转座子Tol2的特性及其在转基因动物中的应用

Tol2转座子是hAT转座子家族中的一员,是目前发现的唯一一个可以编码具有完整转座酶功能的自主性转座子。已证实Tol2转座子在斑马鱼、鼠、人等多种动物细胞中都具有转座活性,有可能作为脊椎动物特有的转座子系统,在转基因方面具有重要的应用前景。综述了Tol2转座子的结构、转座机制和在脊椎动物转基因生产中的最新研究进展,以期为今后这方面的研究提供参考。     

piggyBac转座子在绒山羊基因组中的整合位点及其特征分析

【目的】构建piggyBac（PB）转座子表达载体系统,研究PB转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方法】构建pB-CMV-EGFP-Neo转座载体和pcDNA-Trans辅助载体,利用lipofectamine 2000介导共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得稳定转染的转基因细胞系。提取转基因细胞基因组DNA,利用反向PCR检测piggyBac转座子整合位点。【结果】构建了转座系统并成功介导外源基因在绒山羊成纤维细胞染色体中整合,获得了转基因细胞系;反向PCR检测显示在绒山羊基因组中有21个PB转座子整合位点;整合位点TTAA毗邻一侧的5个碱基组成中,PB转座子3′倾向于插入到富含AT（58.35%）碱基的区域,PB转座子5′倾向于插入到富含GC（57.8%）。【结论】PB转座子可在绒山羊基因组中发生高效转座,获得的整合位点信息可为利用PB转座子开展绒山羊研究提供理论参考。     

鱼类活性DNA转座子的发掘与应用概况

转座子(transposon)是基因组上的一段一定长度的DNA序列,能在自身编码的转座酶作用下,以"剪切-粘贴"的方式在基因组中进行高效转座。基于转座子的插入诱变策略,在包括鱼类在内的脊椎动物重要性状主控基因的筛选、功能解释以及基因组学研究方面有着重要的研究前景。长期以来,DNA转座系统在脊椎动物中的构建和应用都是空白,直到近十来年,随着青鳉Tol2、鲑SB、鲽Passport以及金鱼Tgf2等几例鱼类活性转座子的发现,开启了利用转座子工具在斑马鱼、小鼠等脊椎动物进行转基因和基因组插入诱变研究的新领域。介绍了鱼类DNA转座子的类型、结构特征及应用方面的最新研究进展,探讨了转座子在养殖鱼类重要性状主控基因的发掘、功能解释以及基因组学研究的可行性。     

piggyBac转座子介导的牛A-FABP表达载体的构建与鉴定

【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨架序列、NEO-EGFP、α-actin启动子以及A-FABP基因序列,并将各个序列连接构建成转基因载体pPB-AFABP;用脂质体法将供体质粒pPB-AFABP和辅助质粒pCAG-PBase组成的PB二元系统及质粒pPB-AFABP分别转染牛成纤维细胞,通过G418筛选得到转基因细胞。【结果】经过酶切和测序鉴定,载体pPB-AFABP构建正确;PB二元系统的阳性克隆数明显多于转座子载体pPB-AFABP的克隆数;PCR鉴定结果表明,牛成纤维细胞中存在目的基因A-FABP。【结论】成功构建了转基因表达载体pPB-AFABP,且证实PB转座子在牛成纤维细胞中具有较高的转座活性。     

