坛紫菜分离蛋白的提取与结构解析

为探究不同饱和度硫酸铵在坛紫菜Porphyra haitanensis蛋白分离过程中对蛋白结构特征和抗氧化活性的影响,采用梯度饱和度(10%～60%)硫酸铵沉淀法从坛紫菜粗提液(crude extract of Porphyra haitanensis,CEPh)中制备分离蛋白,对分离蛋白的理化性质、结构和光谱特性等进行测定,并比较了分离蛋白的抗氧化活性差异。结果表明：超声波辅助磷酸盐缓冲液法的蛋白提取率最高,为55.28%;用硫酸铵对坛紫菜粗提液进行梯度分离,蛋白主要在40%～60%饱和度下沉出;紫外吸收光谱显示,当硫酸铵饱和度为30%～50%时,藻胆蛋白大量沉出;红外光谱显示,当硫酸铵饱和度超过50%时,773、1 155 cm^-1处出现了2个非蛋白吸收峰;圆二色光谱显示,坛紫菜蛋白以α-螺旋结构为主,其中,分离蛋白40%-PhPI的结构最为有序;SDS-PAGE凝胶电泳显示,低饱和度(10%～30%)硫酸铵会显著增加相对分子质量为55 000、20 000和18 000的蛋白析出;抗氧化活性试验显示,不同饱和度硫酸铵提取获得的坛紫菜分离蛋白均具有一定的抗氧化...     

螺旋藻富铬及其含铬蛋白组份对α-葡萄糖苷酶抑制的研究

在富铬Z氏培养液的条件下,研究了钝项螺旋藻对Cr(Ⅲ)的吸收及其有机化程度,采用不同饱和度硫酸铵沉淀的方法分离提取不同蛋白组份,对其含Cr(Ⅲ)量进行了分析,并探讨了蛋白组份对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.结果表明,螺旋藻培养液中CrC13·6H2O添加浓度为300mg·L-1,螺旋藻总铬富集量可达到3.30mg·g-1,有机化程度为70.2％;不同饱和度(25％、50％和75％)硫酸铵沉淀出的蛋白组份中铬占总铬的情况分别为2.1％、16.8％和7.0％,不同蛋白质结合铬的能力各异;3种蛋白组份对α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,其中50％饱和度硫酸铵沉淀的蛋白组份抑制活性最高,IC50为69.87mg·mL-1.     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离提取研究

为了研究鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离提取工艺,采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离卵转铁蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度。鸡蛋清原液用Tris-HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6h以上,采用50%~80%硫酸铵分级沉淀和Q-Sepharose FF离子交换层析分离卵转铁蛋白。结果显示,分离提取的卵转铁蛋白纯度达到96%,回收率为88.63%,且其具有生物活性,对大肠杆菌的抑菌率为48.84%。表明采用硫酸铵分级沉淀和Q-Sepharose FF离子交换层析法分离鸡蛋清中卵转铁蛋白可行。     

嗜热脂肪芽孢杆菌中普鲁兰酶的分离纯化

嗜热脂肪芽孢杆菌经细胞破碎机破壁后,采用硫酸铵盐析法除杂蛋白,DEAE-32阴离子交换纤维素纯化胞内普鲁兰酶,并通过L9(34)正交试验优化盐析除杂蛋白工艺条件.结果表明:菌体与缓冲液比1:3、硫酸铵饱和度40％、pH值7.0分离效果最佳,其中,pH值对分离效果的影响差异性显著(F＞F0.05);纯化后的普鲁兰酶比活力...     

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺.采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离3种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度.结果显示,层析纯化后SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2 235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76％;卵转铁蛋白抑菌率为48.84％.该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产.     

蜗牛酶中纤维素酶的分级分离

[目的]探索用分级沉淀方法去除蜗牛酶中非纤维素酶的效果。[方法]向粗酶液中加入硫酸铵,使溶液中的硫酸铵从10％饱和度以10％为梯度逐渐递增到100％的饱和度,用考马斯亮蓝法测定蛋白含量,DNS法测定纤维素酶活力。[结果]硫酸铵饱和度达到40％时原酶液中的大部分非纤维素酶杂蛋白开始沉淀,但此时所得沉淀的比活力最低;在50％饱和度下分离出的沉淀中纤维素酶的活力最高,在50％及之后的几个饱和度时,分离出了较多的纤维素酶蛋白,表明硫酸铵分级沉淀蜗牛酶可以显著提高其中纤维素酶的活力。[结论]用50％的饱和度分级沉淀蜗牛酶中的纤维素酶最合理。     

