马铃薯立枯丝核菌生物学特性研究

采用生长速率法研究了黑龙江省马铃薯立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)菌丝生长的条件。结果表明病菌菌丝在10~35℃均能生长,适宜温度是25~30℃,30℃菌丝生长最快。在pH为3~12的范围内病菌菌丝均能生长,以pH 5~7菌丝生长速度较快。黑暗对菌丝生长有促进作用,光照可促进菌核的形成。不同碳源、氮源对立枯丝核菌菌丝生长的影响均较明显,可溶性淀粉和酵母粉对菌丝生长有显著的促进作用。立枯丝核菌菌丝体及菌核的致死温度分别为49℃和51℃。明确了黑龙江省马铃薯立枯丝核菌生长的环境条件,可为病害防治提供理论依据。     

毒素在稻纹枯病菌致病中的作用分析

用水稻胚根生长抑制法测定了10个稻纹枯病菌菌株在寄主体外产生毒素的能力,发现不同菌株的产毒能力各不相同,且产毒量差异极显著。用水稻离体叶接种法测定了这10个菌株的致病力,结果表明：不同菌株的致病力也各不相同,且差异极显著。相关分析发现,菌株的体外产毒能力与致病力高度正相关（R =0.915 2）。这些结果表明：稻纹枯病菌毒素的分泌可能在其致病过程中起重要作用。     

新疆北疆棉田立枯丝核菌不同菌丝融合群致病力的研究

从新疆北疆棉区采集了典型的棉花立枯病病苗及棉田土标样686份,按常规分离方法分离得到399个分离物,从中鉴定出272个纯化的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)菌株。用标准菌株,通过载玻片菌丝融合试验测定,将纯化的272个菌株划归为3个菌丝融合群:即AG-2、AG-4和AG-5,分别占总菌株的6.24%、84.2%和1.1%。另有23个菌株不与任何标准菌株融合,占8.46%,说明新疆北疆棉田立枯丝核菌的优势菌系是多核丝核菌的AG-4融合群。通过从10种不同配方培养基中筛选效果好的麦芽蛋白胨(MPDA)配方培养基(Ⅱ)进行对峙培养,将纯化获得的272个丝核菌菌株,划分为6个不同的营养亲和群。将多核的不同菌丝融合群及其各营养亲和群代表菌株在3种不同主栽棉花品种上(每品种都加不接菌的对照)进行温室盆栽致病力测定,结果以AG-4对棉花的致病力最强,其次是非融合类,AG-2和AG-5虽致病,但并不致死苗,其平均病指数分别为94.9、81.4、53.1、43.5。     

黄绿木霉发酵液对水稻纹枯病菌作用的研究

利用黄绿木霉菌发酵液处理水稻纹枯病丝核菌,初步探讨了黄绿木霉菌发酵液对水稻纹枯病丝核菌的抑菌能力及抑菌机理。试验结果表明：黄绿木霉菌发酵液抑菌作用稳定,经121 ℃处理25 min后,抑菌率为100%; pH3～8的范围内抑菌率均为100%。经黄绿木霉菌发酵液处理的水稻纹枯病丝核菌菌丝电导率与呼吸强度几乎下降为0,光学显微镜观察到菌体形态发生变化,透射电镜下观察到细胞壁出现孔洞。用处理后的水稻纹枯病丝核菌菌丝接种水稻植株,发病率明显降低。     

鸭粪中1株水稻纹枯病菌拮抗细菌的鉴定

为探索稻鸭复合生态系统抑制水稻纹枯病发生的作用机理,以从鸭粪中分离到的1株拮抗细菌A168对水稻纹枯病菌的拮抗效果进行了研究。测定了其对水稻纹枯病菌的拮抗作用及其抑菌谱;根据培养性状、形态特征、生理生化测定、扫描电镜观察及16S rDNA序列分析对其进行了鉴定;构建了包括其在内的13株相关种属菌株的系统发育树。A168菌株对水稻纹枯病有明显的拮抗作用,且对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)和油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)有抑制作用,抑菌谱广;A168菌体杆状,革兰氏染色阳性、芽孢中生、周生鞭毛、16S rDNA分析与其亲缘关系较近菌株Bacillus cereus(AJ577288.1)的同源性达99%,结合形态和生理生化特征,鉴定A168菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),其16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为GQ118339。A168为开发防治水稻纹枯病生防制剂提供了依据。     