HOPX基因过表达对鸡前脂肪细胞增殖的影响

【目的】构建鸡HOPX基因（homeodomain only protein X）全长编码区（coding region sequence, CDS）的真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,探讨HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计鸡HOPX基因CDS区上、下游引物,以AA肉鸡腹部脂肪组织的cDNA为模板,采用PCR扩增、克隆鸡HOPX基因全长CDS区,并将其亚克隆至真核表达载体（pCMV-HA vector）,获得HOPX基因的真核表达载体pCMV-HA-HOPX。采用双酶切鉴定、测序及Western blotting方法分析鉴定pCMV-HA-HOPX。采用胶原酶法分离培养12日龄AA商品肉仔鸡腹部脂肪组织原代前脂肪细胞,瞬时转染pCMV-HA-HOPX,转染6 h时后消化细胞,按照每孔50 000个细胞数接种12孔培养板,并在细胞贴壁0、24、48和72 h,分别采用显微镜观察和CCK-8细胞增殖检测试剂盒分析HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响;同时,利用TRIzol法提取组织和细胞总RNA,并反转录合成cDNA,采用Real-time RT-PCR方法分析细胞增殖标志基因Cyclin D1和PCNA的mRNA表达。【结果】测序结果显示,鸡HOPX基因的全长CDS区大小为222 bp,与NCBI发布的鸡HOPX基因mRNA序列（NM_204556）一致;利用HA标签抗体的Western blotting分析显示,真核表达载体pCMV-HA-HOPX能够表达出预期大小的蛋白分子（约9.5kD）,表明鸡HOPX基因的真核表达载体pCMV-HA-HOPX构建成功。显微镜观察发现,转染pCMV-HA-HOPX载体的细胞（HOPX过表达组）在细胞贴壁后培养24和48 h的细胞数量低于转染pCMV-HA vector空载体（空载体对照组）的细胞数量;CCK-8检测分析发现,转染pCMV-HA-HOPX载体细胞的吸光度值（OD值）在细胞贴壁后培养24、48和72 h都极显著低于空载体对照组（P＜0.01）。与细胞增殖检测结果相一致,细胞增殖标志基因表达检测分析发现,在细胞贴壁后培养24 h后,HOPX过表达组细胞Cyclin D1基因的mRNA表达量显著低于空载体对照组（P＜0.05）;在细胞贴壁后培养48 h时,HOPX过表达组的PCNA基因的mRNA表达量显著低于空载体对照组（P＜0.05）;在细胞贴壁后培养72 h时,HOPX过表达组的PCNA和Cyclin D1基因的表达量均极显著低于空载体对照组（P＜0.01）。【结论】HOPX基因过表达在体外抑制鸡原代前脂肪细胞的增殖。     

PiggyBac转座元件的构建及其在团头鲂基因组中的转基因效率

鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码框的pPBs-EF1α-eGFP供体质粒。以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL体外转录的PB转座酶mRNA共同显微注射入团头鲂(Megalobrama amblycephala)1~2细胞期受精卵中,团头鲂eGFP的荧光表达率可达58.26%,PCR检测结果显示,该转座系统在团头鲂成鱼基因组中的整合效率为53.04%。表明PiggyBac转座子可高效介导基因在团头鲂基因组中的插入,为进一步开展团头鲂插入诱变研究奠定了基础。     

PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测

【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域 rtTA 通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。     

腐胺和脯氨酸对哺乳期仔猪空肠绒毛-隐窝轴上皮细胞的多胺代谢及Wnt信号通路的影响

【目的】研究腐胺和脯氨酸对哺乳期仔猪空肠绒毛-隐窝轴上皮细胞的多胺（腐胺、亚精胺和精胺）代谢、Wnt信号通路关键基因的mRNA相对表达量的影响。【方法】选取18头0日龄的刚出生的三元杂交（长白×大白×杜洛克）仔猪,随机配对分成3组,每组6个重复,每个重复1头猪,对照组,腐胺组和脯氨酸组,分别灌喂等体积的生理盐水,5 mg·kg^-1体重添加剂量的腐胺和25 mg·kg^-1体重添加剂量的脯氨酸,到14日龄断奶,断奶后3 d屠宰,分离空肠绒毛-隐窝轴的3个不同分化程度（绒毛顶端,绒毛中段和隐窝）的细胞,分别为F1,F2,F3。高效液相色谱法测定F1,F2,F3中的多胺浓度,RT-PCR测定多胺代谢途径中的相关基因以及Wnt信号通路中关键基因的mRNA相对表达量。【结果】1、在绒毛顶端细胞F1中,与对照组相比,脯氨酸组的腐胺、亚精胺、精胺的浓度均显著增加（P＜0.05）,而腐胺组的多胺均无显著差异（P＞0.05）;在绒毛中段细胞F2中,除了腐胺的含量无显著差异外,脯氨酸组和腐胺组的亚精胺、精胺的浓度均显著高于对照组（P＜0.05）,且脯氨酸组的亚精胺和精胺的浓度均显著高于腐胺组（P＜0.05）;在隐窝底端细胞F3中,腐胺组和脯氨酸组的腐胺、亚精胺、精胺浓度与对照组的浓度差异均不显著（P＞0.05）。2、鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因在绒毛顶端上皮细胞F1中的mRNA表达量,腐胺组显著高于脯氨酸组和对照组（P＜0.05）;精氨酸酶（arginase）在F2中的mRNA表达量,脯氨酸组显著高于腐胺组和对照组（P＜0.05）;sFRP3在绒毛中段上皮细胞F2中的mRNA表达量,脯氨酸组的显著高于腐胺组（P＞0.05）;sFRP4在隐窝上皮细胞F3中的mRNA表达量,腐胺组显著高于对照组和脯氨酸组（P＜0.05）。【结论】添加了外源腐胺和脯氨酸,促进了哺乳期仔猪的空肠绒毛-隐窝轴上皮细胞的分化细胞的多胺浓度及促进了多胺的代谢,而对未分化的隐窝细胞没显著影响,同时通过Wnt信号通路调控空肠绒毛-隐窝轴细胞的分化成熟。     

