不同温度保存BHK21细胞和IBRS2细胞试验

在保存传代细胞种时，大多采用液氮长期保存。细胞种需短期保存时，采用适宜的温度存放不但可避免保护剂(二甲基亚砜)对细胞种活力的影响，而且还可减少制作程序。     

猪瘟细胞活疫苗细胞制备中分散液消化试验

本试验用犊牛睾丸细胞制备猪瘟细胞活疫苗,结果表明,EDTA胰酶加0.4%粉红消化细胞的病毒收获液检测兔子体温效果最好。     

应用电镜技术快速检测传代细胞中的污染因子：—传代细胞污染细菌的快速检测

应用电镜技术检测传代细胞中的细菌污染，即快速又准确。根据细菌的形态及其鞭毛、噬菌体等指标的其中一项均可以判定细菌的污染，该检测结果为传代细胞的应用提供了可靠地保证。     

BT细胞在不同温度,时间下的维持及传代细胞生长细胞

为生产检验需要,将生长好的ＢＴ细胞分别放在３７℃、２５℃、１５℃的温箱中,发现在２５℃下,细胞维持到需传传代的最长天数为５０－６０ｄ,传代前将ＢＴ细胞在３７℃预热１６－２４ｈ菌传代,即可获得生长良好的传代细胞。     

犬肾传代细胞HGPRT缺失株的诱变

应用８－氮鸟嘌呤（８－Ａｚａｇｕｉｚｉｎｅ），通过大剂量追加细胞法、剂量递增法和紫外线预先照射交替培养法，区获得９株犬肾传代细胞系（ＭＤＣＫ）抗药细胞（剂量分别为２０μｇ／ｍＬ和５０μｇ／ｍＬ），经ＨＡＴ系统敏感性试验和６－巯鸟嘌呤抗性鉴定，其中有８株为犬肾传代细胞ＨＧ－ＰＲＴ缺失突变株（ＭＤＣＫ／ＨＧＰＲＴ＾－）。该突变株细胞Ｇｉｅｍｓａ染色后呈卵圆形，核呈圆形，８３世代细胞（ＭＤＣＫ８３／ＨＧ     

猪链球菌2型SS2—1和SS2—H的培养稳定性检测

将猪链球菌2型制苗候选菌株SS2－1和SS2－H在血平板上连续传代至第41代，并分别检测第1代，第11代，第21代，第31代和第41代菌株的菌落及细菌形态，生化特性，溶菌酶释放蛋白（MRP)几胞外因子（EF0等指标。结果，从第1代至第41代，2株细菌的菌落及细菌形态，生化特性，MRP和EF均没有发生变异，这表明SS2－1和SS2－H菌株培养稳定性较好，使用限定代次至少可达41代，可作为理想的疫苗生产菌株。     

L-茶氨酸对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡的影响

本试验通过建立过氧化氢(H_2O_2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究L-茶氨酸对H_2O_2诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,培养于含5%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基中,待细胞密度达到60%~70%时,随机分为5组,分别为培养基中无额外添加物的对照组、添加800μmol/L H_2O_2的Ⅰ组、添加800μmol/L H_2O_2+4 mmol/L L-茶氨酸的Ⅱ组、添加800μmol/L H_2O_2+8 mmol/L L-茶氨酸的Ⅲ组和添加800μmol/L H_2O_2+16 mmol/L L-茶氨酸的Ⅳ组,每组3个重复。作用12 h后,应用流式细胞术(FCM)检测山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率,并采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡通路关键基因半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸-8(Caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)、Fas相关死亡域蛋白(FADD)和凋亡酶激活因子(Apaf-1)的表达量进行检测。结果显示:1)通过膜联蛋白-V(annexin V)/碘化丙啶(PI)联合染色结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组)细胞晚期凋亡比率显著降低(P0.05),且细胞晚期凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。2)通过RT-q PCR检测结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因的表达量皆显著降低(P0.05)。由此得出,L-茶氨酸对H_2O_2引起的山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡具有一定的保护作用,该结果可为今后研究反刍家畜瘤胃氧化应激损伤机制提供技术支持和理论参考。     

