混合冷冻保护剂在鸡精液冷冻中的作用分析

混合冷冻保护剂在鸡精液冷冻中的作用分析＠王红军＠张忠诚＠陈淑勤￥中国农业大学动物科技学院＠金凤英￥山东日照种鸡场混合冷冻保护剂在鸡精液冷冻中的作用分析王红军张忠诚陈淑勤（中国农业大学动物科技学院北京１０００９４）金凤英（山东日照种鸡场２７０００２）前言近年...     

不同冷冻保护剂在鸡精液冷冻中的作用效果分析

本实验采用一定浓度的甘油、乙二醇、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、二甲基乙酰胺（ＤＭＡ）作为冷冻保护剂，用含冷冻保护剂的稀释液将精液稀释后常温保存，观察精子活率，比较精子生存指数，并进行输精实验，发现在常温下对精子毒害作用最大的是甘油，其次是ＤＭＳＯ，而ＤＭＡ及乙二醇对精子的毒害作用最小。以一定浓度的４种冷冻保护剂将精液冷冻后观察解冻活率，发现以ＤＭＡ作为冷冻保护剂，解冻后精子活率最高。在输精实验中，以ＤＭＡ作为冷冻保护剂采用深阴道输精，取得了５０％的受精率。浅输精取得了４０％的受精率。     

不同冷保保护剂在鸡精液冷冻中的作用效果分析

本实验采用一定浓度的甘油，乙二醇，二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），二甲基乙酰胺（ＤＭＡ）作为冷冻保护剂，用含冷冻保护剂的称释法液精稀释后常温保存，观察精子活率，比较精子生存指数，并进行输精实验，发现在常温下对精子毒害作用最大的是甘油，其次是ＤＭＳＯ，而ＤＭＡ及乙二醇对精子的毒害作用最小，以一定浓度的４种冷冻保护剂将精液冷冻后观察冻活率，发现以ＤＭＡ作为冷冻保护剂，解冻后精子活率最高。在输精实验中，以ＤＭＡ     

鸡精液冷冻技术研究

为扩大优良种公鸡的利用率，加速品种改良，我们从１９９２年开始鸡精液冷冻技术研究，从筛选稀释液入手，探讨了鸡精液的初冻温度，简化了冷冻程序，使其简便易行，利用推广，冻后精子活力达到０．５以上，经小群输精、孵化测定，受精率在８０％以上。通过电镜观察证明，冻后精子顶体完整率与受精率呈正相关。     

不同冷冻保护液和解冻温度对猪精液冷冻效果的影响

在BF5稀释液中分别添加不同水平的牛血清白蛋白(BSA)(0.5,1,1.5 g/L)、二甲基乙酰胺(DMA)(0.5%,1%,1.5%)、甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)(1,2.5,5 g/L),对成年健康猪精液进行冷冻保存,于不同温度(37,50,70℃)解冻后分别检测冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性、项体完整率、线粒体活性.结果显示,0.5 g/L BSA组冷冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性均高于其他组,但差异不显著(P0.05).1% DMA组冷冻后精子活率和活力显著优于1.5%DMA组(P＜0.05),同时也高于对照组(3%甘油)冻后精子活率和活力,但差异不显著.不同质量浓度CLC组冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性和线粒体活性与对照组相比差异不显著.50℃和70℃解冻组精子的活率和线粒体活性显著高于37℃解冻组的精子;50℃解冻组精子的活力和质膜完整率显著高于其他2组.因此,在猪精液冷冻稀释液中,用DMA可以代替甘油作为渗透性保护剂,且以1%DMA,50℃解冻最佳.     

细管冷冻精液在繁改工作中的优越性

法国凯苏氏创立的塑料细管冷冻精液技术,对世界畜牧业的高速发展起到积极的推动作用,使繁改技术逐渐走向简单化。几年来,我区有部分乡(镇)一直采用细管冷冻精液搞冷配工作,取得了较为可观的成绩,大家普遍认为使用细管冷冻精液搞冷配比使用颗粒冷冻精液有如下几种优点。     

简易冷冻装置制备鸡甘油细管冻精的优化

为优化简易装置制备鸡精液甘油细管冻精的条件,采用11%的甘油浓度、不同的熏蒸方式和熏蒸时长等条件制作细管冻精,通过测定精子活力及人工输精后的孵化效果筛选冷冻、解冻条件。结果表明:先以-15^-6℃/min的速率熏蒸1~5min后,再以-60^-25℃/min的速率熏蒸1~5min(两步均1min除外)冷冻效果最好,解冻后活力达0.8以上;以5℃的温度解冻30~60s和10℃的温度解冻15~60s的解冻效果最佳;用优化的冷冻程序、6%浓度甘油制作细管冻精,最高平均获得了77.63%的受精率和73.38%的出苗率。研究结果为鸡精液简易装置冷冻保存技术的系统化和标准化研究提供了技术支撑。     

