铁皮石斛愈伤组织诱导条件研究进展

石斛是我国传统名贵中药,分为铁皮、黄草、金钗、霍山、环草、马鞭等数十个品种,其中铁皮石斛(干品又称铁皮枫斗)最为珍贵,居"中华九大仙草"之首,是石斛中的极品。目前,由于自然条件下铁皮石斛繁殖率低生长速度缓慢以及近年来人为过度采挖破坏,铁皮石斛的野生资源紧缺,已无法满足日益增长的市场需求,近年来,研究人员利用种子、无菌苗幼     

苦瓜愈伤组织的诱导及悬浮培养体系的建立

以苦瓜子叶、上、下胚轴为外植体,在添加不同浓度激素组合的培养基上诱导和继代愈伤组织,比较愈伤组织的状态与生长情况,并对悬浮细胞培养条件进行了优化。结果表明,上下胚轴在添加2,4-D2.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1或NAA1.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1的MS培养基上均可诱导出状态良好的愈伤组织,愈伤组织在添加2,4-D0.5mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1的继代培养基上能长势最好,添加30g·L-1蔗糖和3.0g·L-1活性炭的B5培养基有利于苦瓜悬浮细胞的快速增殖。     

苦皮藤愈伤组织诱导体系建立

以苦皮藤嫩茎、腋芽、幼嫩叶、成熟叶为材料,开展苦皮藤愈伤组织诱导体系建立研究。结果表明:(1)2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)有利于嫩茎、腋芽和幼嫩叶愈伤组织的诱导,且随着浓度的升高(0.5 mg/L→2.0 mg/L)诱导率逐渐增大,浓度为MS+2.0 mg/L 2,4-D的激素组合能使嫩茎、腋芽和幼嫩叶产生最大的愈伤组织诱导率,分别为46.5%、66.6%、20.5%。(2)一定浓度水平的萘乙酸(NAA)和激动素(KT)组合,有利于腋芽和幼嫩叶愈伤组织的形成,诱导腋芽产生愈伤组织的最佳激素组合为MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT,诱导率为15.5%;诱导幼嫩叶产生愈伤组织的最佳激素组合为MS+1.0 mg/L NAA+0.2 mg/L KT,诱导率为18.5%。(3)幼嫩的外植体(嫩茎、嫩叶)较成熟的外植体(嫩茎下端枝条、成熟叶)容易产生愈伤组织。(4)在嫩茎和腋芽作为外植体时,a培养较b培养对外植体的诱导率要高;当叶片作为外植体时,b培养的愈伤组织诱导率要大于a培养。     

南方红豆杉愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以南方红豆杉为材料,建立了其愈伤组织诱导与保持的技术体系,主要为:(1)南方红豆杉侧芽是诱导愈伤组织的最佳外植体;(2)南方红豆杉愈伤组织诱导的最佳培养基为:B5+2.0 mg.L-12,4-D+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-1IAA;(3)南方红豆杉愈伤组织增殖的培养基为:B5+4.0 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1GA+500 mg.L-1AC+2000 mg.L-1LH.并在培养基中同时添加AC、LH和GA33种抗褐物质,取得较好的抗褐化效果.     

不同培养条件对环草石斛愈伤组织中次生代谢产物的影响

[目的]探索环草石斛生长与其主要的次生代谢产物——石斛碱和石斛多糖积累之间的关系。[方法]用苯酚-浓硫酸法和溴甲酚绿酸性染料比色法测定了不同培养条件对环草石斛愈伤组织中的多糖和总生物碱含量的影响。[结果]环草石斛悬浮培养的愈伤组织生长曲线呈"S"型。在光照条件下,环草石斛悬浮培养的愈伤组织中总生物碱和多糖含量的积累与其生长基本同步,光照有利于悬浮培养愈伤组织的生长和多糖的积累;在暗培养条件下,愈伤组织生长缓慢,多糖的积累不与其生长同步,但暗培养却可以提高愈伤组织中总生物碱的含量。[结论]环草石斛生长与其主要的次生代谢产物——总生物碱和石斛多糖积累之间有着密切的关系,不同培养条件对环草石斛中次生代谢产物具有一定的影响。     

玉竹愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系的建立

以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养基均为MS+1.0mg·L~(-1)?6-BA+0.5mg·L~(-1)?NAA+30%蔗糖,培养基最佳pH5.6,叶片和根状茎愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合均为2.0mg·L~(-1)?6-BA+0.8mg·L~(-1)NAA,且根状茎愈伤组织的诱导率和增殖倍数均明显高于叶片。根状茎愈伤细胞悬浮培养的最佳接种量80g·L-1,最佳植物生长调节剂组合1.5mg·L~(-1)6-BA+0.6mg·L~(-1)?NAA,细胞生长曲线与多糖含量变化曲线均呈"S"形,细胞最佳继代周期16d,多糖含量在培养14d时最高,培养基pH呈先下降后上升然后趋于稳定趋势。     