犬肾（DK）传代细胞中霉形体的分离与鉴定

取经电镜观察证实有霉形体污染的ＤＫ传代细胞，分别接种于霉形体检验用液体、半流体和固体培养基，证明为霉形体混合感染，即该培养物在液体培养基和半流体培养基上，同时显示出水解精氨酸和发酵葡萄糖２种特性，前者使培养基ｐＨ上升，后者使ｐＨ下降。通过反复挑选单个菌落进行克隆传代和有目的地加入单一种属的霉形体抗血清的方法，将混合的２株霉形体纯化分开。经鉴定，一株为精氨酸霉形体，一株为莱氏无（需）胆甾醇霉形体。     

Sf9细胞PHB2蛋白的原核表达及其抗血清的制备

为了研究Sf9细胞PHB2蛋白(Sf-PHB2)的功能及其对虾白斑综合症病毒(WSSV)极早期基因ie1的转录调控作用,本研究从昆虫细胞Sf9中扩增sf-phb2基因编码区,克隆至表达载体pET30a中,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达6His-Sf-PHB2重组蛋白.SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白以...     

猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪的攻毒保护试验

为进一步证明猪瘟活疫苗(传代细胞源)在猪场实际使用的免疫效力,本试验将中试生产的5批疫苗在广东的广州、韶关地区各选一个猪场进行临床应用试验。按照20日龄首免,60日龄二免的免疫程序,并分别于二免后第28天和第90天从5批疫苗免疫猪中各抽取5头,连同条件相同的对照猪各5头,在广东永顺生物制药股份有限公司负压动物舍进行猪瘟强毒攻击,观察发病死亡情况,评估猪瘟活疫苗(传代细胞源)在猪场实际应用的免疫保护效果。试验结果显示,5批疫苗免疫猪均能有效抵抗猪瘟强毒的攻击,既无死亡,也无猪瘟临床症状。表明在临床条件下应用猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪能产生很好的免疫保护力。     

猪瘟活疫苗（传代细胞源）的田间免疫效果试验

目前猪瘟疫苗主要有牛睾丸细胞苗、兔脾淋组织疫苗和传代细胞源活疫苗（ST传代细胞疫苗）,该疫苗采用国际认证的同源传代ST细胞培养,批间差异极小。稳定性好,病毒培养液中病毒含量高,而且避免了其它病毒污染的威胁．到2009年12月31日止,公司在农业部规定的广东、湖南、河南、四川、江苏、山东、辽宁和福建等8省（区）共销售使用了猪瘟活疫苗（传代细胞源）2000多万头份,     

鸡Bcl—2基因的克隆及其对卵泡闰细胞凋亡的影响

将鸡的Bcl-2基因克隆到真核表达载体JLV，构建了重组质粒JLVB。0．2μg／孔JLVB重组质粒经脂质体介导转染卵泡颗粒细胞，应用流式细胞术等方法分析了转染Bcl-2基因后原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。与对照组相比，转染后的传代细胞分裂速度较快（P＜0．01），凋亡比率较低，G2／M＋S期细胞比例极显著高于对照组（P＜0．01）。这些结果表明，Bcl-2基因具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的作用，这种作用是直接的。在转染时间为12h、DNA量为0．3μg/孔的条件下，较好的脂质体介导用量的1．2μL／孔。     

IBDV超强毒GX8/99株的细胞适应毒和鸡体传代毒的致病性和VP5基因的比较

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Diseas Virus,IBDV)的超强毒株GX8/99经在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续盲传23代后,细胞适应毒株GXC23时鸡的致病性显著减弱,对4～6周龄SPF鸡的致死率从85%～90%减为0～5%.GXC23在96孔细胞培养板上经2次无限稀释法后得到3个克隆病毒.经SPF鸡回传20代后,相应的毒株GX-2820、GX-4820、GX-5820对SPF鸡的致死率仍维持在0～5%.序列比较表明,GX8/99在传代过程中,其细胞适应毒GXC23有8个碱基突变,其中5个碱基突变导致了氨基酸改变.bp#2 T→C突变,导致传代毒ORF中的起始编码子后移了4个氨基酸.而3个克隆化病毒回鸡20代后致病性不变,这几个位点也保持不变,且与3个疫苗株完全一致.进一步分析表明,有4个超强毒株和4个强毒株的VP5基因的5个位点与GX8/99原始毒相同,而另3个超强毒及6个强毒株与细胞适应毒GXC23一致.这些结果表明,超强毒GX8/99在细胞传代过程中VP5基因上5个氨基酸的变异主要与适应细胞培养相关而与致病性无关.