水稻纹枯病菌菌核上的真菌和细菌种类及其对水稻纹枯病菌生长的影响

 A total of 136 fungal and 86 bacterial isolates were isolated from the sclerotia of Rhizoctonia solani,collected from three different sources.These fungal isolates were identified as the following 12 genera:Alternaria,Aspergillus,Cladosporium,Coniothyrium,Curvularia,Gliocladium,Fusarium,Metarhizium,Peni-cillium,Phoma,Phytophthora and Trichoderma.Some isolates of Trichoderma and Gliocladium were found to inhibit the growth of R.solani strongly in vitro.Among the 86 bacterial isolates,20 of them could inhibit the growth of R.solani,whereas 5 isolates were found to promote the growth of mycelia and the formation of sclerotia of R.solani.These bacterial isolates with antagonistic actives to R.solani were identified as Bacillus and Pseudomonas.     

枯草芽孢杆菌G3菌株抑制立枯丝核菌菌核形成的影响因子分析

产几丁质酶枯草芽孢杆菌G3菌剂在土壤中可抑制水稻纹枯病菌菌核形成。菌剂的适宜剂量为 1 1 5× 1 0 8cfu/g。温度、土壤含水量和菌剂处理的时间是影响效果的因素。 1 5～ 30℃培养 ,G3菌剂处理的菌核减退率从 35 2 %逐步上升到 77 8%。在 1 6 %～ 2 4 %土壤含水量的条件下 ,菌核减退率从 75 5%下降到 2 1 7%。接种病原真菌前施用G3菌剂比接种后效果更好。来源于湖南、山西、云南和上海的不同区域土壤对防效没有显著影响。菌剂添加豆粕粉、壳聚糖、葡萄糖和淀粉有不同程度的增效作用 ,尤其是壳聚糖 ,增效率达 2 9 2 %。     

几丁质裂解微生物防治棉苗立枯病

研究了几丁质裂解微生物对立枯丝核菌引起的棉花立枯病的防治作用。用几丁质改良的Hutchinson培养基对几丁质裂解微生物进行分离,在42株几丁质裂解微生物中,有2株放线菌在培养基和土壤中都对立枯丝核菌有较强的抑制作用。选择上述两个菌株和几丁质配成10％生物拌种素,并用5％几丁质粉及20％几丁质酸溶物(20％拌种素),进行对棉花出苗的影响和对立枯丝核菌(立枯病)防效的田间试验。结果表明,10％生物拌种素对棉花出苗有明显促进作用,提高出苗率8.9％,出苗期提前5d以上。20％拌种素和5％几丁质对棉花出苗无明显不利影响;10％生物拌种素、5％几丁质和20％拌种素对棉花立枯病均有较好的防效,分别达68.2％、64.8％和51.9％。     

杜仲内生真菌中抗玉米纹枯病活性菌株的筛选

对杜仲植物中的内生真菌进行分离纯化, 共得到 32株菌株。以玉米纹枯病菌为指示菌, 对杜仲内生真菌进行对峙培养法、菌丝生长速率法以及盆栽控病试验等研究。研究结果显示, 内生真菌DZGS08对玉米纹枯病菌具有较好的拮抗作用, 抑菌带宽度大于10 mm; 其菌丝生长速率试验显示DZGS08的发酵液抑菌率达到50.44 %; 且玉米盆栽试验结果表明, 菌株DZGS08发酵液对玉米纹枯病的防治效果为34.03%。显微观察结果表明, 拮抗菌株DZGS08能造成病原菌菌丝扭曲、畸形等现象。随后, 对该菌株的ITS 序列进行测定分析, 序列分析和聚类结果表明该菌株为梭孢壳属( Thielavia )的真菌。     

