大额牛（Bos frontalis）与瘤牛（Bos indicus）的种间杂交研究

 【目的】探讨大额牛（Bos frontalis）与瘤牛（Bos indicus）杂交利用潜能及杂交育种前景。【方法】选用婆罗门（Brahman）母牛,以CUE-MATETM（孕酮阴道栓）+ PG（氯前列烯醇）法同期发情处理后用大额牛冷冻精液对其进行人工授精（artificial insemination,AI）,调查记录母牛产犊时间、妊娠期及犊牛性别等;测定大额牛与婆罗门牛杂交F1（大婆F1）、大额牛和婆罗门牛的初生体重及6、12和18月龄的体重;进行大婆F1的核型分析;对大婆F1的繁殖性能进行研究。【结果】 ① 婆罗门母牛的同期发情率、妊娠率和产犊率分别为83.87%、60.56%和45.07%,母牛（n=24）的平均妊娠期为（290.83±5.26）d;② 大婆F1中母犊占71.88%,分别显著高于大额牛和婆罗门牛（P＜0.05）、极显著高于大额牛与黄牛杂交F1（大黄F1）和BMY牛（P＜0.01）;③ 大婆F1（n=29）初生体重及6、12和18月龄平均体重分别为（26.69±4.84）、（153.08±37.58）、（219.34±31.31）和（302.06±28.92）kg,分别比大额牛（n=18）高68.18%、37.12%、45.07%和40.13%（P＜0.01）;分别比婆罗门（n=45）低14.40%（P＜0.01）、5.23%（P＞0.05）、13.12%（P＜0.01）和12.76%（P＜0.01）;0—18月龄大婆F1中公牛和母牛平均日增重分别为（503.09±44.91）g和（502.89±53.54）g,分别比大额牛高35.98%和39.85%（P＜0.01）,但分别比婆罗门牛低16.49%（P＜0.01）和6.63%（P＞0.05）;④ 大额牛、婆罗门牛和大婆F1的染色体数目（2n）分别为58、60和59;大婆F1母牛（n=2）的初妊娠年龄、初妊娠体重和初产年龄分别为（16.00±2.83）月龄、（342.50±30.41）kg和（26.00±2.83）月龄,且年产1犊;⑤ 对5头、15—24月龄大婆F1公牛进行电刺激采精,均未采集到精液。【结论】大额牛和瘤牛杂交,其杂种牛生长发育快,适应性强,杂种优势明显;F1代母牛可繁育,且成熟早,繁殖力强;但F1代公牛是否可繁育有待进一步研究。     

大额牛与婆罗门牛种间杂交的亲子鉴定*

 利用9个微卫星座位对一例大额牛与婆罗门牛杂交后代进行亲子鉴定,所有座位都呈孟德尔共显性遗传,计算的父权相对机会为99.994 9 %,证实此例亲子鉴定的确是一个三联体家庭成员,也证实大额牛（Bos frontalis）与婆罗门牛（Bos indicus）种间杂交的可行性。     

大额牛与云南黄牛杂交公牛的染色体核型与G-带分析

采用外周血液淋巴细胞培养法制备大额牛与云南黄牛杂交公牛的染色体标本,对大额牛与云南黄牛杂交公牛的染色体核型和G-带带型进行研究。结果表明,大额牛与云南黄牛杂交公牛染色体数目2n=59,其中2×28+1条常染色体中,t即2+28染色体为近中着丝粒染色体,其余2×27+1+1条均为端着丝粒染色体;1对性染色体中,X为近中着丝粒染色体,Y为一条小的端着丝粒染色体。大额牛与云南黄牛杂交公牛染色体数目2n=59,核型为:59,-2,-28,+t(2∶28),XY。     

（利木赞牛×湘南黄牛）杂交一代性能测定

利木赞牛是世界著名肉牛品种,90年代以来,浏阳市开展了耕牛冷配技术的推广,2004年引进利木赞牛冷冻精液颗粒、细管,坚持人工授精。全市累计引进利木赞牛冻精1.5万颗,改良配种1.45万头,产改良牛1.15万头。利木赞牛的引进,丰富了浏阳市黄牛遗传基因库,优化了牛群体结构,改良效果明显,社会、经济效益显著。本研究对（利木赞牛×湘南黄牛）杂交一代的性能进行了测定,为进一步杂交利用提供参考。     

