不同柑桔种质资源对桔全爪螨酶活性及其对药剂敏感性的影响

采用生物测定和微量滴度酶标板法,研究了7种柑桔种质资源上桔全爪螨种群对炔螨特的敏感性及其体内羧酸酯酶(CarE)活性的变化。结果表明取食不同柑桔种质资源的桔全爪螨对炔螨特的敏感性不同,按其LC50从小到大依次排列为大浦、太田柑、天草、纽荷尔、枳壳、德尔塔和北碚447。其中在北碚447上种群的LC50是大浦上种群的6.96倍。生化分析表明,取食不同柑桔种质资源的桔全爪螨体内的羧酸酯酶活性不同,从低到高依次为大浦、太田柑、天草、纽荷尔、枳壳、德尔塔和北碚447。比较7个种群羧酸酯酶活性个体频率分布发现,北碚447和德尔塔种群中有更多的桔全爪螨个体向酶活性高的区域分布,且对药剂的敏感性与酯酶活性间存在显著的相关关系。     

桔全爪螨田间种群对双甲脒的敏感性及其两种酶的生化特性

分别对采自重庆市北碚、忠县、万州和长寿四个地区的桔全爪螨雌成螨对双甲脒的敏感性进行了生物测定,其LD50分别为0.014、0.031、0.111和0.007mg/L。同时测定了四个地区桔全爪螨成螨体内羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活性,其中羧酸酯酶活性依次为7.78、3.15、6.56和6.00nmol/(min·insect),乙酰胆碱酯酶比活力依次为1.07、0.49、0.50和0.37nmol/(min·mg)。四个地区桔全爪螨体内羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的动力学常数也存在不同程度的差异。离体抑制作用表明,双甲脒对四个地区桔全爪螨羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶具有明显的抑制作用,当双甲脒浓度达到14.67mmol/L时,抑制作用最强,对北碚、忠县、万州和长寿四个地区桔全爪螨羧酸酯酶的抑制率分别为65.27%、73.84%、81.44%和88.36%,对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别为86.84%、84.36%、73.32%和70.85%。     

氰戊菊酯对桔全爪螨的影响

1987—1990年的研究结果表明:(1)未发现桔全爪螨对氰戊菊酯的抗药性有增强现象.(2)氰戊菊酯对桔全爪螨的影响与气温有密切相关.气温较低时,氰戊菊酯对桔全爪螨表现有抑制作用:气温较高时,氰戊菊酯对桔全爪螨表现有明显的刺激作用.(3)氰戊菊酯与双甲脒(1:1)混用对桔全爪螨有明显的增效作用,并能有效地克服氰戊菊酯对桔全爪螨的刺激作用.     

德氏钝绥螨对桔全爪螨捕食作用研究简报

德氏钝绥螨(Anblyseius deleoni)是桔全爪螨(Panonychus citri)的重要天敌之一。人工室内饲养德氏钝绥螨的成功,为桔全爪螨的生物防治提供了广阔前景。然而,迄今为止,德氏饨绥螨对桔全爪螨的功能反应、数值反应及对桔全爪螨不同发育期的选择捕食力等仍尚待揭示,由释放德氏钝绥螨的不同条件而造成的对桔全爪螨防治效果的差异也还需进一步探索。本文初步研究了德氏钝绥螨对桔全爪螨的捕食作用,组建了桔全爪螨—德氏钝绥螨种群数量变动的模拟模型,并在四种不同释螨条件下,进行了桔全爪螨种群数量变动的模拟实验。现将研究结果简报如下:     

桔全爪螨对三氯杀螨醇、哒螨灵的抗药性监测

采用玻片浸渍法,测定桔全爪螨对三氯杀螨醇、哒螨灵的抗药性.结果表明桔全爪螨对15%哒螨灵乳油未产生抗性,对20%三氯杀螨醇乳油达中抗水平,抗性倍数为23.87倍.     

25% JS7119乳油对桔全爪螨的生物活性和田间防效

测定25% JS7119 乳油对不同虫态桔全爪螨的生物活性和田间防效。活性测定结果表明,25% JS7119 乳油对桔全爪螨成虫的玻片浸渍法的致死中浓度(LC50)为115.921 7 mg/kg,大于对照药剂5%唑螨酯悬浮剂和15%哒螨灵乳油的致死中浓度;叶片浸渍法的LC50值 为0.639 4 mg/kg,大于15%哒螨灵乳油的LC50,小于5%唑螨酯悬浮剂的LC50。25% JS7119乳油对桔全爪螨若虫和卵的叶片浸渍法的LC50 值分别为4.478 3和644.391 7 mg/kg,均大于5%唑螨酯悬浮剂和15%哒螨灵乳油的LC50。田间防效测定结果表明,25% JS7119 乳油625倍液对桔全爪螨速效性较好,持效期15 d左右,与15%哒螨灵乳油1 500倍液的防效基本相当。     