罗伊氏乳杆菌I5007对新生仔猪肠道形态、二糖酶活性和紧密连接蛋白表达的影响

【目的】罗伊氏乳酸杆菌是普遍存在于人和动物肠道的有益乳酸杆菌,研究表明,口服罗伊氏乳酸杆菌能显著降低腹泻的发病率和严重程度。研究罗伊氏乳酸杆菌I5007（Lactobacillus reuteri I5007）对新生仔猪肠绒毛发育和肠黏膜屏障功能的影响。【方法】试验选取9窝1日龄的杜×长×大初生仔猪,每窝挑选8头体重相近、出生状况良好的仔猪,按体重分为3组,每组3窝仔猪。即：对照组（灌服0.1%无菌蛋白胨溶液）,前4日龄灌服组（1-4 d,每日每头灌服活菌总数为1.2×10¹⁰ CFU 的L. reuteri I5007）和隔4日龄灌服组（1、5、9、13、17和21 d灌服,灌服剂量同前4日龄灌服组）。试验期21 d,试验期间仔猪由各自母猪哺乳饲喂。于试验第7、14和21 天,每个处理组随机选取4头仔猪,空腹称重、麻醉和屠宰,截取相同位置的十二指肠、空肠和回肠,测定其肠绒毛形态,并测定试验结束时（21 d）空肠和回肠二糖酶活性和紧密连接（TJ）蛋白的表达。【结果】灌服L. reuteri I5007对仔猪生长性能没有显著影响（P＞0.05）,但对不同阶段仔猪的肠道形态有不同程度的影响。7 d时,隔4日龄灌服组与对照组相比,仔猪十二指肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度、杯状细胞数和回肠杯状细胞数均显著增加（P＜0.05）,前4日龄灌服组仔猪的十二指肠绒毛高度/隐窝深度、杯状细胞数和回肠杯状细胞数也均显著高于对照组仔猪（P＜0.05）,但对十二指肠绒毛高度无显著影响（P＞0.05）;14 d时,隔4日龄灌服组仔猪十二指肠的绒毛高度/隐窝深度和回肠杯状细胞数均显著高于对照组（P＜0.05）,前4日龄灌服组仔猪的回肠杯状细胞数也显著高于对照组（P＜0.05）,但却低于隔4日龄灌服组（P＜0.05）;21 d时,隔4日龄灌服组显著提高了仔猪十二指肠和回肠的杯状细胞数（P＜0.05）,前4日龄灌服组与对照组相比,仅提高了回肠杯状细胞数（P＜0.05）,反而降低了十二指肠绒毛高度/隐窝深度（P＜0.05）。另外,前4日龄灌服组仔猪空肠隐窝深度显著低于隔4日龄灌服组仔猪（P＜0.05）,但其十二指肠杯状细胞数和绒毛高度/隐窝深度均显著低于隔4日龄灌服组仔猪（P＜0.05）。在二糖酶活性上,隔4日龄灌服组仔猪空肠蔗糖酶和麦芽糖酶活性均显著高于对照组（P＜0.05）,前4日龄灌服组仅提高了仔猪空肠麦芽糖酶活性（P＜0.05）,且该组空肠蔗糖酶活性和麦芽糖酶活性均显著低于隔4日龄灌服组（P＜0.05）。隔4日龄灌服组对仔猪空肠和回肠的3种TJ蛋白（Claudin-1、Occludin和ZO-1）均有显著的促表达作用（P＜0.05）,前4日龄灌服组仔猪空肠Claudin-1、ZO-1和回肠Claudin-1的表达也均高于对照组（P＜0.05）,但是其空肠Occludin显著低于隔4日龄灌服组（P＜0.05）,且其回肠Claudin-1（P = 0.1）和ZO-1（P = 0.1）相比于隔4日龄灌服组也有降低的趋势。【结论】本试验条件下,新生仔猪隔4日龄灌服L. reuteri I5007（1.2×10¹⁰ CFU/头/日）,能有效促进仔猪肠绒毛发育,提高空肠二糖酶活性,促进仔猪肠上皮细胞TJ蛋白的表达,在改善新生仔猪的肠黏膜屏障功能中可能起到一定的作用。     

