金线莲人工种子制作技术及萌发研究

以金线莲为实验材料,通过液体悬浮培养建立原球茎悬浮系,并以原球茎为人工种子的繁殖体,研究了人工种皮基质、人工胚乳组分、贮藏条件、萌发基质等对人工种子萌发率和成苗率的影响。结果表明,以4%海藻酸钠 2?Cl2 2%壳聚糖为人工种皮基质,1/2MS液体培养基 0.2mg/LNAA 0.1mg/LGA3 0.5mg/LBA 0.4mg/L青霉素 0.3%多菌灵粉剂 0.2%苯甲酸钠 1.0%蔗糖 1.0%活性炭作为人工胚乳成分制作的人工种子,其萌发率和成苗率最高。这样的人工种子在4℃条件下贮藏20天后的萌发率及成苗率分别为58.3%和55.5%,随着贮藏温度的升高和贮藏时间的延长,人工种子的萌发率和成苗率均大幅度下降。     

不同包埋基质对半夏人工种子萌发率的影响

以半夏小块茎为人工种子的繁殖体,通过正交试验研究了不同人工种皮基质对人工种子萌发率的影响.结果表明,以MS液体培养基+海藻酸钠(3%)+活性炭(0.5%)+多菌灵(0.3%)+苯甲酸钠(0.2%)+壳聚糖(0.05%)+6-BA(0.5mg/L)+NAA(1mg/L)制作的人工种子,其萌发率最高,达到80%.     

不同处理方法对滇重楼种子萌发及成苗的影响

通过对滇重楼种子进行不同处理,探讨其萌发时间、萌发率、成苗率的影响,选出最佳处理方法,以便今后指导实际育苗。进行去除假种皮、冷藏、不同浓度GA 3浸泡等对比处理,统计出(90,120,150,180,210 d)不同时间段的萌发情况及总萌发率和成苗率,并做方差分析。研究表明,假种皮对种子的萌发时间、萌发率、成苗率影响不大;低温冷藏对促进种子提早萌发有一定的作用;一定浓度的GA 3能够促进滇重楼种子的提前萌发,但浓度过高则会抑制种子的提早萌发,浓度为500 mg ·L ^-1 时萌发时间最佳;一定浓度的GA 3能提高滇重楼种子的萌发率及成苗率,浓度为300 mg ·L^-1 时相对萌发率(142%)及相对成苗率(158%)最大;但过高则会降低种子萌发率,减少成苗率,当GA 3浓度达到700 mg ·L^-1 时,萌发率及成苗率最低。     

半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化条件

为获得同步化的人工种胚,以半夏疏松愈伤组织为试验材料,采用悬浮培养的方法,探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用,为半夏人工种子制作提供同步化种胚。结果表明:以MS为基本培养基,添加1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行悬浮培养,温度为8℃,处理12h,恢复36h,同步化效果最好,细胞分裂指数为13.86%;咖啡因浓度为2.00 mmol/L,处理2 h,恢复48 h,效果较好,细胞分裂指数为9.42%;蔗糖浓度为40 g/L,处理5 d,恢复4 d,效果一般,细胞分裂指数为5.33%。分别先后继代3次于MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行膨大培养及MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+10 g/L sucrose+300 mg/L CH进行分化培养。温度处理组微细胞团为42.33个,种胚分化率为71.11%;咖啡因处理组微细胞团为34.33个,种胚分化率为55.56%;蔗糖处理组微细胞团为40个,种胚分化率为57.78%。因此,半夏悬浮培养细胞同步化形成人工种胚的适宜条件为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH,8℃处理12 h,恢复36 h,再转接进膨大及分化培养基继续培养。本研究为半夏人工种子生产提供技术参考。     

植物人工种子技术研究进展

综述了植物人工种子这一高新生物技诞生30多年来术在国内外的发展概况,主要涉及人工种子的概念、人工种胚的诱导与同步化、人工胚乳成分的筛选、人工种皮的制作、人工种子的包埋、人工种子的贮藏、人工种子的萌发与成苗,以及人工种子存在的问题.展望了人工种子的应用前景.     

