高粱根质膜的纯化和膜蛋白的提取

利用高粱根作为实验材料,用不连续蔗糖密度梯度和Dextran T-500/PEG-3350两相法探讨了纯化质膜的过程,以及去垢剂对K+运输蛋白的增溶效率.结果表明,由6 mL 40%(W/W),4 mL 34%(W/W)和4 mL 22%(W/W)蔗糖组成的不连续蔗糖梯度,经80 000×g离心3 h后,在34%～40%界面处富含质膜.在质膜K+运输蛋白的增溶效果上,6.5 mmol/L CHAPS最为理想.     

水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析

采用双水相分配法和离心法对水稻叶片的细胞质膜进行了纯化.选用聚合物Dextran T 500/PEG 3350质量分数分别为6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%的双水相体系,对3次分配后的细胞质膜纯化效果进行了研究,并进行了细胞质膜标志酶H+-ATPase的活性测定、柠檬酸铅-醋酸铀双染色及电镜检测.结果表明:聚合物质量分数为6.3%的双水相体系可以获得高纯度的质膜微囊,且随分配次数的增加,可以有效减少其他内膜的污染,其质膜标志酶VO34--ATPase的相对活性高达93.5%.粗质膜经过3次两相分配后的蛋白质产率为2.73%.非离子型去垢剂Brij 58对质膜H+-ATPase的活性变化影响结果表明,纯化的质膜微囊封闭性较好,主要为正向型质膜微囊.质膜蛋白质经增溶缓冲液溶解及1-D SDS-PAGE的结果表明,纯化后的质膜有效减少了特定蛋白质条带的丰度,使蛋白质条带的分布更为均匀.双向电泳结果表明,纯化后的质膜双向电脉图谱具有低背景、高分辨率和重复性的优点,为进一步的水稻质膜蛋白质组研究提供了可靠的试验材料.     

水稻Rubisco活化酶的提取和纯化

利用３５％饱和硫酸铵分部沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＭｏｎｏＱ柱层析等步骤从水稻叶片纯化了Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示水稻Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶由４５ｋＤ和ｋＤ两个亚基组成,ＡＴＰ是该酶活化Ｒｕｂｉｓｃｏ的必需成分。     

水稻Rubisco活化酶的提取和纯化

利用３５％饱和硫酸铵分部沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ和ＭｏｎｏＱ柱层析等步骤从水稻叶片纯化了 Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶。 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示水稻Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶由４５ｋＤ和４１ ｋＤ两个亚基组成。 ＡＴＰ是该 酶活化Ｒｕｂｉｓｃｏ的必需成份。     

两相分配法纯化受旱小麦绿色组织质膜的研究

通过研究氯化钠和多聚物浓度对质膜和各种内膜在PEG/Dextran两相系统中分配行为的影响,根据其影响膜在两相系统中分配系数的试验结果,应用两相分配纯化法,纯化生长正常和受旱条件下小麦绿色组织质膜,对匀浆介质稍加修改,加入5mmol/L ZnCl_2,结果在较短的时间得到了两种小麦绿色组织细胞质膜的富集组分。     

两相分配法纯化受旱小麦绿色组织质膜的研究

通过研究氯化钠和多聚物浓度对质膜和各种内膜在PEG／Dextran两相系统中分配行为的影响，根据其影响膜在两相系统中分配系数的试验结果，应用两相分配纯化法，纯化生长正常和受旱条件下小麦绿色组织质膜，对匀浆介质稍加修改，加入5mmol/L ZnCl2，结果在较短的时间得到了两种小麦绿色组织细胞质膜的富集组分。     

紫杉醇的提取与纯化技术探析

紫杉醇是从红豆杉科红豆杉属植物分离出来的一种具有独特抗肿瘤机理的二萜类化合物,目前仅能采自于红豆杉属植物中,提取和分离纯化技术是获得紫杉醇所必须的技术手段。紫杉醇的提取方法有液液萃取法、固相萃取法、超临界流体萃取法、柱切换技术、层析法。通常获得高纯度的的紫杉醇纯化处理方法有碱性氧化铝作柱层析、反相层析法、色谱法、细胞生物学法。     