金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性

金鱼Tgf2转座子基因属于Hobo/Activator/Tam3(hAT)超家族,其编码的活性转座酶能在多种鱼类转座中介导基因插入及诱变,因此在鱼类重要性状主控基因的筛选、功能解释及育种等方面具有重要的应用前景.鉴于Tgf2转座酶基因(JN886591)存在众多稀有密码子,本研究依据大肠杆菌对密码子的偏好性,对金鱼Tgf2转座酶基因进行密码子优化,所得Tgf2转座酶基因连接原核表达载体pET-28a(+),将重组载体转化到大肠杆菌BL21 (DE3)细胞.该大肠杆菌细胞在培养温度37℃、OD600≈0.5时用IPTG诱导获得高效表达,即菌体中含有8.8％的重组蛋白,上清液中含有4.0％重组蛋白.采用亲和层析纯化从菌体上清液中分离得到分子量约70 ku的可溶性重组蛋白,经MALDI-(TOF)/TOF串联质谱鉴定其为重组Tgf2转座酶.进而采用分子排阻色谱法研究转座酶的DNA结合活性,结果表明:所得重组Tgf2转座酶能识别并结合含Tgf2转座子特异性亚末端重复序列的DNA探针,即启动转座.采用原核表达体系高效获得重组Tgf2转座酶,为其作为工具酶应用于鱼类生物学研究奠定必要的基础.     

不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响

 【目的】研究不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响。【方法】选用健康情况良好1日龄AA肉公鸡180只,随机分为4组,每组5个重复,每重复9只。设定不同免疫应激模型,为无免疫组即对照组（no vaccine,NV）,常规免疫组（conventional vaccine,CV）,以及在常规免疫基础上注射细菌脂多糖的免疫亢进组（LPS）和环磷酰胺的免疫抑制组（CYP）。采用 CD3/CD4/CD8 三色流式细胞术、MTT法检测肉鸡免疫状态和非免疫状态下外周血中 T 淋巴细胞及其亚群的变化。【结果】与NV组相比,肉仔鸡的体增重和采食量均显著降低LPS组和CYP组（P＜0.05）,各处理料重比无显著差异（P＞0.05）,NV组与CV 组生产性能指标无显著差异（P＞0.05）,各日龄处理间血清TP、GLU和CHLO含量均无显著差异（P＞0.05）。第21和35天,LPS组和CYP组血清ALB含量显著低于CV组和NV组（P＜0.05）;第21 天,LPS组血清α-AGP和 BUN含量显著低于NV组（P＜0.05）,CPY和LPS均抑制T、B淋巴细胞增殖,LPS组CD4+/CD8+T细胞百分比显著低于NV组（P＜0.05）。【结论】未进行免疫肉鸡可维持机体正常的生长性能和细胞免疫稳态,LPS和CYP的刺激可降低肉鸡采食量和体增重;随日龄增加肉鸡对CYP刺激的耐受性有所上升,LPS刺激可增强肉鸡细胞免疫应答反应。     

