一种简便快速制备水稻PCR模板的方法及其应用

目前在水稻分子生物学实验中DNA提取的常用方法有CTAB提取法和SDS提取法。CTAB提取法提取的DNA质量高而且量大，主要用于RFLP、Southem杂交等实验；SDS方法提取的DNA杂质略多，也可以大量提取，适合用于基于PCR的分子标记实验。但这两种DNA提取方法所需成本较高，技术性强，叶片用量大，难以满足水稻育种实践的需要，实用性不强。因此，在水稻分子育种实践中，急需一种叶片用量小、提取程序简单快捷的方法提取DNA，以满足开展分子标记辅助选择育种、分子标记快速检测种子纯度等应用研究的需要。许多分子标记都基于PCR技术，如AFLP、SSR、RAPD、SNP、EST等。目前已开发出大量的水稻SSR标记。由于水稻基因组中存在着丰富的SSR标记而且多态性较好，在水稻群体分子标记连锁图谱构建、基因定位、QTL分析等研究中广泛应用，在水稻种子纯度鉴定和分子标记辅助选择育种方面已有研究报道。本文报道了一种简便的DNA提取方法，既能快速提取DNA。又只需要少量叶片，同时利用SSR标记鉴定了“两优培九”种子的纯度。     

燕麦种子基因组DNA不同提取方法的比较

为缩短DNA提取时间,省去种子萌发到幼苗培养等一系列过程,以燕麦种子为材料,用5种方法提取其基因组DNA,通过紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,以ITS2为引物将燕麦种子基因组DNA进行PCR扩增。结果表明:5种方法中除了传统CTAB法,其余方法都可以提取到燕麦种子基因组DNA,但不同方法提取到的基因组DNA的纯度、浓度存在差异,试剂盒法提取的DNA质量最好、纯度最高,但提取的DNA量少且成本高,改良CTAB法和高盐低pH法提取的DNA的纯度相近,都有少量的蛋白质和糖类的污染,改良SDS法提取的DNA纯度最低。     

砂生槐单粒种子DNA的快速提取及RAPD检测

为探讨快速提取种子DNA的有效方法,以砂生槐单粒种子为试验材料,在传统CTAB法基础上建立一种快速提取DNA的方法,并通过紫外分光光度法、凝胶电泳和RAPD-PCR检测所提基因组DNA。结果表明:快速法提取得到了质量较好、浓度及纯度较高的DNA,可以满足分子生物学实验的要求。此方法操作方便、快捷,是一种有效的砂生槐种子的DNA提取方法。     

小麦不同部位DNA提取的比较研究

[目的]探讨小麦不同取材部位对DNA提取质量和产率的影响。[方法]分别以小麦的种子、根尖和幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法分别提取小麦3个部位的基因组DNA,用0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模版进行RAPD扩增。[结果]采用小麦叶片提取DNA的产率最高,种子次之,根尖最低。3个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为756μg/ml;其次是种子,为233μg/ml;根尖获得的DNA浓度最低,为90μg/ml。小麦不同部位提取的DNA模板对RAPD扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。[结论]小麦3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

三种玉米DNA提取方法探究

采用改良CTAB法、改良SDS法、快速提取法分别以玉米种子、黄化苗叶片、正常生长期绿色叶片为材料提取细胞总DNA。结果表明用3种不同方法提取的DNA纯度符合分子生物学实验要求。不同部位的材料、不同的提取方法，DNA得率不同。玉米干种子优适用于在快速提取法中提取DNA；改良CTAB法、SDS法宜从玉米黄化苗叶片和正常绿色叶片中提取DNA。     

黄瓜种子DNA快速提取新方法及其在SSR检测种子纯度中的应用

研究快速提取黄瓜种子DNA的新方法,目的在于解决多年来无法快速提取黄瓜种子DNA进行种子纯度鉴定这一困扰业界的难题。结果表明:使用该法提取黄瓜种子DNA操作简便,只需简单捣碎,不需研磨,不用离心、沉淀,耗费低;同时不使用有毒试剂,对人体危害较小;提取速度较快。SSR分析结果表明,该法提取的DNA能够满足利用SSR进行种子纯度检测的目的,值得大力推广。     

甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化

[目的]优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法,为甜瓜相关分子研究提供技术支持.[方法]以甜瓜半粒干种子为材料,比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果,并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度.最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果.[结果]4种提取方法中,改良CTAB法提取的DNA提取率最高,且DNA质量和纯度均高于其他提取方法.优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为:提取液CTAB浓度2%,裂解时间20 min,苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提1次,再用氯仿/异戊醇(24:1)抽提1次].在此条件下,提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好,以此为模板进行SSR分子标记分析时,电泳条带稳定、清晰,基本无杂带,可清楚区分品种间的差异.[结论]优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好,可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求.     

5个燕麦品种基因组DNA的提取

以5个不同品种的燕麦种子和叶片为原料,用CTAB法提取燕麦基因组DNA,最后通过吸光度来检测所提取DNA的纯度和质量,确保提取出纯度较高的燕麦基因组DNA样品。结果表明,燕麦叶子基因组DNA比燕麦种子基因组DNA要容易提取得多,得到的DNA溶液质量比较高,而这5种燕麦的基因组DNA的提取难易程度不同,只有符合要求纯度的燕麦基因组DNA才可以用于进一步研究。     

一种简便实用的玉米干种子基因组DNA提取方法

利用改良的CTAB法提取玉米干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,表明获得的DNA样品纯度较好、无明显降解,DNA质量可满足下游分子生物学实验要求,证实该方法是提取玉米基因组DNA的一种有效方法.     

中国李基因组DNA提取方法的优化

3种常用的植物基因组DNA提取方法在中国李上的实验，结果表明：改良陈大明法提取的DNA纯度高，产率高。为满足植物样品较少时提取DNA的需要，将该法进一步优化的结果表明，不使用液氮研磨而是在低温条件下将组织捣碎的微量法同样提取出了产率高、纯度高的DNA，完全满足RAPD扩增的需要。裂解缓冲液中NaCl的浓度以1．1mol／L提取DNA的产率最高，且DNA的质量与其他浓度之间没有明显差异。     

不同方法提取鳗鲡病原茵DNA模板的差异分析

利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标，对酚一氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析．结果表明：1）不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、纯度及分子质量大小存在差异，但以这3种方法提取的病原菌DNA为模板，均能成功扩增到细菌16SrD．NA和外膜蛋白的保守序列．其中，酚一氯仿提取的模板DNA浓度较低、纯度较高；水煮法和碱裂解法提取的模板DNA浓度较高、纯度较低．2）电泳显示，3种方法获得的模板DNA扩增出的16SrDNA保守序列条带均一，没有显著差异，但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异．     

整粒和半粒青稞种子DNA的提取及RAPD检测

【目的】从青稞种子中提取高质量的基因组DNA。【方法】以半粒无胚青稞种子和整粒青稞种子为材料,用6种不同的方法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,紫外分光光度计法检测DNA的浓度和纯度,并对提取的DNA进行了RAPD-PCR扩增检测,同时将剩下的半粒有胚青稞种子进行萌发实验。【结果】从半粒和整粒青稞种子中都可以提取到高质量的DNA,用提取的DNA作为RAPD-PCR扩增检测模板,得到的扩增产物条带清晰,多态性条带丰富,其质量满足RAPD分子标记的要求。【结论】高盐低p H法提取的DNA质量最好,是这6种方法中的最佳方法;半粒青稞有胚种子也能够正常生根发芽,可作为遗传实验的材料。     

玉米种子纯度鉴定中DNA提取方法的比较研究

分别以玉米干种子胚、幼芽和幼苗为材料提取DNA,并对所得DNA的纯度和质量进行检测,结果显示,利用玉米干种子胚提取的DNA质量及分子量大小与幼苗法相当,完全可以满足SSR分子标记对玉米杂交种纯度的鉴定。     

