农作物种子转基因成分检测技术探讨

正我国政府对转基因农作物采取"积极研究,慎重推广,依法依规,加强监管"的发展政策,颁布的《种子法》《农业转基因生物安全管理条例》等法律法规,采取源头控制、市场监督相结合的办法,严格监管转基因的研究和应用。一、农作物种子转基因监管面临的挑战由于种子产业链条较长,种子育、繁、推体系庞杂,总体规模小而分散,监管难度较大;转基因是新生事物,部分育种人员还没有充     

利用实时荧光PCR快速筛查玉米中转基因成分

玉米是拥有转基因转化体数量最多的作物,多样的转化体增加了玉米中转基因成分筛查的难度。为了建立玉米中转基因成分的快速筛查方法,利用Taqman探针实时荧光PCR方法,通过对玉米样品中CaMV35S启动子(P-35S)和NOS终止子(T-NOS)2个元件组合的检测,完成对现有玉米转化体的筛查。建立的Taqman探针实时荧光PCR方法灵敏度可达到0.1%,检测时间较普通PCR方法缩短1h以上。同时提出了转基因玉米转化体鉴定路线图。该筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、高灵敏度的筛查。     

基于TaqMan实时荧光PCR检测植物中转基因成分

转基因植物的安全性一直备受关注,转基因成分检测是保障食品安全、维护消费者知情权的重要手段。本研究构建并鉴定了pCry3A、pCry1A (c)、pCP4-EPSPS和p CTP2-CP4-EPSPS 4种阳性质粒,并在转基因棉花、转基因大豆、转基因小麦、转基因玉米、非转基因玉米中分别检测玉米内源基因(adh1)、抗虫基因(Cry3A、Cry1A (c))和抗除草剂基因(CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS),最后将转基因棉花和转基因大豆DNA模板原液进行梯度稀释确定Cry1A (c)和CP4-EPSPS的检出限,通过检出限检测建立标准曲线确定此方法的转基因成分定量检测能力。结果表明:4种阳性质粒鉴定结果良好,可以作为转基因检测的阳性对照;转基因棉花为转入Cry1A (c)基因的抗虫棉;转基因大豆为转入CP4-EPSPS基因的抗除草剂大豆;转基因小麦为转入Cry1A (c)基因的抗虫小麦;转基因玉米为转入Cry1A (c)、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS基因的混合转基因玉米; Cry1A (c)和CP4-EPSPS的引物和探针的检出限均可达0. 1ng;建立的2种标准曲线的R2≥0. 95,说明引物和探针可以满足定量检测要求。本研究对Taq Man实时荧光PCR法检测植物中的转基因成分提供一些借鉴,同时为保障食品安全、维护消费者知情权提供方法支持。     

实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用

实时荧光定量PCR技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,使RQ-PCR逐步成为转基因检测的重要工具。     

实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用

实时荧光定量PCR技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,使RQ—PCR逐步成为转基因检测的重要工具。     

SYBR-Green实时荧光PCR检测转基因番木瓜

分别以RBCL基因和PRsV-cP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因，设计了3对特异性引物，对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测．结果表明，RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增，0值为15～16，PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜样品成功扩增，Ct值为20～25，PRSV-RP引物对转PRSV-RP基因番木瓜样品成功扩增，Ct值为21～22．运用熔解曲线进行产物分析，验证了试验结果的特异性和准确性．     

多重实时荧光PCR快速检测转基因大豆

采用多重实时荧光PCR技术,对大豆筛选基因35S启动子(cauliflower mosaic virus,CaMV 35S)、NOS终止子(nopaline synthase,NOS)和内源基因Lectin设计合成了多对检测引物和探针,在筛选各基因合适的检测引物和探针的基础上,摸索引物组合和扩增条件,最终确定合适的探针引物组合和试验条件,建立转基因大豆快速初筛技术。该方法可在1 h内同时完成对转基因大豆3个基因片段的实时荧光PCR检测。方法特异性强,灵敏度高,可用于大豆转基因成分的快速检测,大大提高检验效率,可为消费者的食品安全及我国大豆的进出口检验提供有效的技术支持。     

实时荧光定量PCR技术的应用

1985年Mullis等发明了聚合酶链反应（PCR）技术,成为20世纪生物医学领域革命性创举,使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。1992年,Higuchi最早提出了实时PCR的设想。     