桔全爪螨对三氟杀螨醇、哒螨灵的抗药性监测

采用玻片浸渍法，测定桔全爪螨对三氯杀螨醇、哒螨灵的抗药性。结果表明：桔全爪螨对15％哒螨灵乳油未产生抗性，对20％三氯杀螨醇乳油达中抗水平，抗性倍数为23．87倍。     

尼氏钝绥螨对桔全爪螨捕食作用的研究

桔全爪螨即柑桔红蜘蛛(Panonychus citri McG.),是柑桔产区重要害虫之一,在全国各省区均有发生。危害柑桔的叶片、果实、嫩枝,尤其是苗木、幼树受害极为严重,影响柑桔的生长发育。尼氏钝绥螨(Amblyseius nichoni Enava et Loe)主要以捕食桔全爪螨为生,是桔全爪螨的重要天敌,对桔全爪螨的发生起着一定程度的自然控制作用。 为了有效地利用尼氏钝绥螨对桔全爪螨的自然控制作用,本文就尼氏钝绥螨雌成螨对不同密度的桔全爪螨的卵、幼螨、若螨、成螨在不同温度下的捕食作用进行了探讨。用Holling圆盘方程作以初步摸拟,并研究其对猎物的连续捕食关系。     

农药的抗药性问题(二)

<正> 二、螨类的抗药性螨类和昆虫的药剂防治及其抗药性发生的机理等,既有很多的共性,同时又有它的特殊性。螨类发生抗性最早的报道,可能是1937年Compton等关于螨类对硒素剂发生抗性的事例。日本最早的报道是1958年柑桔红蜘蛛对八甲磷的抗性。我国在60年代初陆续报道了棉红蜘蛛、山楂红蜘蛛对有机磷,桔全爪螨对三氯杀螨砜的抗性。随着新杀螨剂的开发和广泛应用,国外有关螨类抗药性问题的报道愈来愈多,螨类的抗性问题,也成为生产上十分头痛的问题。 (一)螨类容易产生抗性的原因     

束管食螨瓢虫对猎物的选择反应

本文研究了束管食螨瓢虫 Stethorus chengi Sasaji 对桔全爪螨Panonychus citri McG.和桔始叶螨 Eotetranychus kankitus Ehara 各螨态以及若螨混合种群的选择捕食作用。结果表明,束管食螨瓢虫成虫喜吃两种猎物若螨;当两种若螨共存时,喜吃桔全爪螨。其喜好性与该种猎物的相对密度和总数有关。束管食螨瓢虫对两种猎物都有正转换行为,但对桔始叶螨的转换程度高于桔全爪螨。     

棉铃虫羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析

 【目的】克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础。【方法】制备抗血清,对棉铃虫(Helicoverpa armigera (Hübner))中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,得到编码棉铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆,利用生物信息学软件和网站进行序列分析,构建原核表达载体进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因hc3(GenBank登录号：GU119888)全长2 896 bp,编码795个氨基酸。羧酸酯酶HC3的等电点pI为3.94,活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体)：Ser204, Glu331, His444;第545—773位包含大量高度重复的Gly,Asp、Glu(GDE区域)构成亲水区。该基因在大肠杆菌BL21中成功表达约100 kD的HC3蛋白,检测表达的羧酸酯酶活性为0.32 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了棉铃虫羧酸酯酶蛋白HC3,并发现GDE亲水结构域。为进一步了解羧酸酯酶的三维结构及其水解作用并设计新型杀虫剂提供了可能。     

大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析

【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点（pI）为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族（EC: 3.1.1.-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。     

茶树品种对假眼小绿叶蝉抗药性相关酶活性及其分布的影响

测定了毛蟹、黄旦、铁观音、肉桂和福鼎大白茶5个茶树品种上假眼小绿叶蝉成虫3种抗药性相关酶系,即谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)、羧酸酯酶(CarE)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性及其分布.黄旦、福鼎大白茶上假眼小绿叶蝉成虫的GSTs和CarE活性较高、AChE敏感性较低,其他3个品种的GSTs和CarE活性较低、AChE敏感性较高;各种酶活性分布也存在一定程度的差异.说明茶树品种对假眼小绿叶蝉的个体分化及抗性的产生有影响.     