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)高效再生体系的建立

为建立多花黄精高效再生体系,试验以多花黄精种子无菌萌发后形成的幼芽为材料,采用正交试验设计,筛选其愈伤组织和不定芽诱导的较优配方,并进一步开展了不定芽增殖、生根和移栽驯化试验。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L有利于诱导无菌幼芽形成愈伤组织,诱导率达83.5%;不定芽诱导较好的培养基配方为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L和MS+6-BA3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,诱导率均为100%;不定芽增殖较好的培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,增殖系数达4.7;适宜的生根培养基配方为1/2MS+NAA 0.1 mg/L;组培苗移栽到蛭石∶泥炭土∶珍珠岩=1∶2∶1的混合基质中,成活率达100%。试验构建了以多花黄精种子为外植体的离体高效再生体系,为多花黄精种苗快速繁殖提供技术途径。     

仙茅人工种子的初步研究

本研究以仙茅幼叶为材料,采用不同的激素浓度诱导出愈伤组织,用愈伤组织诱导出不定芽。然后以不定芽为材料,用不同浓度的包裹基质和固化基质,制作一层膜人工种子和双层膜人工种子,测定它们的萌发率和失水率。结果表明:MS基本培养基中加入0.1 mg/L的2,4-D、1.5 mg/L的KT,3%的多菌灵和8 mg/L的柠檬酸,诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达96%。以3%的海藻酸钠,MS基本培养基,0.3%多菌灵,0.8 mg/L NAA,0.05 mg/L 6-BA作为人工胚乳。以2%的CaCl_2为固化剂,反应两次,第一次固化5 min,第二次固化10 min,制成的人工种子形态状况最好,失水率低且萌发率高。本研究采用双层膜方式,制作的人工种子在抗压和保水性方面有所增强,可在一定程度上增加萌发率。     

红凉伞愈伤组织诱导及快繁技术体系建立

为解决药用观赏植物红凉伞野生资源匮乏、自然繁殖率低等问题，以红凉伞种子为材料，探讨取材时间、培养基、外植体类型、植物生长调节剂等因素对无菌苗萌发、愈伤组织诱导、丛生芽诱导增殖和生根培养的影响，建立红凉伞快繁技术体系。结果表明，取材时间是红凉伞种子无菌培养的重要影响因素，3月取材的种子培养效果最佳，启动时间7 d,萌发率达93.68%;愈伤组织诱导的最佳外植体是茎段，显著高于根和叶，最适培养基为MS+2,4-D 0.2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L,诱导率为93.33%。愈伤组织呈颗粒状、冰沙状、致密状3种形态；丛生芽诱导的最佳培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率为91.11%,增殖系数3.47,芽苗生长健壮；最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,生根率为90.74%,平均根数4.6条，移栽成活率为75.4%。     

巴戟天胚乳诱导愈伤组织及三倍体再生

目的:利用巴戟天种子内胚乳为外植体进行离体培养获得三倍体。方法:选取未成熟巴戟天种子内胚乳,置于不同培养基上诱导愈伤组织和分化再生植株,并对植株倍性进行根尖染色体鉴定。结果:在MS+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)2.0 mg/L+6-BA(6-苄基嘌呤)1.0 mg/L培养基上诱导获得愈伤组织,诱导频率达58.9%。愈伤组织在MS+6-BA1.0~2.0 mg/L+IBA 0.1~0.5 mg/L分化培养基上分化出不定芽。不定芽在1/2 MS+IBA 0.5 mg/L上诱导生根,生根率100%。再生植株根尖细胞染色体数目为2 n=3 x=33。结论:利用巴戟天胚乳培养获得三倍体是创造多倍体新种质的有效途径。     

