副干酪乳杆菌HD1.7高密度培养产细菌素Paracin1.7条件优化

在东北酸菜中发现的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei) HD1.7发酵液中含有细菌素Paracin1.7,凭借其较广的抑菌谱,有潜力成为新型的食品防腐剂,本研究旨在提高细菌素Paracin1.7的产量。以副干酪乳杆菌HD1.7为出发菌种,利用发酵罐高密度培养进行单因素发酵条件优化和正交试验设计,提高细菌素Paracin1.7的产量。结果表明,发酵过程中,最佳接种量为3%,最佳接种龄为18 h,最佳装液量为2 L/3.7 L,最佳初始pH 5.5,最佳通气量为0 L/min,最佳转速为400 r/min、最佳培养温度为35℃、最佳培养时间为24 h。在上述优化条件下,获得的发酵液中细菌素Paracin1.7的效价由优化前的863.01±39.77 AU/mL提高到978.46±7.16 AU/mL,是原始的1.13倍,菌体密度达到1010CFU/mL。通过优化发酵条件,能显著提高副干酪乳杆菌HD1.7生物量及细菌素产量,且为设计和改进高密度培养菌体奠定了试验基础。     

副干酪乳杆菌与芽孢杆菌属共培养种间关系对产细菌素的影响

为使芽孢杆菌属与副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)通过种间信息交流形成稳定的小生态环境,加大芽孢杆菌属的初始接种量,来探究L.paracasei HD1.7与其共培养的生态学关系.结果表明,将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)与L.paracasei HD1.7以5％:1％的...     

副干酪乳杆菌HD1.7遗传转化体系的初步建立

优化副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7的电转化条件,为构建L .paracasei HD1.7prcR基因敲除突变株奠定基础。通过电转化方法将自杀质粒pUC18-prcR-tet导入L. paracasei HD1.7内,对影响L .paracasei HD1.7电转化的几个主要因素进行了初步研究。当L. paracasei HD1.7生长8 h时,加入青霉素使终浓度为12.5 μg/mL,再培养1 h。经AEB1电转缓冲液(蔗糖浓度为0.3 mol/L)处理后,在1.8?2.0 KV电压下完成电击,并迅速加入MRS培养基中,复苏5 h,成功地将自杀质粒pUC18-prcR-tet转入L. paracasei HD1.7内,并发生了部分同源重组。本研究得到了副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）HD1.7较优电转化条件,为继续研究L.paracasei HD1.7的群体感应调控因子prcR奠定了基础。     

副干酪乳杆菌prcA基因克隆及生物信息学分析

旨在了解副干酪乳杆菌prcA基因的结构和功能,探明prcA基因与副干酪乳杆菌拟群体效应相关基因—自诱导肽编码基因之间的联系。通过PCR方法对副干酪乳杆菌中prcA进行扩增,并通过生物信息学方法对该基因的核苷酸组成、蛋白质构象等方面进行预测和分析。克隆得到的prcA基因全长为416 bp,包括一个138 bp的开放阅读框,编码45个氨基酸,蛋白分子量为5326.83 Da,等电点为4.85,是一种稳定蛋白,不含跨膜区,蛋白质的二级结构以α-螺旋、不规则卷曲和延伸主链组成,亚细胞定位预测显示该蛋白主要位于细胞外;prcA基因为副干酪乳杆菌拟群体效应相关基因—自诱导肽编码基因,负责细菌素生成的调控。     

干酪乳杆菌LC-STH-13高密度培养基优化

以干酪乳杆菌LC-STH-13为菌种,使用MRS基础培养基对菌种的进行活化。根据MRS培养基中的不同体系,对其进行改良,获得改良的MRS培养基。改良MRS培养基配方为:大豆蛋白胨9 g,牛肉粉11 g,酵母浸粉5.2 g,乳糖19 g,磷酸氢二钾2.2 g,柠檬酸三钠1.8 g,柠檬酸铵2.4 g,吐温80 1 mL,MgSO4.7H2O 0.56 g,MnSO4.4H2O 0.25 g。使用改良MRS培养基培养的菌体活菌数比MRS高出了1个数量级;在OD值和菌体干质量指标上,改良MRS是MRS的1.2倍。     

牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化

对离子交换色谱技术纯化乳铁蛋白的色谱条件进行研究.选用SP Sepharose Big Bead离子交换剂对乳铁蛋白有很好的吸附选择性.以pH值7.0,0.02 mol/L PB为起始缓冲液,通过改变离子强度进行分步洗脱.用0.25mol/L的NaC1溶液选择性洗脱非目标组分,再采用0.8 mol/L的NaCl洗脱LF组分.经SDS-PAGE和HPLC测定,所得乳铁蛋白纯度和回收率分别为95.07％和85.63％.经Western-lot鉴定,纯化的LF具有免疫活性.     

