养时间短,配制简单,是较为理想的产小孢子培养基。     

稻瘟菌产孢培养基的筛选

采用随机区组多因素分析法对三种增减基产孢结果进行分析,结果表明在相同条件下,不同菌株之间产孢量存在显著差异。三种培养基中以燕麦片培养基产孢效果最好。但米糠培养基具有产孢效果好,成本低、操作简便的优点则实验室条件下大量培养稻瘟菌分生孢子的首选培养基。     

稻瘟病菌产孢培养基的筛选

从50种培养基中筛选出的粗面粉琼脂培养基,用作稻瘟病菌产孢培养基,具有成分简单、适应性广、培养效果好(培养时间短、产孢好、不易污染杂菌)的特点,是试验室条件下培养稻瘟病菌分生孢子理想的培养基。     

适宜大豆灰斑病菌生长和产孢的培养基筛选试验

将大豆灰斑病菌 (CercosporasojinaHara)在豆秸、豆荚、豆粒、豆粉、半综合、PDA、V8蔬菜汁 7种培养基上培养 ,测定了不同培养基对菌落生长速度和产孢量的影响。结果表明 ,豆粒、半综合、PDA、V8蔬菜汁培养基上的菌落生长速度比其他 3种快 ,每天平均生长 4 5 6 0～5 0 96mm2 ,但产孢量有很大差异。PDA和豆粒培养基产孢很少 ,平均每视野 2 4～ 4 2个 ,而半综合与V8蔬菜汁培养基的产孢量较大 ,为 2 8 4～ 30 2个。进一步对产孢量大的 2种培养基从原料成本和操作程序上比较 ,V8蔬菜汁比半综合培养基成本低 ,而且操作也很简便     

矿质元素对西瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌产孢的影响

研究了8种矿质元素对西瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌产孢的影响.初筛试验表明,Fe、Mn、Zn、Cu、B可在一定程度上抑制尖孢镰刀菌产孢,上述元素浓度分别为1、1、100、0.1、0.1 mg/L时对尖孢镰刀菌产孢的抑制率最高,分别为37.2％、18.6％、52.8％、47.7％、36.4％,Mo、Mg、Ca对尖孢镰刀菌产孢基本无抑制作用.正交试验表明,对尖孢镰刀菌产孢影响最大的因素是Mn,其次是Fe,最佳因素水平组合Fe、Mn、B、Cu的浓度分别为1、10、0.1、0.01 mg/L.     

稻瘟病菌产孢技术研究

通过比较稻瘟病菌在6种产孢培养基上的生长速度和产孢量,发现米糠培养基是最适宜的稻瘟病菌产孢培养基;在确定米糠培养基为产孢培养基的基础上进行了初步的产孢条件的研究,在每天光照16～24 h,并连续培养5～7 d的条件下产孢量最大。     

接骨木镰刀菌产呕吐毒素条件筛选及致病性分析

旨在通过单因素试验对接骨木镰刀菌产呕吐毒素的温度、时间、pH、碳源及碳源浓度进行筛选,应用响应面法设计试验,依据Box-Behnken中心组合原理筛选得到影响接骨木镰刀菌产呕吐毒素的关键因素。以呕吐毒素含量为响应值借助Design-Expert v8.0.6软件分析各影响因子与响应值的相互作用,预测最适条件并验证。试验得到一个拟合程度高、误差小的模型,得出呕吐毒素含量最大时的条件为：葡萄糖为碳源、培养温度26.19℃、pH 6.12、培养时间25.38 d。在此条件下,呕吐毒素含量预测值为2.50 ng/mL,实际测得呕吐毒素含量为2.57 ng/mL。低浓度呕吐毒素处理能减小马铃薯病斑面积20%。     

防治植物枯、黄萎病的优良放线菌株筛选

采用平板对峙法、生长速率法和组织研磨法对实验室前期获得的放线菌进行测定,以期筛选出对植物枯、黄萎病生防作用较为全面的优良放线菌株。皿内抑菌试验结果表明,菌株SC11的抑菌能力最为突出,对3种靶标菌的平均抑制率接近80%,菌株153、SE2和F46也有较好的抑菌效果,平均抑菌率均超过50%;耐药性试验结果表明,菌株153、SC11耐药性较强,菌株F46在各杀菌剂存在条件下均不能生长;盆栽试验结果表明,菌株153、SC11在不同作物上均有较强的定殖能力,对供试作物种子萌发及植株生长有明显的促进作用。经室外盆栽模拟大田试验证明,153、SC11放线菌具有较好的防病促生效果。总体来看,菌株153和SC11的生防特性较全面,抗菌、耐药、易定殖并且能够促进作物生长,具有一定的应用潜力。     