枸杞多糖对泌乳母兔生产性能及血清生化指标的影响

【目的】研究日粮中添加枸杞多糖对泌乳母兔生产性能及血清生化指标的影响,为枸杞多糖在家兔日粮中的应用提供理论依据。【方法】选择同期分娩的48只泌乳獭兔,按照胎次、产仔数、体重相近的原则,随机分成4组,每组12只,每组仔兔总数相等（72只）。Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在饲喂基础日粮的基础上分别添加0.5%、0.75%、1%的枸杞多糖,试验期共30 d。【结果】添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组的仔兔35日龄断奶窝增重分别比对照组提高了5.95%、4.60%和6.47%,但差异均不显著（P＞0.05）;各试验组仔兔的断奶成活率与对照组相比均差异极显著（P＜0.01）;各试验组母兔的泌乳力与对照组无显著差异（P＞0.05）;各试验组母兔和同窝仔兔的平均日采食量与对照组相比差异均不显著（P＞0.05）;添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组的母兔泌乳35 d后的体重失重分别比对照组低20.9%、16.2%和15.5%,但差异均不显著（P＞0.05）。添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组母兔血清LDH含量分别比对照组降低了32.6%（P＜0.01）、19.8%（P＜0.05）和48.3%（P＜0.01）;其余检测指标在各试验组母兔血清中的含量与对照组相比有不同程度的降低或升高,但均差异不显著（P＞0.05）。【结论】在泌乳母兔日粮中添加枸杞多糖可以不同程度地提高仔兔断奶成活率、促进仔兔的生长发育、降低母兔在泌乳期的失重,且对血清生化指标无不良影响。     

不同水平脱脂DDGS对蛋鸡生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响

【目的】研究日粮含不同水平的脱脂DDGS对蛋鸡生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响。【方法】选用960只67周龄的海兰褐蛋鸡,随机分为4个处理,每个处理4个重复,每个重复60只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组DDGS占日粮的比例分别为12%、18%和24%,试验期8周。【结果】各试验组的采食量、蛋形指数、蛋壳厚度与对照组无显著差异(P0.05),但各试验组蛋黄颜色显著加深,平均蛋重显著降低(P0.05);与对照组相比,试验Ⅰ组、Ⅱ组料蛋比、产蛋率和哈夫单位无显著差异(P0.05),试验Ⅲ组料蛋比和哈夫单位显著提高,产蛋率显著降低(P0.05);各组之间血清中钙、磷、甘油三酯、高密度脂蛋白和尿素氮无显著差异(P0.05)。【结论】日粮中脱脂DDGS使用量不高于18%时,对蛋鸡料蛋比、产蛋率、蛋品质及血清生化指标无不良影响,但会降低蛋重;24%的用量会提高料蛋比,降低产蛋率和蛋重。     

意大利蜜蜂生长发育适宜蛋白供给水平及其对幼虫抗氧化活性的影响

 【目的】探究意大利蜜蜂生长发育的适宜蛋白供给水平及蛋白水平对幼虫抗氧化活性的影响。【方法】选用健康无病的本地意大利蜜蜂30群,随机分为6组（每组5个重复,每个重复1群蜂）进行对比试验。其中1组饲喂油菜花粉,为对照组;其它5组分别饲喂人工配制的蛋白水平为15%、20%、25%、30%和35%的试验日粮作为试验组。【结果】在试验期间,日粮蛋白水平对蜂群群势变化无显著影响（P＞0.05）;蜂卵孵化率和幼虫化蛹率均表现为蛋白水平35%组显著高于15%组（P＜0.05）;幼虫体蛋白含量以蛋白水平30%组最高,显著高于对照组、15%组和20%组（P＜0.05）;随日粮蛋白水平的升高,幼虫虫体总超氧化物歧化酶活性未表现出显著差异（P＞0.05）,但虫体内丙二醛含量随之显著降低（P＜0.05）。【结论】日粮蛋白水平在15%—35%时,蜂群群势未受到显著的影响;日粮蛋白水平为30%—35%时,蜂卵孵化率、幼虫化蛹率和机体抗氧化活性达到最佳。     