干酪乳杆菌LC2W胞外多糖提取工艺研究

对影响干酪乳杆菌LC2W胞外多糖提取的主要工艺参数进行了研究。发酵液经超滤浓缩,三氯乙酸脱蛋白,乙醇沉淀等处理,得到粗多糖。单因素和正交试验结果表明,用截留分子量为10 kDa的超滤膜将发酵上清液浓缩4倍后,用终浓度6%的三氯乙酸脱蛋白,再用5倍体积95%乙醇4℃沉淀24 h,多糖提取效果较佳。在此条件下,蛋白脱除率可达88.35%,EPS提取率可达92.17%。     

干酪乳杆菌HDS-01甘露聚糖酶基因克隆及生物信息学分析

本研究旨在借助基因克隆和生物信息学方法挖掘甘露聚糖酶基因的结构和功能。通过本地BLAST比对,从干酪乳杆菌(Lactobacillus casei) HDS-01的基因组信息中获得甘露聚糖酶基因M1。采用qRT-PCR测定MRS培养基和KGM培养基中M1的差异表达情况,表明KGM培养基中的魔芋粉更好的诱导M1的表达。以L.casei HDS-01基因组DNA为模板克隆基因M1,并利用生物信息学方法对其序列进行预测和分析。该序列长2640 bp,可翻译成879个氨基酸,包括一个2640 bp的开放阅读框;M1蛋白分子量为98723.55 Da,等电点为5.58。这种稳定的M1蛋白的二级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规则卷曲组成。研究结果不仅为甘露聚糖酶分子改造提供理论依据,同时有助于了解乳酸菌中甘露聚糖的代谢路径。     

辣椒渣鲜味肽初步分离纯化研究

以辣椒渣为原料,将辣椒渣中蛋白提取出来,采用风味酶和复合蛋白酶进行酶解得到蛋白酶解液,然后将辣椒渣酶解液进行初步分离纯化和感官评价,获得辣椒渣目标鲜味肽的相对分子质量范围为307.32~1 422.69 Da,鲜味评分为8.0分,综合风味评分为4.1分。     

酸奶中保加利亚乳杆菌原生质体制备的初步研究

【研究目的】研究保加利亚乳杆菌原生质体制备的适宜条件;【研究方法】从酸奶中分离培养了保加利亚乳杆菌,观察生长动力学特性,在培养基中添加甘氨酸、变溶菌素进行了原生质体的制备;【结果】分离的保加利亚乳杆菌为革兰氏阳性杆菌,生长对数期为2-16h;在培养基中添加甘氨酸（1mg/ml）能够显著提高原生质体的形成率;原生质体的形成率随着酶浓度的增大而增大,随着酶解时间的延长而提高;【结论】原生质体制备的最适酶浓度为4ug/ml,作用时间为45min。     

藏灵菇源干酪乳杆菌发酵剂分批发酵条件的优化

为了提高发酵液中筛选自藏灵菇产胆盐水解酶干酪乳杆菌KL1的活菌数量,通过采用5 L自动发酵罐进行三因素三水平[L₉(3⁴)]正交试验的方法,研究不同培养基与发酵条件对发酵剂活菌数的影响。结果表明：在发酵温度40℃、接种量3%、发酵液pH 6.5、发酵时间20 h的条件下,采用改良MRS培养基,发酵剂活菌数量最高,为8.2×10⁹ CFU/mL。在此优化条件下,发酵剂的活菌数是优化前的25.63倍。     

重组减蛋综合征病毒KnobS干酪乳杆菌的构建与表达

以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方法进行鉴定。KnobS基因整合到干酪乳酸杆菌基因组内,并实现融合蛋白KnobS的分泌表达。表明得到了一株具有无任何选择性标记、携带有KnobS表达盒元件的基因组整合的重组干酪乳酸杆菌KnobSΔupp L.casei,且整合的外源基因能够随着细菌的复制而进行表达,为减蛋综合征病毒免疫保护性抗原KnobS疫苗的进一步研制提供了试验数据。     

枯草芽胞杆菌信号分子的分离纯化

为了获得较高纯度的B. subtilis分泌的信号分子,采用离子交换层析的方法对其进行分离纯化。本文研究了洗脱液及其pH和流速对分离纯化效果的影响,得到最佳层析条件：离子交换层析洗脱液(B液)为pH 4.0的NaAc + NaCl溶液,平衡液(A液)为pH 4.0的NaAc溶液,洗脱流速为2 mL/min;SDS-PAGE验证表明在5 kDa左右出现单个条带,且抑菌试验结果表明层析液中的B. subtilis信号分子能促进L. paracasei HD1.7产细菌素。     