解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

杂交大额牛肉质特性研究初报

 选择健康、年龄1～2岁的大额牛×云南黄牛的杂交大额牛4头，对其在pH 值、失水率、剪切嫩度、熟肉率、肉色、风味等肉质特性进行了测定。结果表明：pH值在6.05～6.26，失水率在10.65%～20.94%，剪切嫩度腰大肌的值为3.08，熟肉率为63.84%。pH值、剪切嫩度、风味等指标，达到优质中高档牛肉的标准。     

黄牛杂交改良利用的研究

 昭通黄牛达44万头,饲养历史悠久,由于其肉质嫩美,素以昭通牛干巴而遐迩闻名.但因缺乏选育,尚存在着体型小,生长发育慢,肉、役性能低和经济效益不高等缺点.     

大额牛的生物学特征及研究开发利用潜力

 大额牛是中国唯一的半野生半家养的珍珍稀牛种,仅分布于云南省的独龙江和怒江流域，以及印度的阿萨姆邦、东孟加拉和与缅甸北部钦邦。根据国内外研究和多年调查认为：(1)大额牛（Bos frontalis）染色体的数目、形态、结构均不同于黄牛(Bos taurus)和野牛(Bos gaurus)，3者染色体数目(2n)分别为58，60和56条，在常染色体中黄牛没有近中着丝点染色体，野牛有两对，而大额牛有一对，染色体的臂数相等；（2）大额牛的食物以竹子、青蒿和杂草为主，饲料条件差，生存环境恶劣，但其生长速度快，0.5，1，1.5，2和3岁大额牛的体重可分别达140 kg，218 kg，264 kg，296 kg和342 kg；(3)大额牛具有较为典型的肉用牛体型和较好的产肉性能，且其肌纤维直径明显小于其它牛，牛肉的系水率、嫩度和多汁性明显高于其它牛；（4）繁殖力强，能繁母牛基本上可实现一年一胎，且可以与黄牛杂交。大额牛不仅具有极高的研究学术价值，而且有极大的开发利用价值。     

延边黄牛及利延杂交牛的染色体研究

采用外周血淋巴细胞培养及染色体制片技术，对延边黄牛及其利延杂交牛染色体核型和C带进行了研究．结果表明：两种牛二倍体染色体2n=60，公牛核型为2n=60，xy；母牛为2n=60，xx，其中29对常染色体均为端着丝粒染色体，X性染色体为较大的亚中着丝粒染色体，Y性染色体为较小的中着丝粒染色体．     

凤凰山迁地保种大额牛的外貌特征及主要习性

 对云南怒江州泸水县凤凰山半野生状态下大额牛的外貌特征和主要习性的观察结果进行了较详细地叙述,以补充和完善大额牛的形态特征描述。①外貌特征：从外观看,大额牛体形介于水牛和牦牛之间;根据白毛在牛身上分布的部位,可分为“一白”(四肢下部白)、“二白”(四肢下部和头、颈部白)、“三白”(四肢下部、头部和尾尖白)和“全黑”4种;公牛阴囊和母牛乳房发育比较紧凑,以适应丛林生活。②主要习性：大额牛好动喜游走,季节迁移;性喜群栖,合群性好,公牛好斗,母牛间争斗少;觅食力强,食谱广泛,以竹叶、灌木等为主,可谓“吃百草,疫病少,身体健”;酷爱舔盐,人易接近;昼间活动,夜间休息,夏天绝大多数牛有午休习惯,气温越高则休息时间越多;生性爱干净,排粪排尿时前肢直立,后肢半蹲姿势,不易被粪便玷污;理毛次数多,时间较长,以保持其身体的卫生。母牛在产犊前,离群单独活动。结果表明,大额牛具有较典型的肉用牛体型和较独特的生活习性。     

