根结线虫不同虫态DNA提取及RAPD扩增研究

对提取的不同虫态根结线虫的ＤＮＡ作了比较 ,并进行ＲＡＰＤ分析 ,结果显示 :二龄幼虫最适宜ＤＮＡ提取 ,卵次之 ,雌成虫ＤＮＡ提取困难 ;ＲＡＰＤ结果不受虫态影响。表明ＲＡＰＤ技术用于根结线虫的分类鉴定有着良好的前景。根结线虫不同虫态DNA提取及RAPD扩增研究@王扬$云南农业大学!云南省植物病理重点实验室,昆明650201 @喻盛甫$云南农业大学!云南省植物病理重点实验室,昆明650201 @胡先奇$云南农业大学!云南省植物病理重点实验室,昆明650201     

辽宁省根结线虫发生种类与分布

为了明确辽宁省根结线虫种类及分布,从辽宁省8个市县区大型蔬菜生产基地的温室中以及露地上采集根结线虫样本82份,对雌虫、雄虫和二龄幼虫的形态学进行观察和测量,制作雌虫会阴花纹切片进行比较鉴定并且应用同工酶技术进行鉴定。结果表明,辽宁省根结线虫发生的种类为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、北方根结线虫(M.hapla)。其中南方根结线虫是危害辽宁省大棚蔬菜的优势种群,北方根结线虫是危害露地作物的优势种群。     

不同寄主上南方根结线虫的ISSR-PCR鉴别

以南方根结线虫雌虫DNA为基础,通过ISSR-PCR分子标记鉴别出寄生在黄瓜和番茄上的南方根结线虫。本试验中ISSR-PCR反应体系25μL,各因素的最佳浓度分别为:dNTPs 0.24 mmol/L、Mg2+2.1 mmol/L、Taq酶10.4 U、引物0.3μmol/L、DNA 140 ng。通过对50个ISSR引物的筛选,得到1个引物841,该引物能将寄生在不同寄主上的南方根结线虫加以鉴别。     

中国南方地区作物根结线虫种和小种的鉴定

对采自中国南方地区34种作物的根结线虫83个种群进行了单卵块纯化和培养，在形态学研究的基础上，结合利用全自动快速水平电泳系统测定了雌虫的酯酶和苹果酸脱氢酶，鉴定出南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)、花生根结线虫(M.arenaria)和番禺根结线虫(M.panyuensis)。其中南方根结线虫是最主要的根结线虫。鉴别寄主试验表明，南方根结线虫的优势小种是1号小种。     

浙江省蔬菜上2种根结线虫的形态学鉴定

2007-2009年期间,对浙江省不同地区蔬菜上根结线虫样本进行广泛采集、调查及种群形态学鉴定.根据雌虫会阴花纹、2龄幼虫和雄虫的相关测量值等主要形态学鉴定特征,鉴定出2种根结线虫:南方根结线虫(Meloidogyneincognita)和爪哇根结线虫(M.javanica),其中,南方根结线虫在浙江省为优势种群,分布广泛;爪哇根结线虫首次在温州发现.     

三七病原根结线虫的分子鉴定

利用设计合成的1对北方根结线虫（Meloidogyne hapla）特异性寡聚核苷酸引物Mh-F／Mh-R,以北方根结线虫、南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫全基因组DNA为对照,对采自云南文山、砚山、马关、蒙自等地区的三七根结线虫全基因组DNA进行PCR特异性扩增。结果表明,设计合成的引物能从北方根结线虫和供试的4个三七病原根结线虫全基因组DNA中扩增到462bp长度的分子片段,而南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫的全基因组DNA无扩增产物。表明4个地区的三七病原根结线虫种群均为北方根结线虫,该对引物可用于三七根结线虫的分子鉴定。     

