猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

用重组核衣壳蛋白ELISA检测PRRSV抗体的研究

ＰＲＲＳＶ重组Ｎ蛋白ＥＬＩＳＡ检测人工感染猪血清７５份,与ＩＤＥＸＸ公司ＥＬＩＳＡ试剂盒及ＩＦＡ的符合率分别为９７．３％和１００％。检测疫苗免疫猪血清,阳性率１００％。在免疫后６ｄ就能检出抗体,比ＩＦＡ敏感。检测８５份我国田间猪血清,阳性率１８．８％。     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

应用间接荧光抗体试验检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

应用间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）进行了猪繁殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪场猪血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０９％；Ｌ猪场猪血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

一种检测猪生殖——呼吸道综合征的ELISA抗原的制备

利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００助溶，由猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞可制备出高纯度的ＥＬＩＳＡ抗原。这一技术消除了涉及到ＰＲＲＳＶ抗的及细胞抗在的常见本底反应。将这种高质量抗原应用到检测抗ＰＲＲＳＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ中，辅以一咱有效的血清封闭稀释剂可消除血清样品的非特异性反应。这种ＥＬＩＳＡ技术比间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）更为敏感；特别是对感染后期血清有高度特异性     

IPMA检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究

本研究在国内首次成功地建立了免疫过氧化物酶单层细胞试验（ＩＰＭＡ）检测猪生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体。应用ＩＰＭＡ检测了北京地区３个猪场９４份血清发现，英国株抗体阳性检出率为９．６％（９／９４），美国株Ｍ１的抗体阳性检出率为５１％（４８／９４）。同间接荧光抗体试验ＩＦＡ比较阳性检出率基本一致。利用ＩＦ和ＩＰＭＡ两种方法检测１８２份加拿大进口猪血清均有３头阳性，且编号相同，本试验证实了ＩＰＭＡ是一种检测ＰＲＲＳ抗体的有效方法，可应用于ＰＲＲＳ的血清学检测     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

应用ELISA检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

用ＥＬＩＳＡ法对青海省东部各县的部分猪群进行了猪繁殖和呼吸综合征抗征抗体检测。共检测了１２０６份猪血清,检出阳性血清２７８份,阳性率为２３．０５％,说明青海省的猪群中有可能存在ＰＲＲＳ。     

ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查

反复差速离心法提纯病毒，经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后作抗原，建立了检测血清中ＰＲＲＳＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法，该法不与猪瘟，伪狂犬病，乙脑，细小病毒及布我杆菌等病阳性血清反应，与美国ＩＤＥＸＸＰＲＲＳＶ抗体检测试盒同时对１００份样品进行检测比较，二者符合率达９８％，说明具有很好的特异性和敏感性。     

ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查

反复差速离心法提纯病毒，经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后作抗原，建立了检测血清中ＰＲＲＳＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。该法不与猪瘟、伪狂犬病、乙脑、细小病毒及布氏杆菌等病阳性血清反应，与美国ＩＤＥＸＸＰＲＲＳＶ抗体检测试剂盒同时对１００份样品进行检测比较，二者符合率达９８％，说明具有很好的特异性和敏感性。     

应用间接荧光抗体试验检测猪生殖-呼吸道综合征抗体

应用间接荧光抗体试验进行了猪生殖－呼吸道综合征病毒抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪场血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０．９％；Ｌ猪场血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV …

在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ     

猪生殖与呼吸综合症研究进展（2）

猪生殖与呼吸综合症研究进展（２）陈书琨，王贵平（深圳动植物检疫局深圳５１８０１０）（广东省农科院兽医研究所广州５１０６４０）１ＰＲＲＳ的流行病学１．１ＰＲＲＳ的发生和流行ＰＲＲＳ最初发生于美国。美国国家兽医服务实验室应用间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ）...     

I—ELISA特异诊断棘球蚴（包虫）病的研究

采用亲和层析技术纯化的兔抗棘球蚴抗体，建立了酶联免疫吸附抑制试验（Ｉ—ＥＬＩＳＡ）。取代反应和阻断反应均无非特异反应；检测健康对照血清１２６份（人３６，猪９０），均为阴性；与猪囊尾蚴病血清１３６份（人４６，猪９０）、细颈囊尾蚴病血清３８份（羊２２、猪１６）无交叉反应；对棘球蚴病血清１８３份（人６１、羊７１、猪５１）进行检测，其阳性符合率分别为８８．５％（５４／６１）、９８．６％（７０／７１）、９６．１％（４９／５１）。     

猪生殖和呼吸综合症的血清学诊断方法

１９９５年以来,国内学者相继建立了猪生殖和呼吸综合症（ＰＲＲＳ）的ＩＦＡ、ＩＰＭＡ、ＥＬＩＳＡ和Ｄ０ｔ－ＥＬＩＳＡ等血清学诊断方法,简述如下。１间接荧光抗体法（ＩＦＡ）细胞板的制备：将生长于培养瓶的Ｍａｒｃ１４５或ＨＳ２Ｈ细胞消化后,用含１０％犊牛血...     

应用间接接荧光抗体试验检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

应用间接荧光抗体试验进行了猪繁殖和呼吸综合征血清抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪猪血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性性血清２０份，阳性率为９０．９％；Ｌ猪场猪血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。