应用稻苗离体叶片法筛选水稻纹枯病新农药活性的研究

采用水稻离体叶片法测定了农药对水稻纹枯病的活性。结果表明,该法与“植株法”比较有很好的相关性,具有占用空间小、温湿度容易控制、快速、准确等优点,适合于大量化合物的筛选试验。     

茄科蔬菜立枯丝核菌的融合群鉴定

 Sixty-five samples were collected from rhizosphere soil, hot pepper and tomato plants showing damping-off, root rot and stem rot in Taian, Shouguang of Shandong province and Zhouzhi, Taibai of Shaanxi province. Thirty-nine Rhizoctonia solani isolates were obtained from these samples. The results of anastomosis group (AG) identification and sequence analysis of 5.8S rDNA-ITS of the isolates showed that thirty-six isolates (92.3%) belonged to AG-4, while only three (7.7%) belonged to AG-5. The isolates of AG4 could further be divided into two subgroups of AG4-HG-Ⅰ and AG4-HG-Ⅲ. The 5.8S rDNA-ITS sequences of the selected isolates of the two subgroups had the 99%-100% identity with standard isolates of AG4-HG-Ⅰ and AG4-HG-Ⅲ (from GenBank). Among the analyzed isolates, AG4-HG-Ⅰ subgroup was the dominant with the frequency of 79.5%. Subgroup AG-4-HG-Ⅲ with the frequency of 12.8% was the second. This is the first report that subgroup AG4-HG-Ⅲ of R. solani isolated from Solanaceae vegetable crops in China.     

中国中部5省(市)草坪禾草立枯丝核菌的菌丝融合群研究

 2003~2005年,从我国冷季型草坪与暖季型草坪过渡地区的上海市、浙江省、山东省、河南省和陕西省草坪褐斑病的病株样本中,分离得到了43个立枯丝核菌分离物,其寄主包括多年生黑麦草(Lolium perenne)、高羊茅(Festuca arundina-cea)、草地早熟禾(Poa pratensis)、匍匐翦股颍(Agrostis palustris)、结缕草(Zoysia japonica)和狗牙根(Cynodon dactylon)。按照Parmeter等的方法对该过渡带的草坪禾草立枯丝核菌分离物进行了菌丝融合群的测定,结果表明,上述5省(市)草坪禾草立枯丝核菌的菌丝融合群包括AG1-1A、AG1-1B、AG2-1、AG2-2ⅢB、AG2-2Ⅳ、AG-4和AG-5。不同省份、不同寄主草坪禾草的菌丝融合群类型略有不同,主要融合群类型为AG-1和AG-2。AG1-1B和AG2-1是草坪上首次报道的立枯丝核菌融合(亚)群。     

木霉对草坪褐斑病的拮抗效果及耐药性

通过木霉属5菌株与大连高尔夫球场上草坪褐斑病菌的对峙培养试验,研究结果表明:哈茨木霉Thar1菌株、哈茨木霉Thar2菌株、深绿木霉Tat菌株、钩状木霉Tha菌株及桔绿木霉Tci菌株对病原菌的抑制率为:66%、73%、71%、77%、55%,而相对抑菌效果分别为2.06、3.94、2.35、3.54、2.27,可以作为草坪褐斑病菌的生防菌加以利用。在这5株木霉中以哈茨木霉Thar2对草坪褐斑病菌的拮抗作用最强。观察结果表明,哈茨木霉Thar2对草坪褐斑病菌的拮抗机制主要表现为生长竞争、重寄生及产生抗菌物质。     