柰基因组DNA的提取与纯化

以榇嫩芽为材料．对Dellaporta等用CTAB制备植物基因组DNA的方法进行改良，结果表明，加入质量分数ω=10％PVPP与材料充分研磨，将提取缓冲液的β-巯基乙醇体积分数降低为1％，能有效地去除材料中的多酚类物质；用氯仿／异戊醇(24：1)抽提裂解液2次所获得的上相．加入1／10体积的65℃的NaCl／CTAB溶液混匀，再用氯仿／异戊醇(24：1)连续抽提2次，并在DNA粗提液中加入适量高浓度NaCl和无水乙醇沉淀DNA，可以有效地去除多糖的干扰．获得比较纯净的DNA样品；PCR特异性扩增的结果表明，以改良法的DNA为模板可获得PPO基因保守区约600～800bp特异条带．且扩增条带较亮、无引物二聚体出现。     

茶多酚提取与分离纯化研究进展

综述了有关茶多酚提取及儿茶素的单体分离纯化技术研究的最新进展,对茶多酚提取及分离纯化技术方法简要介绍,并探讨此研究领域的技术发展前景。     

太湖蓝藻藻蓝蛋白的提取及纯化

为利用太湖打捞蓝藻的蛋白质资源,采用冻融破壁、絮凝、盐析、透析、双水相萃取等方法制备荧光试剂级藻蓝蛋白。研究结果表明,以水为介质冻融2次破壁,将冻融藻浆中蓝藻干物质调节为0.95%,用浓度为7.5g/L的聚合氯化铝絮凝初分离,所得藻蓝蛋白纯度(A6 20/A280)为0.31;采用20%、50%饱和度的硫酸铵两步盐析可将其纯度(A620/A280)提高至2.29;盐析后藻蓝蛋白经100 000的透析袋透析,再以140 g/L的聚乙二醇(分子量2 000)和140 g/L的磷酸钾盐萃取纯化,最终纯度(A620/A280)高达4.60,达到荧光试剂级要求。     

水稻OsRFP1基因的原核表达与蛋白纯化

以推导的氨基酸序列分析,水稻OsRFP1基因编码一分子量为34.24kDa锌指蛋白。将OsRFP1基因编码区cDNA序列插入到pGEX4T-3载体中构建OsRFP1-gst融合基因的表达载体,并将质粒转化宿主菌大肠杆菌BL21DE3。经IPTG诱导,融合蛋白在BL21DE3细胞中获得表达。利用亲和层析的方法对融合蛋白进行了纯化,SDS-PAGE蛋白电泳显示获得一60kDa的唯一蛋白条带,即OsRFP1-GST融合蛋白。     

茶黄素的提取分离与纯化研究进展

综述了国内外茶黄素的提取和分离纯化方法的研究成果和研究现状，并分析评价了柱层析法和高速逆流色谱法的优缺点，认为两者结合是理想的分离纯化工艺。     

海参多糖的提取与纯化研究

[目的]研究海参多糖的提取与纯化工艺。[方法]以大连产刺参为研究对象,采用碱提取法对海参多糖进行提取和纯化。[结果]海参多糖的最佳提取工艺为:KOH浓度为3%,料液比1∶50,提取时间为4 h,提取温度为60℃。在此工艺条件下,多糖提取率为20.69%,适于提取海参多糖。采用过氧化氢脱色和醋酸钾沉淀法去除蛋白,海参多糖的最终得率为7.96%,纯度为82.39%。[结论]该研究为刺参多糖的提取、纯化及其他相关研究提供参考。     