制作工艺对甘薯人工种子萌发的影响

以脱毒甘薯“一窝红”的带腋芽茎段为繁殖体,研究了制作工艺对甘薯人工种子萌发的影响。结果表明,在人工胚乳中添加单一种激素有利于人工种子萌发,添加0．5mg/L NAA萌发率达100％;同时添加两种激素不利于人工种子的萌发。包裹基质中添加活性炭助于人工种子萌发,而添加淀粉、CaCl2对人工种子萌发不利。人工种子宜选用10％环己烷作外膜,萌发率高,用壳聚糖作外膜效果不好。     

大白杜鹃组培与快繁研究——基本外植体和初代培养基筛选

以大白杜鹃茎尖、茎段、种子为试验材料,对大白杜鹃进行了初代培养研究。结果表明:茎段比茎尖更适合作为芽诱导培养材料;基本培养基以1/4 MS为宜,适合芽诱导培养基配方为1/4 MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L,芽诱导率在92%以上。种子萌发培养基配方也为1/4 MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L,萌发率达100%。     

水稻籼稻杂种人工种子制备的研究

从二个水稻籼粳杂种幼穗来源的愈伤组织上,分化出大量不定芽。在2,4-D0.2mg/L、BAP2mg/L的MS培养基上,亚优2号不定芽增殖率可达3.5。无菌条件下,以不定芽作材料制备的人工种子发芽率最高可达60.0％,最低也可达15.0％。使用麦芽糖代替蔗糖,以及用较大的不定芽都可提高人工种子发芽率。     

栎叶绣球‘雪花’再生体系的建立

为获得大量栎叶绣球的无菌苗,本研究以栎叶绣球‘雪花’(Hydrangea quercifolia’Snow Flake’)的叶片为试验材料,通过不同浓度的激素组合处理。结果表明,最适宜的愈伤组织诱导培养基为:MS+1.5 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA,出愈率约为80.7%;最适宜的不定芽分化培养基为:MS+2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,诱导率约为90.3%;最佳的增殖培养基为:MS+2.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,增殖率约为5.2;最佳的壮苗培养基为:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.15/0.2 mg/L IBA,幼苗平均高度约为4.57 cm;最佳的生根培养基为:1/2 MS+0.4 mg/L IBA,平均生根率约为88.3%,平均根长约为6.5 cm。本研究初步建立了栎叶绣球‘雪花’的再生体系,为其扩大繁殖和之后的遗传转化研究提供了帮助。     

两种南瓜再生体系建立的方法

为建立不同途径的南瓜再生体系,以‘大果蜜本’南瓜种子子叶节和授粉后2天的子房为外植体,对南瓜愈伤组织和胚状体发育两种再生途径进行研究。结果表明：愈伤组织发育途径中,3%的次氯酸钠溶液消毒15 min是最佳灭菌方式,MS+3.0 mg/L6-BA+ 0.1 mg/L NAA是诱导南瓜子叶节丛生芽形成的最佳培养基,MS+0.2 mg/L NAA是诱导单芽成苗的最佳培养基;胚状体发育途径中MS+4.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA和MS+0.06 mg/L TDZ均能有效诱导南瓜胚状体形成,MS培养基是诱导胚状体成苗最佳培养基。本研究成功建立了南瓜愈伤组织和胚状体发育两种途径形成再生植株的体系。     

Study on Hybridation and Aseptic Seeding as Well as Rapid Propogation of Demdrobium officinale and Dendrobium aduncum

