熊果酸对胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症相关因子mRNA表达的影响

目的 研究熊果酸（ursolic acid,UA）对胶原诱导性关节炎（collageninduced arthritis,CIA）大鼠关节X线及关节炎症相关因子mRNA表达的影响。方法 SD大鼠采取皮下注射牛Ⅱ型胶原加弗氏不完全佐剂法建立CIA模型,取造模成功后大鼠随机分为CIA模型组、UA低剂量组、UA高剂量组、甲氨喋呤（methotrexate,MTX）组、UA+MTX组并予以对应干预。另取6只正常大鼠为对照的空白组。初次免疫30 d断颈处死大鼠,关节行X线摄片,再取下大鼠炎症关节组织匀浆,提取RNA,荧光定量PCR法检测IL-17A、IL-10、IL-6、TNF-α、IL-1β、TGF-β的mRNA表达。结果 与CIA模型组相比,UA高剂量组、MTX组、UA+MTX组X线评分减低（P<0.05或P<0.01）;各治疗组IL-17A、IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA表达降低（P<0.01或P<0.05）;各治疗组IL-10、TGF-β因子的mRNA表达增高（P<0.01或P<0.05）。结论 UA可明显缓解CIA大鼠关节炎症,改善关节X线评分,其机制可能与调节炎症因子的产生,维持组织促炎因子与抑炎因子的平衡有关。     

麻黄加术汤对大鼠类风湿性关节炎模型作用机制的研究

目的探讨麻黄加术汤对类风湿性关节炎的作用机制。方法运用Ⅱ型胶原法建立Wistar大鼠类风湿性关节炎模型,采用麻黄加术汤给予干预,以甲氨喋呤片为阳性对照药。将大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨喋呤组、麻黄加术汤组。检测大鼠血清炎性细胞因子IL-1β、TNF-α浓度,观察大鼠膝关节滑膜组织病理改变。结果麻黄加术汤可显著降低大鼠血清炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的含量,差异具有统计学意义(P<0.01),对CIA大鼠滑膜组织的炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型细胞有明显抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论麻黄加术汤治疗类风湿性关节炎的机制可能与降低炎性因子IL-1β、TNF-α的水平,抑制炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型细胞增生有关。 更多还原     

中药复方对大鼠后肢关节炎模型的疗效及相关机理研究

[目的]旨在观察3种复方中药对大鼠后肢关节炎的治疗效果.[方法]胶原蛋白酶诱导法建立大鼠后肢关节炎模型(CIA),将大鼠分为对照组、模型组、3种复方中药治疗组(独活寄生汤、定痛散和七厘散),观察其对模型大鼠的治疗效果.[结果]成功建立大鼠关节炎模型;独活寄生汤组大鼠的关节炎指数、10 S-1全血黏度、关节曲度、红细胞聚集指数、血清TNF-α与关节液IL-1β水平极显著降低(P＜0.01),红细胞变形指数、局部血流灌注量极显著升高(P＜0.01),关节伸直角度、背部血流灌注量显著升高(P＜0.05),关节屈曲角度、血清IL-1β、关节液TNF-α水平显著降低(P＜0.05);定痛散组关节炎指数、10S-1全血黏度和红细胞聚集指数极显著降低(P＜0.01),背部血流灌注量极显著增加(P＜0.01),60S-1和150S-1全血黏度、血清IL-1β、关节液IL-1β、关节液TNF-α水平显著降低(P＜0.05),红细胞变形指数显著升高(P＜0.05);七厘散组关节炎指数、红细胞聚集指数和关节液TNF-α显著降低(P＜0.05),关节伸直度、背部血流灌注量极显著增加(P＜0.01).[结论]3种复方中药对CIA大鼠均显示出一定的治疗效果,其中独活寄生汤综合治疗效果最佳,定痛散次之,其机理与降低炎性因子水平的抗炎、降低血液粘稠度以及改善微循环的活血化瘀效应有关.     