野生樱桃李对北方根结线虫和花生根结线虫的抗性

为探明野生樱桃李抗根结线虫种质资源的价值,以实生钵苗为试材,采用人工接种等方法,研究其对北方根结线虫和花生根结线虫的抗性.结果表明:接种后30 d,野生樱桃李根系中北方根结线虫、花生根结线虫的雌成虫数量分别占2龄线虫接种量的0.16％和0.03％,依据抗性评价标准判定其高抗北方根结线虫和花生根结线虫;接种北方根结线虫的群体中包含免疫、高抗和中抗3种类型,分别占群体总数的46％、48％和6％;接种花生根结线虫的包含免疫和高抗2种类型,分别占群体总数的56％和44％;接种北方根结线虫和花生根结线虫的植株未被侵染率分别为46％和52％,所有供试植株根系表面均未发现线虫卵块.野生樱桃李高抗北方根结线虫和花生根结线虫,其对北方根结线虫、花生根结线虫的抗性均存在显著的株间分离现象;抗侵入、抗发育和抗繁殖是其对北方根结线虫和花生根结线虫的主要抗性机制;野生樱桃李是抗根结线虫核果类果树砧木种质资源树种.     

萨克拉普奇尼亚菌串孢变种对南方根结线虫卵和雌虫的致病性

根结线虫卵和雌虫的寄生真菌对根结线虫病害生物防治具有很大应用潜力。本项研究采用分离自北方根结线虫卵的萨克拉普奇尼亚菌串孢变种Pochonia suchlasporia var.catenata CFCC84965,测定其对南方根结线虫卵和雌虫的致病性。被寄生的卵内充满菌丝且胚胎破坏,胚前发育期的卵对菌丝的侵染敏感,即将孵化出2龄幼虫的卵很少被寄生。菌丝环绕于被寄生卵周围形成致密菌网和侵染钉,卵壳皱缩和凹陷,有时可见到菌丝上形成瓶梗细胞和分生孢子;卵胚胎发育停止和幼虫发育畸形,卵内容物聚集变态,卵壳破裂,内容物外渗。萨克拉普奇尼亚菌串孢变种CFCC84965对卵的寄生率为65.18%。该菌对南方根结线虫雌虫具有致病性,菌丝接触雌虫体壁形成侵染钉,穿透体壁,虫体皱缩变形。该菌对根结线虫雌虫的寄生致病是首次报道。     

东北山樱桃对三种主要根结线虫的抗性评价

为评价东北山樱桃抗根结线虫种质资源价值,以实生钵苗为试材,采用人工接种等方法,研究了其对南方根结线虫,北方根结线虫和花生根结线虫的抗性。结果表明:接种后30d,南方根结线虫的侵入率为0.40%,根内雌成虫数量占接种总量的0.16%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗南方根结线虫;北方根结线虫的侵入率为1.20%,根内雌成虫数量占接种总量的0.80%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗北方根结线虫;花生根结线虫的侵入率为0.82%,根内雌成虫数量占接种总量的0.60%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗花生根结线虫。其对3种根结线虫的抗性均存在显著的株间分离现象,均分离为免疫、高度抗病、中度抗病3种类型,对南方根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的16.0%、80.0%和4.0%;对北方根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的2.0%、68.0%和30.0%;对花生根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的6.0%、78.0%和16.0%,东北山樱桃是优异的抗南方、北方和花生根结线虫砧木和种质资源。     

海南省番石榴病原根结线虫种类鉴定

运用形态学方法,结合同工酶电泳和线粒体DNA标记技术,对采白海南省10市县的28个番石榴根结线虫种群进行鉴定,明确了25个种群为湛江根结线虫Meloidogyne zhanfiangensis、2个种群为番禺根结线虫M.panyuensis1个种群为南方根结线虫M．incognita,湛江根结线虫是危害海南省番石榴的优势种群．文中对根结线虫的鉴定技术与方法作了讨论．     

寄生台湾长果桑的根结线虫种类鉴定

在福建一果桑园发现台湾长果桑受根结线虫的侵染,表现为:根部有明显根结,根结组织内可见雌虫,卵囊产于根结内。运用形态学及特异引物PCR扩增的方法对分离获得的根结线虫进行种类鉴定,确定该根结线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。台湾长果桑根结线虫病在我国大陆为首次报道。     