柰嫩芽总RNA的提取与纯化

以嫩芽为材料，对Trizol法进行改进提取总RNA，试验结果表明，加入10％PVPP与材料共研磨，并在Trizol提取液中加入1％β-巯基乙醇，可以完全排除酚类物质、色素等杂质的干扰；采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖、在裂解液抽提的上相中加入终浓度为3mol／L LiCl沉淀RNA、在RNA的粗提液中加入适量的3mol／LNaAc(pH5．2)和低浓度的无水乙醇沉淀多糖等方法相结合，可以有效地去除多糖的干扰，获得纯净、完整的RNA样品，用它为模板进行RT-PCR反应，获得PPO基因保守区约600～800bp的cDNA条带；而单独采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖的方法，不能将样品中的多糖去除干净，这些残留的多糖会抑制逆转录酶的活性，导致逆转录反应的失败。     

油菜花粉黄酮的提取与纯化

对油菜花粉黄酮的提取与纯化工艺进行了系统的研究.结果表明,在95℃水浴条件下,按1∶35的固液比加入95%乙醇提取2 h为最佳,破壁花粉黄酮得率3.167%,较未破壁花粉提高了50.6%;8种大孔树脂中DM-130型树脂为纯化的最适树脂,在最佳上样量16.78 mg,并用最佳洗脱液50 mL 50%乙醇洗脱的情况下,产品黄酮纯度达到60.5%.     

梨叶片总蛋白提取及双向电泳体系的建立

【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDSPAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1 h,选用长17 cm、pH 4～7的IPG 胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100 V 30 min、180 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。     

菊苣菊粉提取与纯化研究

以普那菊苣为原料,对菊苣菊粉提取、纯化工艺进行了优化研究。结果表明,菊粉提取的最佳工艺条件为:原料为粉状,温度85℃,固液比为1∶30,提取时间为60 m in,菊粉的提取率达58.58%。纯化时石灰乳脱蛋白的最佳处理温度为70~80℃。提取液最佳脱色工艺条件为:脱色温度70℃,脱色时间50 m in,活性碳用量为20 g/L,脱色率为69.13%,菊粉损失率为7.93%。     

海带中褐藻糖胶的提取与纯化

目前 ,海带工业的综合利用除了提取褐藻酸钠、碘及少量的甘露醇外 ,很少涉及褐藻糖胶的利用 ,而褐藻糖胶存在于提取液的废液中。文献报道褐藻糖胶具有抗凝血、澄清血脂、降低胆固醇和抑杀癌细胞等作用[1,2 ] 。本文对采自浙江象山台下礁海港海带的提取和纯化作了比较研究 ,从而为如何更好地利用我国的海带资源提供依据。1　材料与方法1 .1　原料海带 (ＬａｍｉｎａｒｉａＪａｐｏｎｉｃａ) ,1 998年 5月 2 8日采于浙江象山台下礁海港 ,烘干 ,粉碎。1 .2　褐藻糖胶的提取方法海带藻粉→热水浸提→离心→取上清液 ,滤渣同样条件再提取 1次→合…     

海带中褐藻糖胶的提取与纯化

目前 ,海带工业的综合利用除了提取褐藻酸钠、碘及少量的甘露醇外 ,很少涉及褐藻糖胶的利用 ,而褐藻糖胶存在于提取液的废液中。文献报道褐藻糖胶具有抗凝血、澄清血脂、降低胆固醇和抑杀癌细胞等作用[1,2 ] 。本文对采自浙江象山台下礁海港海带的提取和纯化作了比较研究 ,从而为如何更好地利用我国的海带资源提供依据。1　材料与方法1 .1　原料海带 (ＬａｍｉｎａｒｉａＪａｐｏｎｉｃａ) ,1 998年 5月 2 8日采于浙江象山台下礁海港 ,烘干 ,粉碎。1 .2　褐藻糖胶的提取方法海带藻粉→热水浸提→离心→取上清液 ,滤渣同样条件再提取 1次→合…