苏云金芽孢杆菌BtC008杀虫晶体蛋白基区鉴定、克隆及杀虫活性分析

苏云金芽孢杆菌BtC008对棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有高毒力。本文分析了其杀虫基因类型包括cry1Ab、cry1Ca、cry1Ia、crygAb和一种新的cry1类基因，SDS-PAGE分析其至少2种cry1类基因获得了表达，在分子水平说明了该菌株高毒力的原因。在此基础上克隆了1种cry1Ab类杀虫晶体蛋白（insecticidal crystal proteins，ICPs）基因，并被Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry1Ab20。序列分析显示该基因所编码蛋白与已知的Cry1Ab13有1个氨基酸不同。将cry1Ab基因毒性片段（1．95kb）插入表达载体pET-21b，转化Escherichia coli Rosetta（DE3）菌株，表达的包涵体蛋白对小菜蛾和棉铃虫幼虫具有杀虫活性，LC60分别为100．74μg／mL和29．87μg/mL，进一步明确了Cry1Ab20蛋白的杀虫活性区。     

植物提取物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的影响

植物提取物对苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)的杀虫活性有不同程度的影响。试验结果表明,处理48 h后,花椒Zanthoxylum bungeanum、假连翘Duranta repens、南洋楹Albizia falcataria、羊蹄甲Bauhinia variegata、番石榴Psidium guajava、荷花玉兰Magnolia grandiflora 的乙醇提取物对Bt的杀虫活性有显著增效作用; 小蜡Ligustrum sinense、胜红蓟Ageratum conyzoides、 一品红Euphorbia pulcherrima、烟草Nicotiana tabacum、南洋杉Araucaria cunninghamii、 繁缕Stellaria media、光叶子花Bougainvillea glabra、小飞蓬Conyza canadensis、地肤Kochia scoparia的乙醇提取物对Bt杀虫活性有显著拮抗作用;其他植物提取物则没有显著影响。     

苏云金杆菌（Bt）芽孢的杀虫作用

本文简要综述了苏云金杆菌（Ｂｔ）芽孢的杀虫作用。讨论了Ｂｔ芽孢和晶体之间的增效作用，芽孢孢衣蛋白和晶体蛋白的同源性，芽孢孢衣蛋白的杀虫活性以及芽孢杀虫的可能机制。     

苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用

本文简要综述了苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用。讨论了Bt芽孢和晶体之间的增效作用,芽孢孢衣蛋白和晶体蛋白的同源性,芽孢孢衣蛋白的杀虫活性以及芽孢杀虫的可能机制。     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白作用机制的研究进展

自本世纪６０年代以来,由于化学农药引起的环境污染、害虫普遍产生抗药性等原因,生物防治越来越受到人们的重视。在现有的各种生物防治策略中,研究和利用微生物杀虫剂发展很快,最突出的方法是利用苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）进行防...     

桂林喀斯特地貌分布区苏云金芽孢杆菌菌株的分离鉴定

从桂林喀斯特地貌分布区采集了165份天然土壤样品,从中分离出10株苏云金芽孢杆菌。光学显微镜观察发现有菱形、球形、不规则等晶体类型。通过核酸电泳比对其大质粒DNA的图谱来区分菌株的类型,发现该批菌株有良好的多样性。对这10株菌进行cry1、cry11、cry2、cry3、cry4、cry5、cry6、cry7、cry8、cry9、cry10类基因的PCR-RFLP鉴定,在8株菌中分别发现含有cry1、cry11、cry2、cry3等基因类型,而G4、G6菌株中不含有已知基因。SDS-PAGE分析了10株野生菌株的杀虫晶体蛋白表达谱,发现有10株表达约130kD蛋白,有3株既表达130kD蛋白又表达60kD蛋白。对大猿叶甲、小菜蛾进行了杀虫活性测定,发现了一株对大猿叶甲具有较高毒力的菌株G8,其LC50为48.2μg/ml,置信区间为9.6～1.4ml;有6株菌株对小菜蛾有高活性。     

苏云金芽孢杆菌杀线虫晶体蛋白的相关基因

本文从苏云金杆菌对线虫活性的发现、编码毒蛋白的基因、毒蛋白的种类大小及苏云金杆菌对线虫的作用机理4个方面进行了综述，并简要展望了其研究和应用前景。     

苏云金芽孢杆菌cry9Aa基因的克隆、表达及活性分析

为了解决目前广泛使用的cry1A类基因的抗性问题,获得对鳞翅目害虫高效杀虫基因,从菌株SC5D2和T03C001中鉴定并克隆到了2个新型cry9Aa基因,被Bt国际命名委员会分别正式命名为cry9Aa3和cry9Aa4,并进一步对其编码的蛋白进行活性测定。结果显示,2个基因对小菜蛾、玉米螟均具有较高的杀虫活性,其中对小菜蛾的LC50分别为1.83μg/mL和1.90μg/mL,对玉米螟的LC50分别为6.93μg/mL和1.06μg/mL。同时,两种Cry9Aa蛋白对Cry1Ac抗性小菜蛾都具有较高的杀虫活性,LC50分别为1.74μg/mL和1.39μg/mL,与敏感小菜蛾杀虫活性测定数据相当,表明Cry9Aa与Cry1Ac没有交互抗性。     

