几种危险性病毒抗血清的制备及检测方法的建立

番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和南芥菜花叶病毒用改进的方法提纯后免疫兔子，制备出高质量的抗血清。琼脂扩散效价为１／３２０，用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ方法检测病汁液可达１０－３～１０－４。３种血清之间无交叉反应，与健康寄主和常见的自然寄主蛋白也无反应。应用３种血清分别对２３种植物１００多个采集的样品和进口种子进行了ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测，未发现有上述３种病毒存在     

一种豇豆重花叶病毒RT-PCR检测方法的研究

对一种豇豆重花叶病毒(Cowpeas evere mosaic virus,CPSMV)反转录PCR分子检测方法进行了研究。利用从美国菌种保藏中心和德国微生物毒株保藏中心引进的CPSMV标准毒株,设计了一对特异性简并引物(CPSMVf/CPSMVr),建立了CPSMVRT-PCR检测方法。该方法具有良好的扩增反应及特异性,灵敏度可达1pg的总病叶组织RNA量。CPSMV双抗夹心酶联免疫法(DAS-ELISA)灵敏度为10μg叶组织。该方法适用于豇豆等豆类蔬菜种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测。     

PALLAS,一种敏感试验的新的反应物——适用于不适宜做乳胶试验的抗血清

具有很高敏感性和特异性的血清学技术如乳胶凝集试验(Bercks 1967,Bercks and Querfurth 1969)或ELISA试验(Clark and Adams 1977,Vollet et al.1976),在植物病毒常规诊断中的重要性日益增长。但是做了十年的工作,发现抗血清滴度低或含有抑制物质不适于做乳胶实验。这样的抗血清必须做特殊处理之后才能     

用酶联免疫吸附法检测番木瓜的两种病毒病

同属于马铃薯Y病毒组的番木瓜环斑病毒P型(PRSV—P)和番木瓜叶变形花叶病毒(PLDMV)能在番木瓜上引起症状相似的病害。这两种病害仅根据症状难以区别。采用双向抗体夹层的酶联免疫吸附法,可以上述两种抗体血清的1000倍稀释液对被侵染的番木瓜的天然提取液进行检测。     

酶免法检测普氏野马粪便性类固醇激素的最佳稀释比例

甲醇对粪便性类固醇激素的检测有一定的影响,为了确定应用酶联免疫方法(酶免法)检测普氏野马粪便性激素的最佳稀释比例,对甲醇保存的提取样品在检测前用PBS缓冲液进行一定比例的稀释。结果显示:检测孕酮(P),样本稀释15倍时;检测睾酮(T),样本稀释15倍时;检测雌二醇(E2),样本稀释30~50倍时,酶标抗原的结合率(B/B0)接近50%,意味着50%的包被抗体被酶标抗原结合,此时的检测结果较灵敏。     

一种快速简便检测马铃薯病毒的方法——病毒细菌协同凝集法(VBA)的研究

在国内、外首次选用金黄色葡萄球菌(Staphylococc aureus)的No.180菌株用于病毒细菌协同凝集试验(Virobacterial agglutination test简称VBA)检测了来自马铃薯的4种不同形态粒子的病毒:马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯丫病毒(PVY)、烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯卷叶病毒(PLRV),其灵敏度达2.7～6.1ng/ml,检出病汁液的最大稀释度达10~4～10~5(PLRV1:500),较国内、外采用的Cown I菌株的灵敏度提高5～10倍。与血清学方法相比,VBA在2～3分种内就可获得结果,无假阳性反应,其灵敏度显著高于间接酶联法和免疫电镜,而接近于A蛋白酶联法。经抗血清致敏的菌体在4℃下保存4个月,对VBA检测的灵敏度没有影响。用VBA对采自田间的93个马铃薯病样进行检测,它们大多受2～3种病毒(PVX、PVY及PLRV)的复合侵染;和用间接酶联法及鉴别寄主检测的结果趋向一致。室内和田间试验均表明VBA灵敏度高、特异性强、快速简便和经济,尤其适合在基层单位中推广应用。     

一种快速简便检测马铃薯病毒的方法——病毒细菌协同凝集法(VBA)的研究

 在国内、外首次选用金黄色葡萄球菌(Staphylococc aureus)的No.180菌株用于病毒细菌协同凝集试验(Virobacterial agglutination test简称VBA)检测了来自马铃薯的4种不同形态粒子的病毒:马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯丫病毒(PVY)、烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯卷叶病毒(PLRV),其灵敏度达2.7~6.1ng/ml,检出病汁液的最大稀释度达10⁴~10⁵(PLRV1:500),较国内、外采用的Cown I菌株的灵敏度提高5~10倍。与血清学方法相比,VBA在2~3分种内就可获得结果,无假阳性反应,其灵敏度显著高于间接酶联法和免疫电镜,而接近于A蛋白酶联法。经抗血清致敏的菌体在4℃下保存4个月,对VBA检测的灵敏度没有影响。用VBA对采自田间的93个马铃薯病样进行检测,它们大多受2~3种病毒(PVX、PVY及PLRV)的复合侵染;和用间接酶联法及鉴别寄主检测的结果趋向一致。室内和田间试验均表明VBA灵敏度高、特异性强、快速简便和经济,尤其适合在基层单位中推广应用。