铁皮石斛组培体系的建立

铁皮石斛作为一种重要的抗癌抑癌药物,在全民养生的今天越来越多的成为了人们消费的热点。然而,由于野生的铁皮石斛非常稀少而且非常昂贵,不适合大众消费。所以建立一套适合工业化生产的组培体系成为了发展的趋势。以幼嫩的铁皮石斛带节茎段为原材料,1/2MS作为培养基,探究了不同激素浓度及其他因素对铁皮石斛快繁和组培的影响。再以组培出的幼苗为原材料,研究了温度、水质、培养基质及浇水方式等对铁皮石斛炼苗的影响。结果表明,铁皮石斛快繁的最佳激素浓度为6-BA,1.0 mg/L和NAA,1.0 mg/L,及1%的活性炭,诱导率为12.5%;组培的最佳激素浓度为6-BA,1.5 mg/L及NAA,2.0 mg/L或6-BA,0.5 mg/L,NAA,0.5 mg/L和2,4-D,1.5 mg/L,诱导率都在80%以上。铁皮石斛的最优炼苗条件为25℃,光照过的自来水浇灌;最适合的培养基质为水苔+直径约为0.5~1.0cm的树皮。     

苦豆子愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以苦豆子子叶和胚轴为材料,对苦豆子愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,旨在建立苦豆子悬浮细胞体系。结果发现,子叶和胚轴为愈伤组织生成的最佳外植体,愈伤组织最佳诱导培养基是MS+0.5 mg/L2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;最佳继代增殖培养基是MS+1.0 mg/L NAA+4.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L2,4-D。以胚轴诱导的愈伤组织是细胞悬浮培养的理想材料,初始接种量10%~20%,添加3%蔗糖,有利于悬浮细胞体系的生成。     

马铃薯叶片愈伤组织再生体系的建立

以8个马铃薯品种(系)为试材,进行叶片离体再生研究。结果表明,云薯501愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.3 mg/L+GA310 mg/L,愈伤诱导率为100%,诱导不定芽分化的优化培养基为MS+6-BA 3 mg/L+GA310 mg/L,芽的分化率为86.3%;会-2的愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA310 mg/L,愈伤诱导率为95.7%,诱导不定芽分化的优化培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.02 mg/L+GA310 mg/L,芽的分化率为65.4%。上述2个品种适宜用作马铃薯转基因实验的载体,其他6个马铃薯品种(系)的愈伤诱导率很低,有的品种(系)没有愈伤组织产生,不能作为马铃薯基因转化的载体。     

马铃薯松散型愈伤组织再生体系的建立

为了建立松散型愈伤组织再生体系,试验采用马铃薯茎段为外植体,在含有不同激素的培养基上诱导出愈伤组织,再将诱导出的愈伤组织转接到含有不同激素的培养基上进行松散型愈伤组织的诱导,将诱导出的松散型愈伤组织转接到再生培养基上进行再生芽的诱导,从中筛选出再生效果最好的培养基配方。结果表明,在MS+2 mg·L~(-1) 2,4-D的培养基上获得的愈伤组织生长效果最好;在MS+1 mg·L~(-1) KT+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D的培养基上可以获得理想的松散型愈伤组织,马铃薯松散型愈伤组织在MS+0.5 mg·L~(-1)KT培养基上诱导后可以获得较高的再生率。     

百里香愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以普通百里香无菌苗的茎段和叶片为材料,对百里香愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,并对悬浮细胞的生长特性进行监测,初步建立细胞悬浮培养体系.结果表明,茎段是诱导愈伤组织和进行悬浮培养的理想外植体,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D0.5 mg/L,最...     

铁皮石斛开放式组织培养体系的建立

为降低铁皮石斛组织培养成本、简化组织培养程序,以铁皮石斛原球茎为试验材料,采用开放式组织培养方法研究MS固体培养基添加不同浓度代森锰锌和链霉素对铁皮石斛原球茎组织增殖、分化、生根及抑菌效果的影响。结果表明:在培养基中,添加0.3g/L代森锰锌+1.5g/L链霉素有利于铁皮石斛原球茎增殖;添加0.3~0.5g/L代森锰锌+1.5g/L链霉素的抑菌效果较好,并能促进分化幼苗生长;添加0.5g/L代森锰锌+1.5~2.0g/L链霉素有利于再生植株生根。     

红掌愈伤组织高效再生体系建立研究

红掌愈伤组织高效再生体系建立研究结果表明:1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D0.4 mg/L+NAA 0.3 mg/L+KT0.3 mg/L红掌诱导愈伤组织效果最佳,诱导率达50%;1/2 MS+6-BA 0.4 mg/L+KT0.1 mg/L+蔗糖25g/L+NAA 0.3 mg/L产生丛生芽的效果最好,愈伤分化率达90%。     