龙眼果肉水溶性提取物对正常小鼠免疫调节作用的影响

目的从体液免疫、细胞免疫和NK细胞活性等不同角度研究龙眼水溶性提取物对正常小鼠免疫调节作用的影响。方法以120只雄性昆明种小鼠为研究对象,按体重随机分5组,阴性对照组、龙眼水溶性提取物低、高剂量组(130mg·d-1、380mg·d-1)和龙眼果肉低、高剂量组(150mg·d-1、450mg·d-1),每组24只,连续35d。测定淋巴器官相对质量、脾淋巴细胞转化值、血清溶血素值、NK细胞活性和脾脏抗体生成细胞数等免疫学指标以及血清丙二醛水平、总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力等抗氧化指标。结果与阴性对照组比较,龙眼水溶性提取物低、高剂量组血清溶血素值和脾淋巴细胞转化值显著升高(P0.05),而龙眼果肉各剂量组效果均不显著(P0.05);高剂量龙眼水溶性提取物NK细胞活性显著增强(P0.05),但龙眼果肉剂量组无显著效果(P0.05)。龙眼果肉高剂量组血清丙二醛水平显著降低(P0.05),龙眼水溶性提取物各剂量组则差异不显著(P0.05);龙眼果肉高剂量组和龙眼水溶性提取物高剂量组血清总抗氧化能力分别极显著(P0.01)和显著(P0.05)提高。结论一定剂量的龙眼水溶性提取物能显著提高正常小鼠的体液免疫和细胞免疫能力及抗氧化活性,但抗氧化活性非其免疫调节作用的主要机制。     

日粮中赖氨酸和蛋氨酸比对断奶犊牛生长性能和消化代谢的影响

[目的]研究日粮中不同赖氨酸和蛋氨酸比例对断奶犊牛生长性能、消化代谢的影响.[方法]选取24头健康的荷斯坦断奶犊牛,按体重和出生时间随机分为4组,限量饲喂4种不同日粮,即对照组日粮(粗蛋白为14.67%),3种赖氨酸和蛋氨酸比例分别为2.5:1、3.0:1和3.5:1的日粮(粗蛋白为12.02%),试验期为8周.在试验...     

不同水平维生素D3对扬州鹅仔鹅钙磷代谢和免疫机能的影响

【目的】研究在基础日粮中添加不同水平维生素D3（VD3）对仔鹅钙磷代谢和免疫机能的影响。【方法】将300只健康、体重均匀的28日龄扬州鹅公鹅随机分成5个处理组,每个处理组6个重复,每个重复10只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂添加500、1 000、2 000和4 000 IU•kg-1维生素D3的试验饲粮,饲养至10周龄。【结果】基础日粮中添加1 000 IU•kg-1的维生素D3显著提高了10周龄扬州鹅血清钙含量、胫骨钙含量、胫骨强度和血清免疫球蛋白IgG含量（P＜0.05）;添加2 000 IU•kg-1维生素D3显著提高了血清钙含量（P＜0.01）、胸腺指数和血清白细胞介素-4水平（P＜0.05）;但日粮维生素D3水平对血清磷含量和碱性磷酸酶活性影响不显著（P＞0.05）。【结论】日粮中添加适宜水平的维生素D3（1 000—2 000 IU•kg-1）有利于提高扬州鹅仔鹅的钙代谢和免疫机能。     

槲皮素对肉鸡脂肪细胞环腺苷酸信号通路的作用

【目的】研究槲皮素对肉鸡脂肪细胞甘油三酯沉积过程中环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）信号通路的作用。【方法】将脂肪细胞随机分5组,每组6个重复;空白对照组为基础培养液,溶剂对照组为含2‰二甲基亚砜（DMSO）的培养液,试验组为含10、20和40 mg•L-1槲皮素的培养液,分别于24、48和72 h收集细胞及培养液;ELISA法测定乙酰CoA羧化酶（acetyl CoA carboxylase,ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）、脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）、cAMP、腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）、磷酸二脂酶（phosphodiesterase,PDE）、蛋白激酶（protein kinase A,PKA）含量;紫外分光光度计测定甘油三酯（triacylglycerides,TG）含量。【结果】与空白对照组相比,①溶剂对照组各指标均无显著差异（P＞0.05）;②20和40 mg•L-1槲皮素组ACC、FAS、LPL、TG和PDE含量显著降低（P＜0.05）,cAMP和PKA含量显著增加（P＜0.05）;③3个槲皮素组AC含量均无显著差异（P＞0.05）。【结论】一定剂量槲皮素可通过调控cAMP信号通路抑制脂肪合成,并减少脂肪沉积。