3种非特异性免疫相关基因在点带石斑鱼组织中的mRNA表达分析

以β-肌动蛋白(β-actin)的表达量作为内标,应用半定量RT-PCR技术,对健康养殖条件下点带石斑鱼不同组织(头肾、心脏、肝脏、脾脏、胃、肠和鳃)中3种非特异性免疫相关基因:c型溶菌酶(CTL)、白细胞介素8(IL8)、toll样受体5(TLR5)的mRNA表达量进行了研究。结果显示,CTL、IL8、TLR5基因在点带石斑鱼的7种组织中均有表达,CTL基因表达量最高的组织为脾脏,IL8和TLR5基因在头肾中表达量最高;CTL、IL8、TLR5分别在肠、鳃和心脏中的表达量最低。     

沙门氏菌和聚肌胞处理条件下鸡免疫相关候选基因mRNA表达特性

【目的】利用高密度SNP芯片完成了对北京油鸡血清免疫球蛋白Y含量等9个免疫性状的关联分析,筛选得到了与性状显著关联位点和候选基因。基于该研究结果,以集中分布在16号染色体的候选基因CD1b、 BMA1（B locus M alpha chain 1）、TRIM27（tripartite motif-containing 27）和ZNF692（zinc finger protein 692）作为研究对象,以北京油鸡为实验材料,在聚肌胞（Polyinosinic acid-polycytidylic acid, Poly I:C）和细菌的处理下进一步对候选基因表达特性进行分析和鉴定。【方法】随机选取80只12日龄北京油鸡分为3组：空白对照组、聚肌胞处理组和肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis, SE）处理组,分别饲养在独立的隔离器内。两处理组分别胸肌注射聚肌胞注射液和SE菌液,对照组注射生理盐水,于处理后12 h、24 h、3 d和6 d（days post infection, DPI）检测血清炎症因子的变化水平和候选基因表达规律。【结果】经过聚肌胞和SE处理后,体重在24 h之后显著低于空白组（P＜0.05）,体温24 h以内显著升高;血清IFN-α、IL-4和IL-6水平先升高后降低,在第24小时或第3天达到峰值,TNF-α水平持续升高,3 d后极显著高于空白组（P＜0.01）。两种处理条件下CD1b的mRNA表达没有组织特异性,其他3个基因在胸腺和法氏囊中高表达。在胸腺组织中,CD1b在两处理间12和24 h的表达量存在显著差异（P＜0.01）,在聚肌胞处理组整个感染阶段没有显著性变化,在SE组是先升高后降低的趋势,感染后24 h时表达量最高（P＜0.01）;BMA1在12 h和3 d时两处理组间差异显著,聚肌胞处理组在12 h时表达量低于SE处理组,而在3 d时显著高于SE处理组（P＜0.01）;TRIM27在聚肌胞感染6 d时表达量显著高于空白组（P＜0.05）,ZNF692的表达量在3组间没有差异。在法氏囊中,CD1b表达量在两个处理组中存在差异,在SE组12 h时表达量高;BMA1和TRIM27的表达量在两组间没有差异,TRIM27在3 d时表达量最高（P＜0.01）,ZNF692在SE组感染24 h时相对表达量高于聚肌胞处理组,在两组中都在3 d时表达最高。【结论】CD1b、BMA1、TRIM27和ZNF692参与了聚肌胞和肠炎沙门氏菌引起的免疫反应过程,是与免疫相关的功能基因;CD1b主要在肠炎沙门氏菌感染的前期发挥作用;BMA1和ZNF692分别参与胸腺和法氏囊的免疫反应。     

鹅肌纤维组织学特性及MyoG基因mRNA表达研究

采用组织学方法和光学显微镜数字成像方法,选取吉林白鹅和霍尔多巴吉鹅两品种鹅各90只,分别测定了7,28,56日龄鹅胸、腿肌肌纤维直径和密度;采用实时荧光定量PCR方法研究了MyoG基因mRNA在鹅肌肉不同生长发育时期的表达水平变化规律.结果表明:在不同日龄,相同品种胸、腿肌肌纤维直径和密度差异极显著(P＜0.01);不同品种,同一日龄胸、腿肌肌纤维直径和密度差异不显著(P＞ 0.05);MyoG基因mRNA表达量相同品种不同日龄胸、腿肌差异极显著(P＜0.01),不同品种腿肌28日龄差异不显著(P＞0.05),不同品种胸肌7日龄差异不显著(P＞0.05).     