干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HDS-01产甘露聚糖酶条件研究

旨在提高分离自东北酸菜发酵液中的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HDS-01产酶水平,为甘露聚糖酶的分离纯化和工业生产奠定基础,以MRS为初始培养基,设置不同培养基组分及发酵条件进行单因素试验,用DNS法和平板菌落计数法分别测定酶活和L. casei HDS-01生长量。试验实验结果表明L. casei HDS-01产甘露聚糖酶的最优条件如下:最适碳源及浓度为0.8%的果胶,最适氮源及浓度为0.2%的酵母提取物和硝酸铵,无机盐种类及浓度包括0.2%的柠檬酸铵、0.1%的磷酸氢二钾、0.9%的乙酸钠,最适装液量为100 mL/250 mL,最适接种量为7%,最适培养温度为37℃,初始pH 5.5。按照上述最适条件,在摇床转速为140 r/min条件下培养36 h后,酶活可达72.7±0.30 U/mL,较优化前的产酶水平提升了6.51倍。     

酸泡菜中植物乳杆菌的分离鉴定

为了从酸泡菜中分离出可用于纯种接种用的植物乳杆菌,通过对市售酸泡菜中分离出的40株菌株,从形态、培养特征、生理生化以及乳酸定性等方面进行鉴定,得到2株植物乳杆菌,可用于酸泡菜的接种发酵。同时对36号株菌做培养特性测定,根据株菌生长曲线及pH值的变化曲线,判定该植物乳杆菌的对数生长末期为18 h。     

干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分体外对巨噬细胞活性的影响

探讨干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分体外对小鼠巨噬细胞功能的影响。以培养液单纯培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞作为对照,研究干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖对RAW264.7细胞代谢水平、吞噬中性红能力及释放NO的影响。不同浓度磷壁酸和肽聚糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞代谢MTT能力、吞噬中性红能力有明显增强作用,并呈一定的剂量效应,在相同质量浓度时,两种细胞壁组分激活巨噬细胞能力无显著差异。同时诱导产生NO量也随着浓度增大而增加,当浓度达到50μg/mL时,磷壁酸诱导能力显现出较高的水平。干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖能激活小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,提高其代谢水平及吞噬能力,同时可诱导具有杀瘤作用的活性因子,并具有一定的剂量效应。     

肉制品中产细菌素乳酸菌的分离及鉴定

从北京市售肉制品中分离筛选出1株具有抑菌活性的乳酸菌菌株L5-6,对单核细胞增生李斯特氏菌ATCC54003的生长具有良好的抑制作用。排除有机酸、过氧化氢的干扰后,确定该抑菌物质为蛋白类物质,即细菌素。16SrRNA序列同源性分析鉴定L5-6为戊糖片球菌。对L5-6中编码细菌素的结构基因进行克隆,推断L5-6所产的细菌素是片球菌素。片球菌素应用于肉制品防腐具有潜在的开发价值和广阔的市场前景,课题组对L5-6进行了初步的研究,为开发天然安全的食品保鲜防腐剂奠定基础。     

益生菌芽孢杆菌的分离与初步鉴定

鉴于抗生素在饲料添加剂中的滥用,研究高效复合益生菌来替代抗生素已变得越来越重要。益生菌是一类新型饲料（食品）添加剂,可改善人畜肠道环境,减少体内有害菌群及有害物质含量。在本实验中,利用大肠杆菌(Escherichia coli)为抑菌对象,分离到4株益生菌,实验证明其抑菌效果理想,经过经形态学观察及传统生理生化实验分析表明：本实验所获得的4株菌均为芽孢杆菌(Bacillus spp.),为进一步开发高效复合益生菌奠定菌种基础。     

蓖麻毒蛋白的分离纯化和毒理作用研究

经（NH4）2SO4沉淀, 分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白, 在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈32kDa和34kDa两条蛋白带, 证明该蓖麻毒蛋白已被纯化至均一。 用等电聚焦法测出该蓖麻毒蛋白的等电点为pI 6.1和pI6.7。 高效液相色谱测出该蓖麻毒蛋白在非变性条件下有五个峰, 表明蓖麻毒蛋白可能存在五个不同的多聚态。 动物实验表明该蓖麻毒蛋白对小白鼠有较强的毒性,但对斜纹夜蛾幼虫无毒杀作用。     

藏灵菇源干酪乳杆菌KL1高产胆盐水解酶发酵条件的优化研究

本文利用从藏灵菇中筛选的产胆盐水解酶的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)研究提高酶活力的环境因素。针对主要影响胆盐水解酶合成的四个因素,采用四因素三水平［L9(34)］正交试验确定了高产胆盐水解酶优化发酵条件：葡萄糖添加量为2％、大豆蛋白胨添加量为2%、发酵温度为37℃、接种量为2%。在优化条件下,胆盐水解酶活力是优化前的7.4倍。