[Objective]To study the system of aseptic seeding and rapid propogationtin of hybrid seeds of Demdrobium officinale and Dendrobium aduncum [Methods] Demdrobium officinale and Dendrobium aduncum were the objects of research,and their hybrid seeds were gained by artificially auxiliary hybridation. The seeds were induced to germinate in vitro,and study on the technology of aseptic seeding was finished. [Results]Successful hybridation of Demdrobium officinale and Dendrobium aduncum could be easily realized,and hybrid fruit-bearing rate could reach 80%; the suitable culture medium for seeds was: MS +1. 0 mg/L 6-BA +0. 1 mg/L NAA,the germination rate after 30 d of cultivation was 89. 7%; appropriate culture medium for proliferation of protocorm was: MS + 1. 5 mg /L 6-BA + 0. 1 mg /L NAA + 100 g /L banana + 1. 0 mg /L AC; appropriate culture medium for differentiation of protocorm was: MS + 1. 5 mg /L 6-BA + 0. 1 mg /L NAA + 200 g /L potato + 1. 0 g /L AC; the formula of culture medium for strenghening the seedlinge and nurturing the rooting was: 1 /2 MS + 0. 6 mg /L NAA +100 g /L banana + 1. 0 g /L AC,the plant grew robustly,the rooting percentage was 100%,and the survival rate of transplanting was higher than 95%. [Conclusions]This method ascertains the optimum culture media formula in the whole regeneration process and all phases from seed germination to acclimatization and transplantation,so fine solidation is laid for its germplasm innovation and industrialized seedling production.     

掌叶半夏微茎尖培养脱毒和快繁体系的建立

研究了茎尖大小、激素浓度、培养基成分对药用植物掌叶半夏脱毒效果的影响以及影响无病毒苗快速繁殖的因素等,结果表明：茎尖大小是影响茎尖成活和脱毒效果的主要因素,0.2~0.5mm的茎尖培养在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L培养基上,成活率为53.3%,病毒脱除率为76.7%,培养基中附加247mg/L NH₄ ⁺可有效提高茎尖成活率至86.7%,同种培养基上继续培养,可一次性成功诱导形成试管苗,移栽成活率高达100%。MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+GA₃ 0.5mg/L组合最有利于试管茎的形成和发育,从而建立了以掌叶半夏微茎尖为外植体的脱毒和快速繁殖体系。     

珍稀中药材白芨组培快繁体系的建立

为建立珍稀中药材白芨的组培快繁体系,以成熟种子为外植体,筛选适于萌发生长的蔗糖、外源激素(6-BA、IBA、IAA和NAA)和活性炭的浓度、光照时间以及炼苗基质配比。结果发现：在MS+4 g/L琼脂+20 g/L蔗糖+光照(200 lx) 24 h/d的基础上,培养7天后种子均可发芽;添加1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭,叶片数达5枚;添加1.5 mg/L IBA+1.0 g/L活性炭,根数和根长分别达到3条和4 cm;蛭石:泥炭=1:2的基质配比下,炼苗成活率达100%。该研究结果可为白芨的大规模种植、相关药物生产以及野生资源保护等方面提供理论基础与技术支撑。     

青岛百合组织培养研究

以青岛百合叶片为外植体,研究了消毒时间、培养基、生长调节物质对青岛百合叶片不定芽发生、增殖和生根的影响。结果表明：用0.1%氯化汞对青岛百合叶片消毒5 min时效果最好,污染率为31%,萌动率为79%,诱导率为65.2%。青岛百合最佳叶片不定芽分化培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L;最佳不定芽增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2mg/L;最佳生根的培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L,形成了较为完善的组织培养再生体系。     

人参果‘长丽’叶片再生体系的建立

为了建立人参果遗传转化再生体系,以‘长丽’品种试管苗叶片为材料,研究了培养基种类、pH对人参果试管苗生长和激素组合对人参果叶片不定芽再生的影响。结果表明：培养基pH 5.7~6.0时,MS培养基有利于人参果试管苗的生长,培养24天时平均株高达8.5 cm;GS培养基有利于试管苗生根,培养24天试管苗的生根量达到13.8个/株。6-BA与TDZ配合使用,可显著提高叶片不定芽的再分化能力,在MS+6-BA 2.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L培养基上叶片的再分化率达到83.3%,再分化系数达8.5。本试验研究发现人参果叶片不定芽再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。