实验兔线粒体DNA多态性研究

用ＥＣＯＲＩ，ＥＣＯＲＶ，ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＰｔｕＩ，ＳｍａＩ，Ｘｂｏｌ，ＣｌａＩ，ＳａｃＩ，ＢｇｌⅡ等１１种酶，用ｍｔＤＮＡ限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术，分析了国内几个省区的实验用兔ｍｋＤＮＡ多态性。结果表明，在研究的６４个个体中，共检出１５种限制性态型，归结为４种不同的限制性类型，限制性类型的差异主要来源于少数几个限制 位点的偶然突变，提示这些免疫ｍｔＤＮＡ变异度很低，遗传     

几种鸟类mtDNA限制性酶切图谱的比较研究

本文用５种限制内切酶（ＨｉｎｄⅢ，ＢｇＬＩ，ＰｓｔＩ和ＢａｍＨＩ）初步建立了头鹅、白鹅、火鸡和鹌鹑的肝脏线粒体ＤＮＡ的内切酶图谱。结果表明白鹅和狮头鹅的ｍｔＤＮＡ的酶切图谱极为相似。山鸡、火鸡和鹌鹑的ｍｔＤＮＡ限制性性内切酶图谱之间的差异是很大的，以上事实说明驯化中的鹅类的不同品种间ｍｔＤＮＡ差异不在。而鸡形目中的不同物种间的ｍｔＤＮＡ是有很大的差异的。     

藏绵羊线粒体DNA遗传多样性研究

本文用ＡｐａＩ,ＡｖａⅡ,ＢａｍＨＩ,ＢｃｌⅡ,ＣｌａＩ,ＥｃｏＲⅤ,ＨｉｎｄⅢ,ＨｐａＩ,ＫｐｎＩ,ＰｓｔＩ,ＰｖｕⅡ,ＸｂａＩ,ＸｈｏＩ等１４种内切酶,分析了１２头藏绵羊ｍｔＤＮＡ的限制性片断长度多态性,共检测了３５个酶切位点,发现ＡｖａⅡ,ＣｌａＩ,ＰｖｕⅡ三种酶切类型具有多态性,根据不同个体的ｍｔＤＮＡ的酶切类型,发现藏绵羊存在三种ｍｔＤＮＡ单倍型,计算ｍｔＤＮＡ多态度π值为０．００１２,     

四川白鹅朗德鹅及杂交后代线粒体DNA多态研究

采用ＲＦＬＰ技术，对四川白鹅和朗德鹅及其杂交后代进行了线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）多态分析，在所使用的１９种限制性内切酶中，有４个酶（ＥｃｏＲＶ，ＨａｅⅡ，ＨｉｎｃⅡ和ＫｐｎＩ）检测出多态，共获得两种ｍｔＤＮＡ单倍型，四川白鹅和以四川白鹅为母本杂交后代ｍｔＤＮＡ为Ｉ型，朗德鹅的ｍｔＤＮＡ为Ⅱ型，以上结果为中国鹅和欧洲鹅存在两种不同起源学说提供了分子遗传学的证据，ＥｃｏＲＶ，ＨａｅⅡ，ＨｉｎｃⅡ和Ｋｐ     

四川白鹅郎德鹅及杂交后代线粒体DNA多态研究

采用ＲＦＬＰ技术 ,对四川白鹅和郎德鹅及其杂交后代进行了线粒体ＤＮＡ多态分析。在所使用的１９种限制性内切酶中 ,有４个酶检测出多态 ,共获得两种ｍｔＤＮＡ单倍型 ,四川白鹅和以四川白鹅为母本杂交后代的ｍｔＤＮＡ为Ⅰ型 ,郎德鹅的ｍｔＤＮＡ为Ⅱ型。以上结果为中国鹅和欧洲鹅存在两种不同起源学说提供了分子遗传学的证据。ＥｃｏＲＶ、ＨａｅⅡ、ＨｉｕｃⅡ和ＫｐｎⅠ四种限制性内切酶的两种限制性态型可以作为鉴别两种不同起源家鹅的母系分子遗传标记。线粒体ＤＮＡ在家鹅中也遵循严格的母系遗传。（摘自《畜牧兽医学报》１９９８，…     