灵芝lz-8基因乳酸菌表达载体的构建与表达及免疫特性

克隆灵芝Iz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性.根据GenBank公布的Iz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增k-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3h,SDS-PAGE进行蛋白表达分析.将工程菌菌悬液给小鼠灌胃,对其碳廓清试验等免疫指标进行检测.结果表明:扩增到的Iz-8基因序列全长330 bp,构建了原核表达载体pNZ8149-Iz-8,LZ-8蛋白在NZ3900中得到表达.NZ3900/pNZ8149-Iz-8菌悬液对小鼠各项免疫指标有明显的调节作用.     

复方中草药对肉鸡生长性能及天然免疫相关基因mRNA表达的影响

[目的]为探讨复方中草药对肉鸡生长性能、免疫器官指数及天然免疫相关基因mRNA表达的影响.[方法]504只科宝肉鸡随机分为7组,分别饲喂基础饲粮(对照组,A组)、基础饲粮+抗生素(B组,0.48 g/kg氟苯尼考,1～42 d)、基础饲粮+100 mL/kg复方中药制剂提取物(C组,14～42 d)、基础饲粮+100 ...     

乌金猪与长白猪肝脏脂肪代谢相关基因mRNA表达水平的比较研究

 为探讨不同品种猪体内脂肪代谢的差异,本文选用云南本土的脂肪型猪种乌金猪与外源性的瘦肉型猪种长白猪为研究对象,通过实时荧光定量PCR比较研究了9个脂肪代谢相关基因mRNA在二者之间肝脏表达的差异,结果显示：乌金猪肝脏组织脂肪酸合成酶（FAS）基因的mRNA表达水平极显著高于长白猪（P<0.01）,乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、固醇元件结合蛋白（SREBP）、苹果酸酶（ME）和载脂蛋白B（ApoB）基因的mRNA表达水平显著高于长白猪（P<0.05）,肉碱脂酰转移酶-1（CPT1）基因的mRNA表达水平极显著低于长白猪（P<0.01）,酰基辅酶A氧化酶(ACOX)基因的mRNA表达水平显著低于长白猪（P<0.05）,二酰基甘油酰基转移酶1（DGAT1）和过氧化物酶体增殖物激活型受体α（PPARα）基因的mRNA表达水平与长白猪无显著差异（P>0.05）。本研究结果表明,乌金猪肝脏脂肪合成和脂肪酸转运相关基因的表达水平高于长白猪,而脂肪分解相关基因的表达水平低于长白猪,乌金猪肝脏的脂肪合成能力较长白猪强。     

鹅皮肤BMP4基因mRNA表达研究

采用荧光定量PCR方法研究BMP4基因mRNA在吉林白鹅胚胎期和生后期皮肤中表达变化规律,并采集21~29胚龄胎毛及40~130日龄鹅背部羽毛,观察羽毛生长发育规律及羽毛分支。结果表明:BMP4基因mRNA在鹅皮肤毛囊发育的整个过程中都有表达,胚胎期21~29胚龄表达量相对较低,40~70日龄时,鹅背部皮肤中BMP4mRNA表达量呈线性快速增加,在70日龄时BMP4mRNA相对表达量为2.575,是40日龄时相对表达量0.931的2.77倍,70~90日龄BMP4mRNA表达量有所下降,90~130日龄表达量呈线性快速增加,BMP4相对表达量在130日龄时达到了4.943,是40日龄时的5.31倍,是90日龄时相对表达量1.814的2.73倍。羽毛的长和直径以及羽小枝长和直径增长速度在90日龄后减慢,呈平稳增长状态。可见,BMP4基因在鹅羽毛快速发育时期低表达,在羽毛发育速度较慢的时期高表达,且在片羽分支阶段高表达,可能与羽毛分支有一定关系。     

小鼠CRBN基因mRNA的组织表达谱研究

为了研究CRBN基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟滞(ARNSMR)的关系,探讨小鼠CRBN基因mRNA在不同组织中的表达情况.应用Northern blot和Real-time PCR技术,研究小鼠CRBN基因在肺、肝、心脏、肾和大脑中的表达特点.结果表明,小鼠CRBN基因mRNA在肺、大脑中表达量较高,在心脏中表达量最低.说明小鼠CRBN基因在不同组织中广泛表达,除了与学习、记忆功能有关外,可能还与其他功能有关.     