鸡蛋清中溶菌酶的分离提取

采用二次硫酸铵沉淀和离子交换层析透过法分离溶菌酶,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS\|PAGE）检测其纯度,研究鸡蛋清中溶菌酶的分离提取工艺。鸡蛋清原液用Tris\|HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6 h,经50%硫酸铵沉淀后收集上清,再经80%硫酸铵收集沉淀后溶于pH 90的Tris\|HCl后经Q\|Sepharose FF阴离子交换层析直接在透过液中一步就可分离得到SDS\|PAGE电泳纯的溶菌酶,酶比活由14413 U·mg-1提高到2 235 U·mg-1,酶活提高超过15倍,回收率为1576%。通过硫酸铵两级沉淀后只需收集Q\|Sepharose FF阴离子交换层析的透过液即可分离得到溶菌酶,同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白,简化了工艺,降低了生产成本。     

香蕉枯萎病内生生防菌H4-3抑菌蛋白提取及抑菌活性研究

铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa H4-3菌株是福建省农科院农业生物资源研究所微生物研究中心从香蕉植株中分离到的一株内生菌,该菌株对香蕉枯萎病病原菌具有很强的抑菌活性,初步判断其活性物质为大分子蛋白.采用硫酸铵沉淀方法提取H4-3菌株的抑菌蛋白,研究不同硫酸铵浓度对H4-3菌株抑菌活性的影响,结果表明：随着硫酸铵浓度的提高,H4-3菌株抑菌蛋白粗提液的抑菌活性逐步提高,其盐析后的上清液抑菌活性则逐步降低,70％饱和度的硫酸铵处理即可完全沉淀.     

大蒜SOD酶的分离纯化和肝素修饰

采用热变性法、盐析法与有机溶剂提取法进行分离纯化,建立了一套适合大蒜SOD酶分离纯化的工艺流程:大蒜SOD酶提取液经70℃加热20 min,取上清在4℃条件下先使硫酸铵的饱和度达到40%;除杂后调整硫酸铵饱和度达到80%,取沉淀透析;透析液经纤维素层析,NaCl醋酸缓冲液梯度洗脱,收集第3个蛋白峰.针对天然SOD酶的不...     

桃褐腐病菌激活蛋白对植物的促生作用研究

为了解桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)激活蛋白对植物的促生作用,采用硫酸铵沉淀法对桃褐腐病菌的总蛋白进行了粗分离,并分析了各组分对小麦和小白菜种子发芽和生长的影响。结果表明,硫酸铵饱和度为60%时,桃褐腐病菌蛋白质量浓度最高,可达1 403.0μg/mL。在各种分离到的蛋白组分中,饱和度为40%、50%、60%的硫酸铵盐析得到的蛋白组分对小麦和小白菜种子的发芽和生长具有促进作用,说明这些组分中含有能促进小麦和小白菜生长的激活蛋白。     

响应面法优化提纯牛肉肌红蛋白

以牛背肌肉为原料,筛选Tris-HCl复合提取液pH、提取液浓度、提取时间、料液比、硫酸铵溶液饱和度等对肌红蛋白提取有影响的因素,并从中选出具有显著影响的因素(提取液pH、提取液浓度、硫酸铵溶液饱和度)进行响应面优化试验,确定牛肉肌红蛋白提取最优工艺参数提取液pH为8.15、硫酸铵溶液饱和度90.93%、提取时间1.63 h。对粗提蛋白进行纯化及层析交换分离,得到纯度较高的肌红蛋白含量2.14 mg/mL,总蛋白浓度2.39 mg/mL,样品纯度达到91.95%。     

2步盐析法纯化螺旋藻中藻蓝蛋白

为了提高藻蓝蛋白的纯度,研究采用两步盐析法(1步除杂,2步沉淀)对螺旋藻中的藻蓝蛋白的纯化方法进行考察。从盐析时间、硫酸铵饱和度和p H 3个因素考察,对两步盐析工艺进行优化。结果表明,除杂最优工艺为:硫酸铵饱和度20%,p H为6. 8,盐析时间20 min,沉淀最优工艺为:硫酸铵饱和度40%,p H6. 8,盐析时间15 min,最终得到纯度为2. 77的藻蓝蛋白。     