水稻立枯病抗性资源筛选

利用黑龙江省226份水稻种质资源进行苗期耐立枯病的鉴定,以轮枝镰刀菌为供试菌株,采用人工接种,筛选得到不同表现值的抗源材料。鉴定结果表明:鉴定筛选出高抗品种12份,分别为‘龙粳20号’‘东农429’‘富士光’‘龙稻5号’‘龙粳27号’‘垦稻18’‘黑粳2号’‘龙粳21号’‘朴洪根稻’‘石狩白毛’‘垦稻9’‘垦稻11’,占资源总数的5.31%;中抗品种29份,占总数的12.83%;中感品种为63份,占总数的27.88%;感病品种99份,占总数的43.81%;高感品种为‘合江11号’‘东农420’‘牡丹江31号’‘合江10号’‘东农419’等23份,占资源总数的10.18%,但没有发现免疫品种。     

小麦赤霉病菌拮抗菌的筛选及拮抗特性研究

【目的】从小麦根际土壤中分离对禾谷镰刀菌具有抑制作用的菌株,为防控小麦赤霉病及其毒素污染提供菌株资源。【方法】以小麦根际土壤为材料,通过平板对峙法筛选抑制禾谷镰刀菌生长的菌株;根据菌落形态、生理生化特性和16S rDNA系统发育分析对拮抗菌进行种类鉴定;通过PCR扩增抗菌脂肽基因、发酵条件试验、抑菌物质的抑菌特性分析探究拮抗菌的拮抗特性;通过接种小麦穗和小麦籽粒试验验证拮抗菌对小麦赤霉病的防治效果及对脱氧雪腐镰刀菌稀醇(Deoxynivalenol,DON)的抑制作用。【结果】从小麦根际土壤中分离出5株对禾谷镰刀菌具有拮抗作用的细菌,其中菌株XW-10的拮抗效果最好,经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其具有合成伊枯草菌素、表面活性素和丰原素等抗菌脂肽的基因。菌株XW-10生长的最适条件为CM培养基中培养10~48 h,抑菌物质主要存在于发酵上清液中,使禾谷镰刀菌的菌丝生长受到明显抑制,使孢子萌发率下降,也使菌丝形态畸变;发酵无菌上清液在低于90℃下可保持高抗菌活性,中性pH时抑菌效果最好。菌株XW-10发酵无菌上清液中的有效成分为粗蛋白,但对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K的作用不敏感。应用试验表明菌株XW-10发酵无菌上清液可促进小麦幼苗生长、通过抑制禾谷镰刀菌的生长降低小麦基质中DON毒素的含量和小麦穗赤霉病的发生率。【结论】筛选获得的菌株XW-10对小麦赤霉病有较好的防治效果,具有作为小麦赤霉病生防菌的潜质。     

特殊生境中植物枯、黄萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定

【目的】从特殊生境中分离筛选对植物枯、黄萎病具有较高生防活性的土壤放线菌,为深入开展枯、黄萎病的生物防治提供高效菌株。【方法】用平板稀释法,从采自广西、江苏、陕西等地特殊生境的5份土壤样品中分离放线菌;以西瓜枯萎菌、茄子黄萎菌、棉花枯萎菌作为靶标菌,通过平板对峙法进行初筛和复筛;采用菌丝生长速率法、水琼脂平板法,测定入选菌株发酵液的活性,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征及生理生化特性的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】从5份采自特殊生境的土壤样品中共分离出53株放线菌,并从中筛选出JSC14、GXW1、GXC1、JSW5、JSW7等5株对所有靶标菌都有明显拮抗效果的菌株,其中JSC14菌株发酵液抑菌作用最强。对5株菌发酵液抑菌活性的测定结果表明,JSC14和GXW1菌株发酵液对供试病原菌菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,菌丝生长抑制率为62.98%～95.38%,孢子萌发抑制率为69.52%～100.0%。经初步鉴定,菌株JSC14为链霉菌属白孢类群白色亚群白色链霉菌(Streptomyces albus),菌株GXW1为拟诺卡氏菌属链孢拟诺卡氏菌(Nocardiopsis streptosporus)。【结论】获得2株对植物枯、黄萎菌有较高生防活性的土壤放线菌,为进一步探讨利用特殊生境中的放线菌控制土传病害提供了研究材料。     