用于SSR分析的大豆干种子DNA提取条件的优化

[目的]探讨适于SSR分析的大豆干种子DNA提取的最佳方法。[方法]以2个大豆品种的干种子为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取大豆基因组DNA,用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定其DNA在A230、A260和A280下的吸光值,根据A260／A230和A260／A280的比值检测DNA的纯度和浓度,并分别以两种DNA为模版进行SSR—PCR扩增。[结果]相同DNA提取条件下,SDS法提取DNA样品的纯度和浓度均高于CTAB法,SDS终浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时所提取大豆种子DNA的纯度及浓度最高,其DNA的0D260／0D280值为1．86,SDS法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足SSR扩增模板的需求。[结论]SDS浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时提取大豆干种子DNA的浓度和纯度都较高,可以满足后续的各种分子生物学操作的要求。     

红皮云杉胚乳中提取DNA的最佳时段

以来自不同地点的红皮云杉胚乳为材料提取DNA，研究了DNA提取的最佳时段，从而为构建红皮云杉的遗传图谱做准备，结果表明：提取DNA样品的最佳时段是在种子生根的晚期，即根长到4cm以后，提取的DNA样品纯度和浓度都较高：单一胚乳中DNA量完全能够满足大量PCR扩增的需要。     

基于ISSR-PCR的韭菜种子纯度的DNA指纹检测技术

研究了基于ISSR-PCR扩增的DNA指纹检测韭菜种子纯度的方法。从发芽种子的嫩芽提取基因组DNA,筛选6种ISSR引物进行ISSR-PCR扩增。聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,用ISSR-64引物检测平丰8号,韭菜种纯度约92%。该技术具有准确性高、时效性好、检测成本较低等特点。     

利用SSR标记鉴定玉米杂交种南校18号种子纯度

以南校18号玉米杂交种及其亲本自交系为材料,对胚芽和干种子的DNA进行提取,对24对SSR引物进行筛选,获得适合该杂交种纯度鉴定的SSR引物。结果表明,在快速检测中,从干种子胚提取DNA更加便捷、快速,无DNA降解,可用于PCR扩增反应;24对SSR引物中,有3对特异性引物6mmc0241、umc2025、phi323152可用于南校18号杂交种和亲本自交系的纯度鉴定。因此,应用SSR标记结合单籽粒DNA快速提取方法,可以快捷、准确地鉴定玉米杂交种种子纯度。     

三七几种后熟处理方式和DNA提取方式比较

为建立三七种子后熟处理和DNA提取技术体系,分别以种子活性、DNA纯度、浓度和提取时间为指标,比较了三七3种后熟处理方式(昆明冬季常温处理、4℃冰箱内低温处理和昆明冬季沙埋处理)和4种DNA提取方式(改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ和改良SDS法)的效果.结果发现,3种后熟处理方式中昆明冬季沙埋处理效果最好,处理后具有活力种子占90％；4种DNA提取方式都可以提取三七基因组DNA,其中,改良CTAB法Ⅰ提取三七DNA纯度较好,浓度较高,所需时间最短,在4种方式中综合效果最好.     

一种快速的植物DNA制备方法

介绍一种DNA提取方法，该方法具有快速，简便，高效的优点，可在60 min内提取出纯净无RNA的DNA，获得的DNA纯度高，DNA质量可满足酶切及PCR等分子生物学实验要求。     

2种改进的未知细菌DNA提取方法

[目的]研究细菌DNA的提取方法,为未知细菌的研究提供方法支持。[方法]从DNA的纯度、基因组DNA的酶切效果、16SrRNA基因扩增等方面比较了细菌DNA的2种提取方法。[结果]方法Ⅰ提取的DNA的纯度（OD260／OD280）为1．51-1．65,6个样品的平均值为1．56。方法Ⅱ提取的DNA的纯度（0D260／OD280）为1．25～1．41,6个样品的平均值为1．33。方法隈取的DNA纯度较高,但其试验步骤稍微繁琐。方法Ⅱ的试验步骤稍微简单,但试验时间较长。2种方法均提取到长度大于21kb）的细菌基因组DNA。对2种方法提取的DNA进行PCR扩增都得到长度约600bp的条带,效果较好。[结论]2种方法提取的DNA质量均较高,都可以直接用于RFLP、PCR等研究。