云南地方猪种线粒体DNA多态性研究

本文用ＡｐａⅠ、ＡｖａⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＢｅｌⅠ，ＢｃｌⅠ，ＣｌａⅠ，ＤｒａⅠ，ＥⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＫｐｎⅠ，ＰｓｔⅠ，ＰｕｖⅡ，ＳａｌⅠ，ＳｍａⅠ，ＳｔｕⅠ，ＸｈｏⅠ等１８种限制性内切酶分析云南猪种的ｍｔＤＮＡ多态性。在全部１８头个体中只检出一种限制性类型，结果表明，云南猪种的ｍｔＤＮＡ变异度很低，遗传多样性贫乏，提示云南猪种起源于一个共同的祖先，在品种形成的早期可能受到创立者效应的制约。     

蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法

一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋…     

云南保种山羊线粒体DNA限制性酶切研究

采用碱变性法,提取来自云南省不同地区４个保种山羊的１３个个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）,并用ＡｐａⅠ,ＡｖａⅠ,ＢａｍＨⅠ,ＢｃｌⅠ,ＢｃＩⅠ,ＢｇｌⅡ,ＣｌａⅠ,ＤｒａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＥｃｏＲⅤ,ＨａｅⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＫｐｎⅠ,ＰｓｔⅠ,ＰｖｕⅡ,ＳａｃⅠ,ＳａｌⅠ,ＳｍａⅠ,ＳｔｕⅠ和ＸｈｏⅠ等２０种限制性内切酶进行酶切分析。结果发现它们的线粒体ＤＮＡ的分子量大小约为１５．８Ｋｂ;不同限制性内切酶的酶切位点分别为：ＤｒａⅠ有７个酶切位点,ＡｖａⅢ有６个酶切位点,ＥｃｏＲⅤ和ＳｔｕⅠ共有５个酶切位点,ＨｉｎｄⅡ和ＨａｅⅡ有４个酶切位点,ＢａｍＨⅠ,ＢｇｌⅡ,ＰｓｔⅠ和ＰｖｕⅡ有３个酶切位点,ＡｐａⅠ,ＣｌａⅠ有两个酶切位点,其余有１个酶切位点。各保种山羊间未发现变异,说明云南的４个保种山羊极可能来自于共同的母性祖先。     

蜜蜂线粒体DNA（mtDNA）研究进展

蜜蜂线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）研究进展王瑞武董捷乔广辉（中国农科院蜜蜂研究所，北京１０００９３）线粒体是细胞中进行能量代谢的重要细胞器。线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）是线粒体中的遗传物质。长期以来，人们对ｍｔＤＮＡ的结...     

减蛋综合征病毒基因组DNA的酶切分析

采用差速离心法化了鸭胚尿囊液中的减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＷＰＤＶ２０５株并提取了病毒基因组核酸。选用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ两种限制性内切酶分别对病毒基因组ＤＮＡ刊物单酶切和双酶切处理，单酶切消化均产生４个片段、双酶切消化产生７个惩段。用琼脂糖凝胶电泳方法测定了病毒基因组ＤＮＡ和所有酶切片段的分子质量，将这些结果与ＡＶ－１２７标准株和Ｂ８－７８株基因组ＤＮＡ由相贩内切酶消化的结果进行比较，发现     

兔羟类固醇磺基转移酶AST—RB2的分子克隆,表达和酶学特性

胞质磺基转移酶至少有三个基因家族组成，最近纯化到的一个兔羟类固醇磺基转移酶ＡＳＴ－ＲＢ２（ＳＴ２Ａ８），对羟基固醇和胺类表现出很高的催化活性。为了鉴别此酶，兔的ｃＤＮＡ文库用抗ＡＳＴ－ＲＢ２抗体筛选阳性克隆。根据纯化的ＡＳＴ－ＲＢ２氨基酸序列，可判定筛选的ｃＤＮＡ克隆为编码ＡＳＴ－ＲＢ２的基因。     

牛β—酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆

采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ,将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物,引物长度１９ｎｔ,跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示,在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近,出现一明显亮带,这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物,煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒,ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ,Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中,经筛选、酶切、测序鉴定,结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。     