水稻与纹枯病菌互作中免疫相关基因的表达研究

【目的】近年来水稻纹枯病的危害不断加重,在一些地区已成为水稻最严重的病害,严重威胁到中国水稻的产量和品质。由于引起水稻纹枯病的立枯丝核菌具有强腐生性和广寄主范围的特性,利用传统方法至今尚未筛选到高抗的资源品种。为了找到与抗性相关的基因和为抗性研究及抗病育种提供帮助。【方法】本研究在苗期和成株期接种抗病性不同的4个水稻品种,利用qPCR方法研究了在2个生育期接种纹枯病菌后24 h和48 h水稻免疫相关基因的表达量变化。【结果】初步明确WARK71和WARK53是介导水稻纹枯病抗性的关键基因,可作为抗性相关的标记基因。【结论】水稻与纹枯病菌的互作中可能存在受水稻发育时期调控的开关基因。进一步系统分析水稻对纹枯病菌的抗性组分可为抗性基因的合理利用、水稻抗病品种的培育和预防纹枯病研究提供理论基础。     

Nlrp基因家族部分免疫相关基因在小鼠上的表达

利用RT-PCR研究Nlrp基因家族中与免疫有关的基因在小鼠中的表达.结果表明,Nlrp10在桑椹胚和囊胚中微量表达,而Nlrp1a、Nlrp1b、Nlrp1c、Nlrp3、Nlrp6和Nlrp12在小鼠附植前胚胎中都不表达;这7个与免疫有关的基因在4周龄小鼠体内不同组织中表达水平有差异,但都在脾脏和肝脏中表达;Nlrp基因家族中与免疫相关基因在小鼠细胞中的表达各不相同,但在卵母细胞中都不表达.结论:Nlrp1a、Nlrp1b、Nlrp1c、Nlrp3、Nlrp6、Nlrp10和Nlrp12与小鼠的先天免疫有关,在小鼠中的不同表达预示着这些基因在先天免疫系统中具有不同功能.     

小鼠早期胚胎发育过程中胚胎发育相关功能基因mRNA的表达

运用半定量RT-PCR技术对候选功能基因在表达水平上检测不同交配组合胚胎早期发育过程中存在的差异,选取正常DDK品系小鼠和BALB/c品系小鼠,进行不同组合交配.选取8个功能基因EGF,EGF-R,TGF-α,Bcl-2,Mcl-1,C-myc,H-ras,LIF作为候选基因.结果表明,在2细胞期有EGF,Bcl-2,Mcl-1 3个基因进行表达,且3个基因表达差异显著(P＜0.05);在4细胞期有6个基因进行表达,EGF,Bcl-2,Mcl-1,EGF-R 4个基因表达差异显著(P＜0.05);在8细胞期有7个基因进行表达,EGF,Bcl-2,Mcl-1,EGF-R 4个基因表达差异显著(P＜0.05).杂交胚胎从8细胞期之后即桑葚期开始发生凋亡现象,因胚泡形成障碍,而导致胚胎早期死亡;候选基因中Mcl-1,Bcl-2,EGF,EGF-R基因在胚胎细胞中表达量差异显著(P＜0.05),并且与正常胚胎相比杂交胚胎中差异基因的表达均下调,这些基因表达水平的下调可能间接地引发早期胚胎致死现象.     

鸡传染性支气管炎病毒M基因真核表达载体的构建及免疫效力研究

从GenBank上下载鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120型标准株M基因的标准序列,以此标准序列为模板设计合成一对引物。从IBV尿囊液中提取总RNA,采用PCR技术扩增出M基因,将扩增出的目的片段克隆至pMD18-T载体上获得pMD18-IBV-M质粒,通过亚克隆将目的基因连接到经过改造的pEGFP-C1-SCP-SEC载体上,成功构建真核表达质粒pC1-IBV-M。通过间接免疫荧光试验验证了构建的真核载体能在真核细胞内表达,通过动物免疫试验来检测该真核表达载体对动物的免疫保护情况。     

猪Ghrelin基因真核表达重组质粒的构建及免疫小鼠试验

从猪胃组织中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,经扩增得到450 bp Ghrelin基因。将其克隆到pMD18-T中,经双酶切初步鉴定后,将酶切下的目的基因进一步克隆到真核表达载体PCI中,经PCR、酶切及序列鉴定,证实插入载体PCI中的片段为含有目的基因的核苷酸序列,真核表达重组质粒PCI-Ghrelin-28aa构建成功;以构建的PCI-Ghrelin-28aa质粒肌肉注射(1 mg/kg)昆明小鼠(体重18~20 g),观察其体重变化。结果表明:注射该基因质粒5 d后,实验组小鼠平均日增重高于对照组,且差异显著(P<0.05),尤其是注射10~15 d增重最为明显。本试验构建的PCI-Ghrelin-28aa基因质粒对小鼠具有明显的促生长作用,并将成为新的促猪生长的基因药物。     