浙江省茶苗根结线虫种类鉴定初报

作者自1980年4月至1982年6月分别从浙江省杭州、金华、余杭、富阳、绍兴、镇海、椒江、乐清、衢州、松阳等10县(市)采集到茶苗根结线虫病(Meloidogyne.spp)病株和病苗样本共50号。根据雌虫的会阴花纹特征和雄虫头部、口针的形态学,初步鉴定病原线虫为下列4个种:花生根结线虫(M.arenaria)、南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)及泰晤士根结线虫(M.thamesi)。其中以花生根结线虫和南方根结线虫出现的频率较高。     

毛樱桃对花生根结线虫的抗性研究

以实生钵苗为试材,采用人工接种、根系次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了毛樱桃对花生根结线虫的抗性。结果表明:花生根结线虫的接种侵入率1.4%,根中雌成虫数量占接种量的0.3%,依据有无根结和雌成虫数量占接种线虫数量的百分比判定其高抗花生根结线虫;毛樱桃实生群体对花生根结线虫的抗性具有显著的株间分离现象,存在免疫、高抗和中抗3种抗性类型,3种抗性类型个体分别占群体总量的5.0%、86.7%和8.3%。毛樱桃对花生根结线虫具有极强的抗侵入与抗发育能力,是优异的抗花生根结线虫桃树砧木种质资源。     

蒙古扁桃对北方根结线虫的抗性鉴定

为了解蒙古扁桃对北方根结线虫的抗性,以实生苗为试材,采用人工接种、根系经次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了其对北方根结线虫的抗性。结果表明：蒙古扁桃的根结指数为20.67,接种侵入率1.6%,根中雌成虫数量占接种量的0.19%,依据有无根结和根中雌成虫数量占接种线虫数量的百分比标准判定为高抗北方根结线虫;蒙古扁桃实生群体对北方根结线虫的抗性表现出显著的分离现象,免疫、高抗和中抗3种基因型分别占23.3%,63.4%和13.3%。蒙古扁桃对北方根结线虫具有极强的抗侵染能力和很强的抗发育能力,是极优异的抗北方根结线虫种质资源。     

黄瓜内生真菌对根结线虫生防活性测定

为了明确黄瓜根结内生真菌对根结线虫(Meloidogyne incognita)的防效,采用菌株发酵液对根结线虫进行离体活性和盆栽防效测定,结果表明,菌株经形态和18S r DNA鉴定为Plectosphaerella sp.,其发酵液对根结线虫处理48 h的致死活性为93.73%;盆栽试验表明,Plectosphaerella sp.对根结线虫的防效为56.1%。发酵液处理的黄瓜根系卵块数量少于对照,土壤中根结线虫2龄幼虫数量也少于对照。总体来看,Plectosphaerella sp.对根结线虫具有较高的生防活性,能为黄瓜根结线虫生物防治奠定基础。     

毛桃对北方根结线虫的抗性研究

以实生钵苗为试材,采用人工接种、根系次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了毛桃对北方根结线虫的抗性。结果表明:毛桃的根结指数为24.67,接种侵入率2.6%,根中雌成虫数量占接种量的0.16%,依据有无根结和雌成虫数量占接种线虫数量的百分比标准判定其高抗北方根结线虫;毛桃实生群体对北方根结线虫的抗性具有显著的株间分离现象,免疫、高抗和中抗3种基因型个体分别占13.3%、80%和6.7%。毛桃对北方根结线虫具有极强的抗侵入与抗发育能力,是极优异的抗北方根结线虫桃树砧木树种和种质资源。     