大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析

用内切酶ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切大肠杆菌质粒ｐＥＷＤ２９９，回收５０５ｂｐ的ＬＴＢ基因片段，再将载体ｐＵＣ１８用ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，最后将ｐＵＣ１８ＤＮＡ与５０５ｂｐ的ＬＴＢＤＮＡ进行连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＳａｃⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１。再将ｐＸＬＴ１进行ＥｃｏＲⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠＫｌｅｎｏｗ大片段补平、ＨｉｎｄⅢ酶切处理，然后与用ＨｉｃⅡ和ＨｉｎｄⅢ酶切的ｐＵＣ１８连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＸｂａⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１－１。将质粒ｐＸＬＴ１－１进行核苷酸序列分析，确定了插入的ＬＴＢ基因与载体的连接向位及其全部核苷酸序列     

产蛋下降综合征（EDS—76）病毒DNA酶切图谱分析

选Ｅｃｏ，Ｒｉ，Ｐｓｔ，Ｉ，Ｐｖｕ ＩＩＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，Ｂｇ１Ｉｔ和Ｂｇ１ＩＩＩ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株子ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４，８，１０，１０，６和７条。各酶切图形，片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和Ｐｓｔ－Ｉ－Ｅｃ     

山羊mtDNA多态性及其起源分化研究

本文用１４种识别６碱基的限制性内切酶ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＫｐｎⅠ、ＰｖｕⅡ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ研究了来自我国１２个省和自治区共计１８个地方山羊品种２１８个体ｍｔＤＮＡ的ＲＦＬＰ,并运用Ｎｅｉ氏公式计算了各限制性类型间的遗传距离Ｐ和群丛遗传多态度π值。结果表明,在研究的所有个体中共检测到４１个酶切位点,１８种限制性态,其中Ｂ     

牦牛mtDNA限制性类型及与其它牛种分化研究

用２０种限制性内切酶分析了２１头牦牛ｍｔＤＮＡ限制性片段长度多态性，通过双酶切制定出春内切酶物理图谱，发现牦牛ｍｔＤＮＡ存在４种限制性类型计算出牦牛与普通牛，瘤牛分化时间大约分别在１．１－２．２，１。０１－２．０１百万年前。     

用 Digoxigenin 标记核酸探针检测 EDS-76 病毒核酸的研究

用ＥＤＳ７６病毒标准ＡＶ１２７株和分离株（Ｂ９６株）感染鸭胚,提取病毒核酸,分别经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切,获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ单酶切,也得到相似结果。病毒ＤＮＡ经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切后,与ＰＵＣ１９质粒载体重组,并转化到ＥｃｏｌｉＪＭ１０１中,筛选出一个插入片段（Ｇ片段）约为２７ｋｂ的重组质粒。用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｍｉｎ标记ＥＤＳ７６ＤＮＡＧ片段（ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切片段）及含该片段的重组质粒分别制备探针,对ＥＤＳ７６病毒ＤＮＡ进行斑点杂交,两种探针均为阳性,而对照组ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＤＶ正常鸭胚尿囊液的核酸为阴性。且后一种探针的敏感性高于前者,它的ＤＮＡ检出限量为４ｐｇ水平。结果表明,两种探针具有高度的特异性、敏感性。     

天蚕、柞蚕线粒体DNA（mtDNA）的限制性酶切电泳图谱

采用差速离心和碱变性法，以９种限制性内切核酸酶对天蚕和柞蚕ｍｔＤＮＡ进行了单酶切分析，发现这两种蚕的ｍｔＤＮＡ在分子长度和酶切类型上存在明显差异。还对天蚕、柞蚕、蓖麻蚕和家蚕的ｍｔＤ－ＮＡ限制性酶切电泳图谱进行了比较研究。     

天蚕、柞蚕线粒体DNA（mtDNA）的限制性酶切电泳图谱

采用差速离心和碱变性法，以９种限制性内切核酸酶对天蚕和柞蚕ｍｔＤＮＡ进行了单酶切分析，发现这两种蚕的ｍｔＤＮＡ在分子长度和酶切类型上存在明显差异。还对天蚕、柞蚕、蓖麻蚕和家蚕的ｍｔＤ－ＮＡ限制性酶切电泳图谱进行了比较研究。     

鸡产蛋下降综合征病毒NE4株DNA的EcoRI＋BamHI部分酶切片段的克隆

用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ消化ＥＤＳＶ抗原－抗体复合物、酚－氯仿抽提ＤＮＡ,得到了完整的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ（约３３ｋｂ）,用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ＋ＢａｍＨＩ双酶切,得到７个片段,分别回收各片段,与双酶切线性化的ＰＵＣ１９载体质粒连接,转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α,成功地克隆了其中的５个片段。