新疆11种豆科作物立枯丝核菌菌丝融合群及营养亲和群研究

从新疆11种豆科作物病株上或病株根围土样中分离纯化出250个立枯丝核菌（Rhizoctonia DC）,番红O KOH染色后观察细胞核数目,经测试全部菌株均为多核,用标准菌株测定融合群, 250个菌株分属为AG 1、AG 2、AG 3、AG 4和AG 5共5个融合群,出现频率分别为16.4%、33.2%、0.4%、32.4%和17.6%,营养亲合群判别结果表明,AG 1、AG 2、AG 4和AG 5下各有2个VCG,说明新疆豆科作物立枯丝核菌各主要菌丝融合群内均有不同程度的分化。     

温度对玉米纹枯病菌生长与发病的影响

室内控制性测定结果表明,玉米纹枯病菌(RhizoctoniasolaniAG1鄄IA)菌丝生长的温度10～35℃,最适温度25～30℃;菌核萌发温度18～35℃,最适温度25～30℃。在幼苗和离体叶鞘上由菌丝引起侵染和发病的温度15～35℃,以25～30℃最适宜,潜育期最短,病斑较大。田间分期播种观察分析,气温和地面温度与病害始见的历期(播种期至病害初见期)分别呈显著负相关和极显著负相关。在田间自然条件下,始病的温度为20℃左右。这些结果为了解玉米纹枯病的发生规律,开展预测预报提供了科学依据。     

稻纹枯病菌菌株与水稻品种的致病互作分析

 用离体叶接种方法进行稻纹枯病菌群体致病力和水稻抗病力测定,将结果进行统计学分析及图解分析发现,病菌群体的致病力呈现连续变异的数量性状特征,服从正态分布;菌株与品种的致病互作中,菌株间的差异、品种间的差异、以及菌株-品种互作间的差异均达到极显著水平,但互作效应对致病反应的变异所起的作用很小,致病反应的变异主要由菌株效应的差异或者品种效应的差异造成;大多数菌株在品种“中浙优1号”上的致病力排序与在“特优524”上的排序趋势是一致的;大多数品种对菌株2008-126-2的抗病力排序与对菌株2008-88-1的排序趋势是一致的。依结果认为寄主水稻的抗病力也服从正态分布。基于这些分布特征和致病互作特征,可以认为,一般要体现病害差异的试验,水稻寄主应选用中等抗病力的品种,病菌应选用中等致病力的菌株。抗病育种实践中,进行品种资源抗病性评价时,可采用二步行策略,第一步先用一个中等致病力菌株对所有品种先行鉴定,第二步用一个强致病力（或弱致病力）菌株对高抗病力（或低抗病力）的品种再行鉴定。同理,病菌材料的致病性评价也可采用二步行策略,第一步先用一个中等抗病力品种对所有菌株先行鉴定,第二步用一个高抗病力（或低抗病力）品种对强致病力（或弱致病力）的菌株再行鉴定。品种抗病性（或菌株的致病性）的鉴定结果可以采用正态分布函数计算法进行分组归类。     

丙环唑对水稻纹枯病菌的抑制作用及对纹枯病的防治效果

为明确丙环唑对水稻纹枯病的防治作用,通过离体抑菌试验,温室盆钵试验和田间试验研究了丙环唑对水稻纹枯病菌的抑制作用和对纹枯病的防治效果.离体抑菌试验表明,丙环唑能够强烈抑制水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)的菌丝生长,EC50为0.045 μg/mL,并能够强烈抑制菌核产生,但不能抑制菌核萌发.温室试验表明,纹枯病菌经丙环唑处理后,致病力随药剂浓度提高而显著减弱;丙环唑可以很好地被水稻叶片和根系吸收,并输送到水稻的茎部和叶鞘;丙环唑对水稻纹枯病具有保护和治疗作用,400 μg/mL丙环唑处理水稻,抑制病斑长度分别达到82.16％和76.61％,并随药剂处理浓度的降低而降低;丙环唑对立枯丝核菌有较长的持效期,800 μg/mL处理水稻11 d后再接种的防效为40.10％.田间药效试验表明,25％的丙环唑乳油在有效剂量150 g/hm2下3次喷药后14 d的防效达到89.15％,丙环唑在本试验剂量范围内对水稻安全.表明丙环唑对水稻纹枯病有很好的防治作用,可为生产上防治水稻纹枯病和科学用药提供依据.     