云南大额牛的生物学特征及其瘤胃微生物特点综述

[目的]为大额牛的进一步研究及开发提供参考。[方法]根据国内外研究现状,综述了云南大额牛的生物学特征及其瘤胃微生物特点。[结果]云南大额牛具有较为典型的肉用牛体型和较好的产肉性能,且其肌纤维直径明显小于其他牛,牛肉的系水率、嫩度和多汁性明显高于其他牛;染色体的数目、形态、结构均不同于黄牛和野牛,三者染色体数目（2n）分别为58、60和56条,且可与黄牛杂交;独特的食性体现在以竹子为主食,且对各种粗饲料的体外干物质消化率都显著高于云南黄牛;瘤胃中总可见细菌和纤维分解菌分别为4.51×109和1.63×109个/ml,显著高于云南黄牛,其瘤胃优势细菌主要为纤维分解菌。[结论]云南大额牛不仅具有极高的学术研究价值,而且有极大的开发利用价值。     

云南大额牛的生物学特征及其瘤胃微生物特点综述(英文)

[目的]为大额牛的进一步研究及开发提供参考。[方法]根据国内外研究现状,综述了云南大额牛的生物学特征及其瘤胃微生物特点。[结果]云南大额牛具有较为典型的肉用牛体型和较好的产肉性能,且其肌纤维直径明显小于其他牛,牛肉的系水率、嫩度和多汁性明显高于其他牛;染色体的数目、形态、结构均不同于黄牛和野牛,三者染色体数目(2n)分别为58、60和56条,且可与黄牛杂交;独特的食性体现在以竹子为主食,且对各种粗饲料的体外干物质消化率都显著高于云南黄牛;瘤胃中总可见细菌和纤维分解菌分别为4.51×109和1.63×109个/ml,显著高于云南黄牛,其瘤胃优势细菌主要为纤维分解菌。[结论]云南大额牛不仅具有极高的学术研究价值,而且有极大的开发利用价值。     

不同剩余采食量水平的安格斯牛生长性状差异性分析

为探究不同剩余采食量对肉牛生长性能的影响,选用体质量、年龄相近的30头安格斯牛进行81 d的饲养试验.试验结束后利用个体采食量(FI)对平均日增质量(ADG)和平均中期代谢体质量(MMBW)的回归分析估计出个体预期采食量(EFI),利用FI与EFI之差计算出30头试验牛的剩余采食量,并分为低剩余采食量组(LRFI组)和高剩余采食量组(HRFI组).采用SAS 9.4中TTEST过程对LRFI组和HRFI组肉牛生长数据进行均值的差异性检验;采用SAS 9.4中CORR过程对LRFI组和HRFI组肉牛各生长数据进行相关性系数计算并作相应的显著性检验.结果表明:在所涉及的指标中, HRFI组与LRFI组间仅FI差异有统计学意义(p0.01),其余指标差异均未达到统计学意义; LRFI组的RFI与腰角宽存在显著正相关关系(r=0.61,p0.05)、与管围和FI之间存在极显著正相关关系(p0.01),相关系数分别为0.71,0.78.得出LRFI组肉牛饲料转化效率高于HRFI组,较HRFI组节约8.8%的FI;且本研究涉及的各个生长指标差异均未达到显著水平.     