实时荧光定量PCR应用技术综述

实时荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上发展起来的一种高灵敏度的核酸定量技术。使用EB加入PCR反应体系,经改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,其优势性决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。与传统PCR技术相比,实时定量PCR能够更加快速、灵敏,并有效地对核酸进行实时定量检测。     

农作物种子储藏技术要点

农作物种子储藏对于农业发展起到至关重要的作用,一些农民朋友正是由于没有科学化地储藏管理好农作物种子,从而造成了难以挽回的经济损失和浪费。种子储存的要点在于降低种子的营养物资损耗,抑制种子的呼吸作用,使其尽可能处于充分休眠的状态。本文简要论述了农作物种子储存的注意事项、储存前的准备工作和储存时的技术方法等问题。     

农作物品种转基因应用及其PCR技术监测

生物转基因技术自问世以来,就备受争议。2009年,作为主粮的2个水稻转基因事件获得我国农业主管部门的安全审批之后,有关转基因的争论更加激烈。转基因的发展具有什么样的必要性?世界各国对转基因产品都持什么态度,怎么管理?如何执行国家相关法律法规?如何监督管理转基因研究及应     

实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效,高通量,而且高敏感性等特点,该技术在分子诊断、分子生物学研究、动植物检疫以及食品安全检测等方面有广泛的应用。文章对实时荧光定量PCR的原理、影响因素以及在植物病害和遗传育种方面的应用等进行了综述。     

实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON88017

为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方法分析转基因玉米MON88017特异性很强;29次重复测量含量为1.50%的转基因玉米MON88017样品,平均测量值(1.541%)接近真实值(1.50%),相对偏差为2.70%,测量值的变异系数为0.110 4,回收率为100.00%,测量不确定度为0.096;在97.5%的置信水平下能检测到最低含量为5个拷贝的MON88017分子片段。因此,本研究建立的转基因玉米MON88017实时荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确度和灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供良好的技术支撑。     

实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展

实时荧光定量PCR技术是在传统PCR技术上发展而来的,不仅能判断某一基因的有无,而且还能对其进行定量分析。由于该技术与常规PCR相比,能够进行实时监测、自动化程度高而被广大研究者青睐。本文对实时荧光定量PCR的原理、数据分析、定量方法、分类以及应用进行了系统而详细的综述。     

数字PCR技术在转基因成分检测中的应用

近年来,世界各国都非常重视转基因成分检测技术的研究和应用,因此,建立快速简单、高灵敏度、高精确度的转基因成分检测方法十分必要。数字PCR(digital PCR,d PCR)技术作为一种全新的核酸检测方法,近年来在转基因检测领域备受青睐。文中介绍了数字PCR(digital PCR,d PCR)技术的基本原理,概述了其在转基因成分检测领域的应用进展。     

农作物种子管理站储藏技术要点

粮食对于人类而言十分重要,而农作物种子管理直接关乎到粮食的质量和产量,因此其地位以及作用也是不容忽视的。基于此,本文主要针对农作物种子管理站储藏技术要点进行了详细的分析,希望能够更好的进行农作物种子的管理和储藏。     

抗CMV转基因辣椒实时荧光PCR检测方法研究

针对辣椒中转基因成分建立快速、高效、准确的实时荧光PCR检测方法,以缩短检测周期,提高检出率。结果表明,针对转基因辣椒的内源基因CaATL1和外源基因CMV建立的检测方法,具有很好的特异性,二者检测灵敏度均可达0.01%。本研究建立的检测方法特异性、灵敏度和准确度高,也比较方便快速,同时使用的是全部闭管操作,大大降低了普通PCR带来的污染,为转基因辣椒的检测提供了新的检验方法。     

实时荧光定量PCR技术的应用及研究进展

正实时荧光定量简称PCR。该技术以PCR技术为基础进行改进得到的更加快速、灵敏、特异的核算定量技术,有着光谱高敏感性以及定量精确等特点,可以对PCR中荧光信号变化进行直接探测,从而得到定量结果。为进一步加强对该技术研究及应用,本文将针对其原理、特点及应用前景进行探讨。1原理Ct是荧光定量PCR技术中重要的一个值,代表着每个反应管内荧光信号在达到设定阈值过程中所需要经历循环