鹅肌肉IGF-Ⅰ基因mRNA的表达

以吉林白鹅肉用品系、蛋用品系和霍尔多巴吉白鹅为供试材料,采用实时定量PCR法对胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因在鹅1、30、60、90日龄时胸肌、腿肌中mRNA的表达水平进行测定分析。结果表明:鹅胸肌、腿肌IGF-ⅠmRNA的表达量随着日龄的增加呈先升后降的趋势,胸肌中IGF-ⅠmRNA的表达峰值在吉林白鹅肉用品系60日龄、蛋用品系30日龄、霍尔多巴吉白鹅60日龄出现,其中霍尔多巴吉白鹅30日龄与1日龄差异不显著(P>0.05);腿肌IGF-ⅠmRNA的表达量均在30日龄达到最大,随后下降。在胸肌组织中,吉林白鹅肉用品系IGF-ⅠmRNA的表达量在1、60和90日龄时均高于蛋用品系,霍尔多巴吉白鹅IGF-ⅠmRNA表达量在1日龄和90日龄时高于吉林白鹅蛋用品系(P<0.05),30日龄品种间差异不显著(P>0.05)。在腿肌组织中,吉林白鹅肉用品系IGF-ⅠmRNA在30和60日龄的表达量均高于霍尔多巴吉白鹅,在60和90日龄高于吉林白鹅蛋用品系(P<0.05);霍尔多巴吉白鹅在30日龄时IGF-ⅠmRNA表达量低于蛋用品系(P<0.05),90日龄时高于吉林白鹅两个品系(P<0.05),1日龄时表达水平无差异(P>0.05)。     

三疣梭子蟹免疫相关基因Cystatin的鉴定与表达分析

半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin超家族在机体中参与包括免疫调节在内的多种生理病理功能。通过对三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）血细胞全长cDNA文库随机测序,鉴定了一个新颖的I型Cystatin基因,命名为PtCystatin。PtCystatin全长cDNA 960 bp,开放阅读框372 bp,编码123个氨基酸残基,N端19个氨基酸残基为信号肽。PtCystatin成熟肽有104个氨基酸残基,理论分子量为11 64030 Da,等电点pI为524,有一个Cystatin结构域。PtCystatin与I型Cystatin序列同源性高,人Cystatin A与靶酶结合的2个基序在PtCystatin中也保守（M26VPGG30,Q71VVAG75）,C端无二硫键。组织表达差异分析显示PtCystatin在胃中表达量高,其次为肝胰脏、鳃、血细胞,肌肉和眼中表达量低。致病菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）诱导3 h,血细胞PtCystatin表达量小幅上调121倍（P＜005）;而在6 h和12 h显著下调,分别为047倍（P<001）和057倍（P<005）;24 h恢复到诱导前水平,提示PtCystatin可能参与三疣梭子蟹的免疫防御反应,是一个免疫相关基因。     

斜纹夜蛾精氨酸激酶基因的克隆及mRNA表达分析

利用RT-PCR和RACE技术获得了斜纹夜蛾精氨酸激酶基因的全长cDNA,命名为SlAK,其GenBank登录号为HQ840714。序列分析结果表明:该cDNA全长1373 bp,其中5′和3′UTR的长度分别为65和240 bp;其开放阅读框位于66～1133 bp,编码355个氨基酸。同源性分析结果显示,精氨酸激酶基因蛋白序列享有较高的同源性,该序列具有精氨酸激酶典型的酶活性部位氨基酸序列CPTNLGT、酶活性位点氨基酸和能形成离子耦合结构的氨基酸。SlAK基因在斜纹夜蛾幼虫的头部、中肠、脂肪体和体壁内均有表达,以在中肠内的表达水平最高;SlAK基因在斜纹夜蛾幼虫不同发育期的表达量不同,mRNA表达水平在3龄达到最高峰。