洋桔梗无土栽培轻质基质配方筛选研究

采用蛭石、泥炭、珍珠岩和废弃物蜂窝煤渣进行基质配比栽培试验,通过发芽率、发芽时间、苗高、地径等指标比较其生长状况,筛选出适合洋桔梗生长的基质配比和理化性状范围。结果表明：V (珍珠岩) :V (泥炭) :V (蛭石) :V (蜂窝煤渣)= 2:3:1:4的T₆为最优方案,显著优于对照。较适合洋桔梗生长的基质理化性状为：容重为0.36 g/cm³,总孔隙度为63.67%,通气孔隙为23.55%,持水孔隙为40.12%,气水孔隙比为0.59,pH值为6.9,电导率为38.8 μS/cm。     

培养条件对串珠镰刀菌提取物抑制蛋白核小球藻的影响

以对蛋白核小球藻生长抑制率和提取物质量为评价指标,采用正交设计方法,研究了培养条件对串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)提取物及其抑制蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)活性的影响。结果表明,培养温度、碳源、氮源、无机盐组合、pH值、接种量等因子对串珠镰刀菌提取物及其抑藻活性具有显著影响。优化的串珠镰刀菌培养条件为:培养温度22℃,培养液组成为麦芽糖(2%)、蛋白胨(2%)和CaCl2+MgSO4(0.1%+0.05%),pH8、接种量为每瓶13个菌饼、装液量每250 mL为160 mL、振速为140 r.min-1。优化条件下,串珠镰刀菌提取物对蛋白核小球藻的EC50为0.33 g.L-1。本试验结果为串珠镰刀菌次生代谢物中抑藻活性物质的分离、鉴定,进而开发新型抑藻剂提供了依据。     

一种适于小麦愈伤组织诱导与继代培养的培养基

培养基是植物离体培养体系中最能体现人为调控作用的因素.N6培养基的出现曾极大地推动了禾本科植物组织和花药培养的进步,并且至今仍在许多重要作物组织及细胞培养中发挥着重要作用.     

1株拮抗棉花枯、黄萎病菌的纤维素分解菌筛选

为获得具有拮抗棉花枯、黄萎病菌的棉杆促腐菌剂,进行棉杆纤维素分解菌分离及拮抗菌株的筛选,采用平板对峙法测定菌株对棉花枯、黄萎病菌菌丝生长的影响,通过生长速率法和孢子萌发法测定菌株发酵液对2种病原菌菌丝生长以及孢子萌发的影响,并对筛选得到的菌株进行鉴定。结果获得1株具有抑菌效果的棉杆纤维素分解菌SJ-3,其羧甲基纤维素酶活(CMCase)达到69.1 U/mL,滤纸酶活(FPase)达到48.5U/mL。该菌对棉花枯、黄萎病菌菌丝生长均有显著抑制,抑制率分别达到24.7%、23.1%。其发酵液具有抑菌活性,较高的发酵液浓度能增强对病原菌的抑制作用,发酵液对枯萎病菌孢子萌发的抑制作用较强,最高抑制率为21.6%,而对该病原菌菌丝生长的抑制较弱,最高抑制率仅为6.2%;发酵液对黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作用,最高分别达到32.2%、21.4%。经鉴定,菌株SJ-3为普通青霉(Penicillium commune)。     

枯草芽孢杆菌对百合枯萎病的防治效果

采用菌丝生长速率法及孢子萌发法,研究枯草芽孢杆菌对百合枯萎病菌的抑杀效应。枯草芽孢杆菌无菌滤液在一定体积分数范围内能有效抑制枯萎病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且随着无菌滤液体积分数的增加,孢子萌发抑制率也增大。体积分数为20%的枯草芽孢杆菌无菌滤液,处理后7d抑制率可达78.8%。体积分数为60%时,可完全抑制孢子萌发。盆栽防治试验表明,枯草芽孢杆菌菌液对百合枯萎病的发病抑制率达65.3%。且该菌液对百合的生长有一定的促生功效,说明枯草芽孢杆菌对百合枯萎病有抑菌和防病作用,且抑菌作用随枯草芽孢杆菌菌液体积分数的增加而增强。