辛硫磷亚致死剂量对桑粉虱解毒酶活性的影响

【目的】研究辛硫磷对桑粉虱成虫的毒力及其亚致死剂量作用下桑粉虱成虫谷胱甘肽S-转移酶（GST）、羧酸酯酶（CarE）、乙酰胆碱酯酶（AchE）的活性变化,为桑粉虱抗药性研究及杀虫剂合理使用提供依据。【方法】采用闪烁管药膜法测定辛硫磷对桑粉虱亚致死剂量LC10、LC30、LC50,玻璃均浆器冰浴提取经过处理的桑粉虱酶液,用BIO-RAD全波长微孔板酶标读数仪测定GST、CarE、AchE。【结果】辛硫磷对桑粉虱成虫亚致死剂量LC10、LC30、LC50分别为0.0090、0.0899、0.4427μg/mL,随着辛硫磷亚致死剂量浓度增大,桑粉虱成虫GST活性显著增大、CarE及AchE活性显著下降。【结论】GST在桑粉虱对辛硫磷的解毒代谢中发挥作用。     

杀虫剂对桔全爪螨自然种群动态的影响

本文应用生命表方法研究了两种类型杀虫剂，即广谱性的拟除虫菊类杀虫剂速灭杀丁和具有一定选择性的杀虫（螨）剂尼索朗对桔全爪螨种群动态的影响。结果表明，大量杀伤天敌是使用广谱性杀虫剂导致桔全爪螨种群数量大发生的主要原因，使用对天敌作用较小的选择性杀虫剂，可达到控制桔全爪螨种群数量的效果。     

小菜蛾对杀螟丹抗药性的生化遗传研究

采用室内选育的小菜蛾对杀螟丹的抗性品系和敏感品系,研究了各杂交世代小菜蛾多功能氧化酶（ＭＦＯ）,乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）和羧酸酯酶活性。结果表明：（１）抗性品系（抗性提高３５．５倍）多功能氧化酶环氧化活性比敏感品系高（１．８３倍）,并随着杂交后代中对杀螟丹抗性水平的下降而降低;（２）抗药性品系和敏感品系的ＡｃｈＥ和ＣａｒＥ活性没有明显差异。     

不同品系昆虫病原线虫对大蜡螟羧酸酯酶活性的影响

对不同品系昆虫病原线虫对大蜡螟(Galleria mellonella)5龄幼虫处理12 h的羧酸酯酶活性进行研究。结果表明:在供试的5种品系线虫中,NC34处理的大蜡螟-αNA羧酸酯酶活力最高,是CK的2.047倍;其次是Otio品系的处理,为CK的1.965倍。-βNA羧酸酯酶活性以Otio处理的酶活力最高。由此可见,不同品系昆虫病原线虫对大蜡螟羧酸酯酶活性的影响存在着明显差异。     

小菜蛾对辛硫磷的抗性选育及其乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶活力变化

在室内模拟田间药剂的选择压力,用辛硫磷对小菜蛾（Plutella xylostella）逐代处理,以选育其抗性种群,并测定乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）和羧酸酯酶（carboxylesterase,CarE）的活性变化。选育至12代,对辛硫磷抗性增长到4.524倍。生化分析表明,抗性品系AChE和CarE活性均显著高于敏感品系。在抗性选育过程中,小菜蛾AChE酶活性增长迅速,其比活力由F0的0.035μmol/L·mg·min上升为F12的0.209μmol/L·mg·min;小菜蛾不同选育世代CarE酶活性差异显著,F12比活力增长到F0的12.944倍。     

不同寄主植物对小菜蛾羧酸酯酶活性的影响

取食６种不同十字花科植物的小菜蛾各龄幼虫之间，α－ＮＡ羧酸酯酸和β－ＮＡ羧酸酯酶活性显著不同，其中以取食花椰菜的小菜蛾幼虫羧酸酯酶的活性最高。取食不同寄主植物的小菜蛾幼虫羧酸酯酶活性高低顺序为：花椰菜＞西洋菜＞白菜＞菜心＞甘蓝＞萝卜。     

土壤理化性质对高效液相色谱法检测农药效果的影响

选取性质不同的3种有机磷农药(毒死蜱、3,5,6-TCP、氧化乐果)和理化性质差别较大的6种土壤(滨海风沙土、惜福镇棕壤、梨园半固定风沙土、莱阳褐土、棘洪滩潮土和莱阳棕壤),进行土壤中农药加标回收试验,计算加标回收率和多次测定结果的相对标准偏差,研究土壤理化性质对高效液相色谱检测有机农药效果的影响。结果表明,土壤理化性质对农药检测准确度和精密度的影响与农药加标量有关,总体上当农药加标量较高时,影响不明显,当加标量较低时,影响较大。农药的性质不同,土壤理化性质对农药检测效果的影响不同,其中疏水性强的有机农药,有机质对其检测效果的影响较大,而水溶性强的农药,其检测效果受阳离子交换量(CEC)的影响较大;农药在土壤中的形态受p H值影响越大,其检出效果受p H值的影响也越大;全氮、全钾、全磷对农药加标回收率的影响无明显的规律。总之,土壤理化性质对高效液相色谱法检测农药效果有较大影响,影响强度与农药性质、加标量等因素有关。