6种杀菌剂对马铃薯黑痣病菌的毒力和拌种防效

为了探索马铃薯黑痣病高效防控技术,本研究选择240 g/L噻呋酰胺SC、20％嘧菌酯WG、10％苯醚甲环唑ME、0.3％四霉素AS、100万孢子/g寡雄腐霉WP、1％申嗪霉素SC等6种杀菌剂进行室内毒力测定和田间拌种防效试验.结果显示,6种杀菌剂对马铃薯黑痣病菌均有抑菌作用,其中1％申嗪霉素SC、20％嘧菌酯WG、0....     

水稻纹枯病菌PG的分离纯化及其理化性质研究

水稻纹枯病菌产生的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)是其重要的致病因子之一。用丙酮法提取PG粗蛋白,分别经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱、Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水柱、Sephadex G-75凝胶柱和DE52离子交换柱层析纯化得到一种具有较高活性的PG纯蛋白。该蛋白分子量为39.81 kD;等电点为4.58;含有糖基,含糖量为1.48%;含有α氨基酸,但不含芳香族氨基酸;不含脂基。这种蛋白在pH4~12范围内均具有活性,pH5时活性最大;对热不稳定,100℃下水浴20 min,活性完全丧失;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,酶处理后其活性只有对照的35.0%和35.2%;对紫外线和氯仿亦敏感,处理后活性仅为对照的40.0%和51.7%。     

Mixtures of organic amendments and biochar promote beneficial soil microbiota and affect Fusarium oxysporum f. sp. lactucae,Rhizoctonia solani and Sclerotinia minor disease suppression

The use of soil fumigants and fungicides to control soilborne pathogens is reduced due to awareness of their negative drawbacks. Long-term application of such agrochemicals negatively affects soil microbiota and reduces natural soil suppressiveness. We investigated long-term impacts of biochar and not-pyrogenic organic amendment (OAs: manure, alfalfa straw and glucose), on disease suppression compared with conventional management in three pathosystems: Fusarium oxysporum f. sp. lactucae (FOL)–lettuce, Rhizoctonia solani–tomato and Sclerotinia sclerotiorum–lettuce, by conditioning soil for 2 years. Soil analyses included pH, electrical conductivity, organic carbon, total nitrogen, C:N ratio, N-NO₃⁻, N-NH₄⁺, cation exchange capacity, available phosphorus, Ca²⁺, Mg²⁺, K⁺, Na⁺, fluorescein diacetate (FDA), and total and active limestone. Soil microbiota was characterized by combining BIOLOG EcoPlates with next-generation sequencing of 16S and 18S rRNA genes. Soil amended with OAs generally suppressed disease by S. sclerotiorum and FOL compared to fumigants and synthetic fertilizers. However, the incidence of R. solani infection was lower in soil treated with synthetic fertilizers than soil amended with OAs. EC, pH, C:N, N-NO₃⁻, N-NH₄⁺, FDA and BIOLOG were significantly correlated with disease, depending on pathosystem. Bacterial richness and diversity, presence of some genera like Acidobacteria, Chloracidobacteria, Solibacteres, Anaerolineae, Nitrospira and Deltaproteobacteria were negatively related to disease incidence of FOL and S. sclerotiorum, whereas damping-off caused by R. solani was negatively affected by the presence of Flavobacterium and Chitinofagha. Therefore, we concluded that long-term application of OAs can effectively improve soil suppressiveness and reduce disease incidence against root pathogens, although the effects vary considerably depending upon pathosystem.