苏云金芽孢杆菌的分类及生物活性蛋白基因

本文综述叙述了苏云金苏孢杆菌鞭毛抗原血清亚种的分类、生理生化鉴定，伴孢晶体对无脊椎动物４个门中的生物以及节肢动物门中９个目昆虫的生物活性，生物活性蛋白及其其编码这些蛋白基因原定位和分类等方面的新动态。     

苏云金芽孢杆菌防治鞘翅目害虫的研究进展

本文综述了国内外有关防治鞘翅目害虫的苏云金芽孢杆菌菌株、杀虫晶体蛋白及作用方式、生物测定以及制剂和应用等方面的研究进展。     

对黏虫具有杀虫活性的Bt蛋白筛选及分析

为筛选对黏虫[Mythimna separata(Walker)]具有毒杀作用的苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白,本研究提取Cry1类、Cry2类、Cry9类及Vip3A类等11种蛋白,通过人工饲料喂毒方法对黏虫进行生物活性测定。结果表明,Cry1Ac、Cry1Ab、Cry2Ab、Cry1Be及Cry1Bb蛋白对黏虫具有杀虫活性,其致死中浓度依次为5.09、17.71、26.75、27.42及43.93μg/g;Cry9Aa、Cry9Eb、Cry9Ee蛋白对黏虫生长具有抑制作用,其浓度为10μg/g时的体重抑制率分别为78.4%、79.0%、86.9%,浓度为100μg/g时的体重抑制率分别为92.8%、95.7%、96.7%;Cry1Ba、Cry1Ca和Vip3Aa蛋白对黏虫无显著活性。本研究为黏虫的生物防治奠定了基础,并为抗虫转基因作物的研究提供优良的候选基因。     

水稻螟虫对4种Bt杀虫蛋白的敏感性测定

采用人工饲料喂毒法和浸叶喂毒法测定了二化螟、大螟和稻纵卷叶螟初孵幼虫对4种Bt杀虫蛋白的敏感性。二化螟对Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1C和Cry2A的LC50分别为1.739、2.6452、.794 ng/mg和15.965 ng/mg;大螟依次为2.455、10.046、11.803 ng/mg和35.359 ng/mg;稻纵卷叶螟依次为4.000、1.611、69.031μg/mL和12.708μg/mL。作者就不同水稻螟虫对不同Cry蛋白的敏感性差异及其在转基因抗虫作物中的应用作了讨论。     

苏云金芽孢杆菌Cry8Ca2蛋白的纯化与活性的研究

cry8 Ca2基因是本实验室自行分离克隆的一种新型苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白基因,其表达130 kDa蛋白对铜绿异丽金龟(Anomala corpulenta)和黄褐异丽金龟(A.exoleta)幼虫具有较高的活性。本研究对Cry8Ca2蛋白原毒素及胰凝乳蛋白酶消化片断的纯化条件及活性进行研究,最适的消化条件为质量比1∶20,37℃,消化1 h。通过阴离子交换层析得到纯的活性毒素蛋白。用原毒素与纯化的毒素对铜绿丽金龟幼虫进行生测,Cry8Ca2原毒素蛋白的LC₅₀为0.47μg/g土,纯化的毒素的LC50为0.08μg/g土,毒素的杀虫活性可以达到原毒素的6倍。     

Susceptibility of field-collected populations of the southwestern corn borer,Diatraea grandiosella,to Bacillus thuringiensis

The susceptibilitity of newly hatched larvae of laboratory-adapted and field-collected populations of the Southwestern corn borer, Diatraea grandiosella (Dyar) (Lepidoptera: Crambidae), to a Bacillus thuringiensis protein (Cry1Ab) was examined using a larval feeding bioassay. D grandiosella populations were collected from five states: Missouri, Kansas, Texas, Tennessee and Kentucky. Using larval mortality as the end-point of the bioassay, the magnitude of differences in the susceptibility of the laboratory-adapted and the field-collected populations to Cry1Ab protein varied from one to 46 times depending on the time of observation and the standard of comparison (LC50 or LC95). However, significant differences in susceptibility to Cry1Ab protein among these populations were not detected when the comparisons were based on growth inhibition (EC50 or EC95); the magnitude of differences was less than fourfold. Either using larval mortality or larval growth inhibition, the results indicated that the field-collected populations of D grandiosella were susceptible to Cry1Ac, and differences in susceptibility may reflect natural variation among populations. The bioassay using larval growth inhibition offers advantages over that using larval mortality, including giving more accurate representation of the toxicological effects of the toxin.