SMAD1基因的沉默和过表达及对秦川牛原代成肌细胞生肌的影响

【目的】为了探索秦川牛（Bos taurus）SMAD1基因在成肌细胞分化过程中的分子作用机制,通过研究沉默、过表达该基因后对牛原代成肌细胞分化及成肌相关基因表达量的影响,以期为BMP信号通路在牛肌肉组织生长发育过程中的作用机制提供理论依据。【方法】根据Genbank牛SMAD1（NM_001077107.2）已知序列设计并合成靶向沉默SMAD1基因的干扰序列siSMAD1和阴性对照siRNA-NC。以秦川牛原代成肌细胞cDNA为模板,利用PCR技术克隆获得SMAD1基因CDS序列,构建腺病毒过表达穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP-bSMAD1。将腺病毒基因组质粒和腺病毒载体穿梭质粒共转染到HEK 293细胞中,通过Cre-loxp重组酶获得重组腺病毒。获得的携带目的基因的腺病毒标记为AD-bSMAD1,重组质粒pDC316-EGFP标记为AD-NC,用做对照组病毒,利用LaSRT法测定腺病毒的滴度。将获得的干扰序列siSMAD1和过表达腺病毒AD-bSMAD1分别侵染秦川牛原代成肌细胞,采用实时荧光定量PCR检测SMAD1基因和成肌标志基因MyoD、Myf5、MyoG的mRNA水平,并观察对细胞分化融合情况的影响。【结果】成功获得了1条能有效沉默SMAD1基因siRNA,将其转染秦川牛原代成肌细胞后进行人工诱导分化,相比对照组,SMAD1基因分别下调了75.4%（诱导1d,P<0.01）、66.7%（诱导3d,P<0.01）、60.0%（诱导6d,P<0.01）、54.7%（诱导9d,P<0.01）。此外,还成功构建了秦川牛SMAD1基因的腺病毒过表达穿梭载体,获得了滴度为1×10 ¹⁰pfu/mL的过表达重组腺病毒AD-bSMAD1。与对照组相比,高滴度过表达病毒AD-bSMAD1侵染秦川牛原代成肌细胞0、1、3、6、9d后,与对照组相比,SMAD1基因的表达水平分别上调了2.10倍（诱导1d）、3.19倍（诱导3d）、105.3倍（诱导3d）,P<0.01）和144倍（诱导9d,P<0.01）;结合肌管形成过程的变化和实时荧光定量结果证明,SMAD1基因促进原代成肌细胞分化和肌管形成,并显著上调成肌标志基因MyoD、Myf5、MyoG的表达。 【结论】获得了能有效沉默秦川牛原代成肌细胞SMAD1表达的特异性的干扰序列siSMAD1,以及可成功实现过表达SMAD1基因的腺病毒介导的体外表达载体,可正向调控成肌细胞的分化和肌管形成过程。     

一种高通量提取桃DNA方法的建立与应用

【目的】DNA制备是大规模基因型筛选和分子标记辅助选种的重要前提,本研究采用一种1.2 mL八联排管代替单个离心管,探索一种操作简便、节约时间、成本低的桃DNA快速提取方法,以满足高通量遗传研究的需求,提高工作效率。【方法】以普通生长型桃（standard type,ST）‘中油桃8号’为母本,温度敏感半矮生型桃（temperature-sensitive semi-dwarf in Prunus persica,PpTssd）‘09-1-112’为父本,杂交获得F₁代分离群体500株实生苗为载体,包括温度敏感半矮生型246株,普通生长型254株,建立一种高通量、低成本桃DNA提取方法。利用1.2 mL八联排管结合八通道移液器,简化提取步骤,提取桃幼嫩叶片中的基因组DNA;通过紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA浓度、纯度和完整性进行检测。基于高分辨率熔解曲线（high resolution melting,HRM）,采用96孔板对温度敏感半矮生型桃和普通生长型桃共500个F₁分离后代单株进行PCR扩增和基因分型,区分TSSDtssd基因型与tssdtssd基因型。基于双亲表型与基因型一致,开发InDel位点,PCR扩增后,采用SDS-PAGE在F₁群体中进行验证,确定利用分离的DNA是否正确区分不同基因型。【结果】分离的DNA经紫外分光光度计检测,浓度范围约为25-200 ng·μL^-1,OD_260nm/OD_280nm约为1.81-1.98,DNA纯度较高;琼脂糖凝胶电泳条带清晰、单一,DNA完整度较高。参考桃基因组（Version 2.0）,根据双亲深度测序数据,开发获得SNP标记SNP_Pp03_3758620,应用于高分辨率熔解曲线基因分型,发现温度敏感半矮生型和普通生长型呈现明显不同的峰型,证明提取的DNA模板可应用于HRM基因分型。基于双亲基因型与表型一致,开发InDel标记InDel_Pp03_3829009,聚丙烯酰胺凝胶电泳的验证结果显示PCR扩增具有较高的强度,获得与目的片段大小一致的特异性条带,且在两种不同生长型单株中具有明显的多态性,表明PCR扩增稳定,提取的DNA可用于基于InDel标记的多态性分析。使用该提取方法,每人每天可以完成1 000个样品的DNA提取,成本较低,且不会对幼苗早期生长造成影响。【结论】建立了一种简便、有效、低成本的桃基因组DNA提取方法,可以满足基因分型、品种鉴定及遗传分析等分子生物学研究,实现了大批量不同样本基因组DNA的同时提取,具有较高应用价值。