转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索

为了对玉米中表达的植酸酶蛋白的酶学性质进行深入研究,以转基因玉米籽粒中提取的植酸酶粗提液为研究材料,探索了植酸酶和总蛋白的溶解度与硫酸铵饱和度之间的关系,结果显示在0~60%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶仅占初提液中总植酸酶含量的1.85%,而在此范围内沉淀的总蛋白却占初提液的总蛋白含量的57%,植酸酶比活为0.44 U/mg;在60%～80%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶和总蛋白分别占初提液中各自含量的58%和10%,植酸酶比活为84.4 U/mg;在80%～90%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶收率占初提液中含量的1.9%。因此选用60%～80%硫酸铵饱和度分级沉淀植酸酶,在此条件得到的植酸酶比活比粗提液的植酸酶比活（13.8 U/mg）高6.1倍。     

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

[目的]研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺。[方法]采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离三种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测其纯度。[结果]层析纯化后 SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76%;卵转铁蛋白抑菌率为48.84%。[结论]该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白,工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产。     

不同方法提纯鸡减蛋综合征病毒的比较

通过相关系数的计算与显著性检验,结合病毒蛋白浓度的大小,同时进行电镜观察,证实了由鸭胚增殖的ＥＤＳ病毒采用６０％饱和度的硫酸铵或１０％聚乙二醇（ＭＷ６０００）深沉法初提后,再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析法提纯的效果优于ＤＥＡＥ５２纤维素色谱法。     

枯草芽孢杆菌QM3抗真菌蛋白的稳定性

枯草芽孢杆菌QM3是从青海牦牛粪中分离筛选出的1株对植物病原真菌高效拮抗菌株,为了开发和应用QM3菌株,本研究探讨了QM3抗真菌蛋白的稳定性.采用硫酸铵盐析、SDS-PAGE凝胶电泳从其发酵液中分离抗真菌蛋白,并采用对峙生长法分析了该蛋白的稳定性.结果显示:60%饱和硫酸铵盐析得到的蛋白具有较好的抑菌活性,其分子量约为...     

鸡血液中乙酰胆碱酯酶的提取研究

[目的]为了研究硫酸铵盐析法在乙酰胆碱酯酶分离纯化中的效果,从而利用乙酰胆碱酯酶的活性变化反映农药的污染情况。[方法]采用硫酸铵盐析和等电点区分的方法从鸡血中提取乙酰胆碱酯酶,并探讨其适宜的pH值范围。[结果]结果表明:pH值4.5左右大量的杂蛋白能被除去,可获得较高乙酰胆碱酯酶得率;采用饱和度为50%~60%的硫酸铵盐析效果较好,据此得出较佳的提取工艺。[结论]该研究结果为后续鸡血AChE的提取、分离、纯化等工作提供了相应的参考,同时为利用乙酰胆碱酯酶指示环境受有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的后续研究和应用提供了理论依据。     

用柱层析法检测中国龙虾主要变应原的研究

为分离、纯化和鉴定中国龙虾的主要变应原,采用硫酸铵沉淀法和等电点沉淀法对变应原粗浸液进行初分,在蛋白核酸检测仪检测控制下,用DEAE-52离子交换层析柱进行阶段洗脱和葡聚糖凝胶G-100柱层析,斑点ELISA确定其免疫活性.结果表明:中国龙虾变应原蛋白的硫酸铵沉淀范围在35％～60％之间,pH等于4.7、4.5时的等电点沉淀蛋白质有明显的变应原活性;离子交换层析中具变应原活性蛋白质峰含分子质量为15000、20 700、34 000、60 000、83 200 u的蛋白质;葡聚糖凝胶G-100层析后具变应原活性蛋白峰SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示只有34000 u相对分子质量的蛋白条带,纯度为91.5％.本试验分离、纯化鉴定出中国龙虾相对分子质量为34000 u的主要变应原,对于变应原的标准化、提高食物变态反应性疾病诊断和治疗水平具重要意义.     

乳清中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白分离制备技术研究

本研究采用不同分离方法对牛乳乳清中的主要成分α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行逐级分离纯化。利用两步硫酸铵沉淀法对乳清蛋白进行初级分离,使蛋白含量提高了4倍;响应面法优化PEG1500/硫酸铵双水相萃取系统的最佳工艺参数,萃取后蛋白组分被进一步纯化,蛋白浓度提高到815.6 mg/g,达到浓缩主要蛋白的目的;萃取蛋白经Sephadex G-75和DEAE离子交换层析后,所获得的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白样品纯度达到85%。     

影响细菌胞外蛋白酶(ECPase)产生与获得因素的研究

以底物法检测嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的活性，通过培养基的改良、细菌的最适培养时间及最适硫酸铵饱和度的确定，从而找到了经济实惠的蔗糖胰蛋白胨培养基，细菌的最适培养时间为45～48h；最适硫酸铵饱和度为70％．