榆中县黄瓜根结线虫鉴定及根系定殖效果测定

为了明确甘肃榆中县温室大棚黄瓜根结线虫种类及根际定殖情况,采用形态和分子生物学鉴定其种类,并室内测定和显微观察其在根际定殖效果。结果表明,甘肃榆中县黄瓜根结线虫不同虫态形态、大小和雌虫会阴花纹特征等均具有典型南方根结线虫(Meloidogyne incognita)形态特征。基于线粒体COI基因序列比对和构建系统发育树,鉴定发现榆中县黄瓜根结线虫线粒体COI基因序列与已报道的南方根结线虫台湾株系(KU517167)聚为一类,其相似性为99.75%;根结线虫多序列特异位点鉴定发现其与南方根结线虫孟加拉国株系(MN196556)和南方根结线虫印度株系(MN728697)聚为一类,相似性分别为100%和96.91%。经致病性测定发现,待接种根结线虫2龄幼虫30 d后其能够侵染黄瓜根系并形成大量根结,经染色发现黄瓜幼苗根系组织内寄生大量线形蠕虫、雌虫和卵囊,且镜检观察发现其形态与田间采集后分离的线虫形态一致。综上可知,引起甘肃省榆中县黄瓜根结线虫病的病原为南方根结线虫。     

云南省部分烟区根结线虫形态和分子鉴定

[目的]明确当前云南省部分烟草种植区根结线虫的种类和分布,为烟草根结线虫病综合防治及烟草品种布局提供理论依据.[方法]2015年8~10月,在云南省主要烟草种植区昆明、曲靖和玉溪市采集54份烟草根结线虫病根样本,采用雌成虫会阴花纹形态观察及分子生物学检测(rDNA-ITS区和SCAR特异性鉴定)对病原根结线虫种类进行鉴定.[结果]采集的54份样本中有24份样本的病原为花生根结线虫(Meloidogynearenaria),占44.44%;7份样本为南方根结线虫(M.incognita),占12.96%;1份样本为爪哇根结线虫(M.javanica),占1.85%;11份样本为爪哇根结线虫和花生根结线虫的复合种群,占20.37%;5份样本为南方根结线虫和花生根结线虫的复合种群,占9.26%;3份样本为南方根结线虫和爪哇根结线虫的复合种群,占5.56%;3份样本为南方根结线虫、爪哇根结线虫和花生根结线虫3种线虫的复合种群,占5.56%.[结论]当前危害云南省部分烟草种植区(昆明、曲靖和玉溪烟区)的根结线虫种类主要有南方根结线虫、爪哇根结线虫和花生根结线虫3种,以花生根结线虫为优势种群.     

野生樱桃李对南方根结线虫的抗性

为探明野生樱桃李对南方根结线虫的抗性,以实生钵苗为试材,采用人工接种等方法,研究了野生樱桃李对南方根结线虫的抗性。结果表明：接种后30d,根中雌成虫数量占接种量的0.5%,依据抗性评价标准判定其高抗南方根结线虫;野生樱桃李对南方根结线虫的抗性存在显著的株间分离现象,表现为免疫、高抗、中抗和低抗4种类型,分别占群体总量的30.0%、52.5%、13.8%和3.8%;根内线虫数量为接种量的1.7%,雌成虫数量占根内线虫总数的29.4%,表明野生樱桃李对南方根结线虫具有极强的抗侵入作用和很强的抗发育作用,抗侵入是野生樱桃李对南方根结线虫的主要抗性机制。野生樱桃李是优异的抗南方根结线虫种质资源。     

陕西省温室蔬菜根结线虫的种类鉴定

为了明确陕西省温室蔬菜根结线虫的种类,为有效防治奠定基础。采用传统的会阴花纹形态鉴定结合线粒体DNA分子标记技术,对采自陕西省7个市县的71份根结线虫样本进行了鉴定。结果表明,危害陕西省温室蔬菜的根结线虫种类为南方根结线虫M.incognita、爪哇根结线虫M.javanica、花生根结线虫M.arenaria,其中南方根结线虫是危害陕西大棚蔬菜的优势种群。同时,研究发现大多数地区为单一种群,但个别地区存在混合侵染现象。因此在防治时,应当以南文根线虫为对象,同时也应考虑到混合浸染的因素。