红刺玫愈伤组织诱导再生体系的建立

红刺玫(Rosa multiflora Thunb.var.cathayensis)为蔷薇科蔷薇属野蔷薇的一个变种,半常绿灌木,花色粉红。红刺玫以花期长、耐受高温和高湿气候等特性成为园林绿化的新宠[1]。但红刺玫的单瓣花和花色单一的缺陷限制了其广泛的应用,改良红刺玫花色引起园艺工作者的极大兴趣。然     

铁皮石斛以芽繁芽离体培养技术体系的建立

【目的】建立铁皮石斛以芽繁芽离体培养技术体系,为广西铁皮石斛良种选育及种苗繁殖提供技术支持。【方法】以广西桂平种、容县种和西林种3种野生铁皮石斛后代材料茎段为外植体,进行丛生芽诱导、增殖和壮苗生根培养,探讨不同消毒时间和不同激素配比对丛生芽诱导培养等过程的影响。【结果】3种材料外植体的最佳消毒时间为10min,污染率仅10．0％-20．0％;桂平种丛生芽最佳诱导培养基为MS＋2．0mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋10％椰子汁,丛生芽诱导率7．8％;容县种和西林种丛生芽诱导最佳培养基为MS＋1．5mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋10％椰子汁,丛生芽诱导率分别为23．1％和30．8％。3种材料丛生芽继代增殖最佳培养基为MS＋0．5mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋10％椰子汁,平均增殖倍数为3～5倍;壮苗生根最佳培养基为1／2MS＋0．5mg／LNAA＋0．2mg／LIBA＋10％香蕉泥,生根率在95．0％以上;以松树皮为移栽基质,移栽成活率在90．0％以上。【结论】以桂平种、容县种和西林种3种野生铁皮石斛后代材料茎段为外植体均可建立以芽繁芽离体培养技术体系;在诱导培养基和继代培养基中增加继代次数,可提高铁皮石斛的诱导率和增殖倍数。     

新疆苜蓿愈伤组织再生体系建立的研究

以新牧1号、新疆大叶苜蓿和新疆野生黄花苜蓿无菌苗下胚轴为外植体,研究了两种诱导培养基对愈伤组织诱导、生长的影响,以及增殖培养基中附加GSH和ABA对愈伤组织增殖、分化及再生的影响.结果表明,MS+2,4-D 2mg/L+NAA 2mg/L+KT 1mg/L为较佳诱导培养基;增殖培养基中附加GSH 15mg/L有利于分化及植株再生;增殖培养基中附加GSH 15mg/L+ABA 3 mg/L有利于提高新牧1号和新疆大叶苜蓿体胚分化能力,附加GSH 15mg/L+ABA 6mg/L有利于新疆野生黄花苜蓿体胚分化频率;实验共筛选出新牧1号、新疆大叶苜蓿、新疆野生黄花苜蓿高分化能力基因型分别为5、6和5个.     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

丹参胚性愈伤组织的诱导和细胞大量培养体系的建立

为建立丹参的胚性愈伤组织诱导体系和细胞快速生长体系,用于丹参离体药物生产和体细胞诱变育种,本研究通过不同外植体、不同激素的配比、胚性愈伤组织诱导,继代培养的研究,筛选出细胞生长速度最快、质量最好的培养基配方。研究结果显示,根系和茎段更容易形成愈伤组织。然而,从叶片与茎段诱导出的愈伤组织质地较硬、数量较少,生长缓慢,容易老化,内部褐变并木栓化。从根的伤口诱导的愈伤组织质地松散、数量多、生长旺盛,为黄绿色。因此,选择根系作为丹参愈伤组织药用成分生产的外植体。另外,松散型愈伤组织的初代和继代培养细胞生长快,需要在适当的BA与2,4-D配比中获得。本试验中丹参细胞培养的初代培养的最佳配方为:MS+0.5 mg·L~(-1)BA+0.5mg·L~(-1)2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖,继代培养的最佳培养基配方为:MS+1.0 mg·L~(-1)BA+1.0 mg·L~(-1)2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖。     

日本雪椿愈伤组织诱导体系的建立

研究探讨了日本雪椿愈伤组织诱导过程中不同生长调节剂、不同类型外植体对愈伤组织诱导效应的影响.结果表明,MS+6-BA 2.0 mg·L-1+2,4-D 0.5 mg·L-1培养基是雪椿愈伤组织诱导的最佳培养基,雪椿新生叶片作为外植体,诱导率和生长状况最佳.     

苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以改良SH为基本培养基,研究了不同激素配比和不同外植体对苜蓿愈伤组织诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织的最佳外植体是下胚轴、最佳培养基为SH+2,4-D 2mg/L+KT 0.2mg/L;继代增殖后对愈伤组织进行分化再生培养,研究了附加不同浓度外源激素的MS和改良SH培养基对愈伤组织分化的影响,确定最佳分化培养基为改良SH+NAA0.1mg/L+KT 0.5mg/L。