新疆驴冷冻精液的研究

试验旨在探究新疆驴冷冻精液的最佳稀释保护液与处理方法。以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过分别添加4%、5%、6%、8%甘油处理试验,最后再选用添加甘油后冷冻效果最优的稀释液为对照来进行离心浓缩试验。结果表明：①5号稀释液冷冻—解冻精液后,其活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液（P<0.05）;②以5号稀释液为对照组,添加6%甘油(7号稀释液)冷冻后,精子的活力、顶体完整率要显著高于添加4%、5%、8%甘油组（P<0.05）;③以7号稀释液为对照组,通过离心浓缩,精液在冷冻后其活力和精子顶体完整率都显著提高（P<0.05）。结果提示,将驴精液用6%葡萄糖、2%乳糖、6%甘油为主的稀释液稀释,并经500 r/min离心浓缩10 min处理后,其冷冻效果最好。     

解冻温度对精子活力的影响

[目的]为了获得较为理想的解冻效果.[方法]采用不同温度,不同解冻时间,通过镜检解冻后活力的方法.[结果]发现:不同解冻温度对牛冷冻精子复苏的影响,用39.5℃温水解冻30 s精子的活力最高,冷冻精液解冻后精子活力达O.53.用40.O℃温水解冻10s、39.0℃温水解冻30 s精子的活力也较高,冷冻精液解冻后精子活力...     

哺乳动物精子冷冻工艺中防冻剂的研究进展

精子冷冻是一种简单、经济、高效的生物遗传资源保存方法,目前已经应用到许多领域,并成为治疗人类不育、牲畜繁殖和生物资源多样性保护的重要手段。在精子冷冻保存过程中的适当阶段加入防冻剂,能够有效的避免或减少精子的冷冻损伤和寒害,从而提高冷冻—解冻精子的活力。作者就防冻剂的种类、防冻剂的选择及加入与去除的方式对冷冻—解冻哺乳动物精子活力的影响作一简要综述。     

提高奶牛冷冻精液使用效果的措施

如何提高奶牛冷冻精液的使用效果,在奶牛繁殖中是人们一直追求的目标。作者根据多年的实际生产经验,在冷冻精液的解冻液配方、冷冻方式、解冻温度、解冻后的保存温度等方面进行了改进,取得了较好的效果。     

黑丝羽乌骨鸡精液DMA颗粒冷冻技术研究

为研究不同稀释液与解冻装置对黑丝乌骨鸡N,N-二甲基甲酰胺（N,N-dimethylformamide,DMA）颗粒冻精解冻后精子质量的影响,试验首先采用不同稀释液对精液进行稀释并比较其解冻后精子活力与人工输精的受精率;其次,选取不同解冻管及冻精颗粒数进行恒温水浴解冻,比较其活力;最后,依据解冻后的精子活力,筛选恒温水浴、恒温漏斗、恒温板3种解冻装置各自的最佳解冻温度,并利用各自最佳解冻温度解冻后的精液进行人工输精,检测受精率。结果显示：①不同稀释液组的精子活力与受精率高低趋势一致,为LR > F > B > L组,且各组之间差异显著（P < 0.05）。②在60℃恒温水浴中,用薄壁大玻璃管解冻的精子活力最好。③不同解冻装置有各自最佳解冻活力的温度范围,恒温水浴为50~60℃（0.51~0.59）、恒温漏斗为40~45℃（0.42~0.46）、恒温板为50~55℃（0.61~0.63）,每种装置最佳温度段内的精子活力差异不显著（P > 0.05）。④3种解冻装置最佳解冻状态相比：在精子活力上,60℃恒温水浴与55℃恒温板分别显著高于40℃恒温漏斗（P < 0.05）,但60℃恒温水浴与55℃恒温板之间差异不显著（P > 0.05）;在受精率上,55℃恒温板最高（26.91%）,60℃恒温水浴次之（23.08%）、40℃恒温漏斗最低（20.93%）,三者之间差异不显著（P > 0.05）。因此,黑丝羽乌骨鸡精液应采用LR稀释液、DMA冷冻保护剂及颗粒冷冻技术,在54.9℃恒温板解冻可获得较高的受精率。     

Study on Technology of Black Silkies Chicken Semen Freezing by DMA Pellet

The aim was to explore the effects of different kinds of dilution and thawing devices on the N,N-dimethylformamide (DMA) pellet frozen semen of Black Silkies. Firstly,the motility and fertility of the frozen semen thawed by different dilutions were compared;Then,the motility of the frozen semen was compared when the pellets were thawed using different tube and different number.Finally,the motility and fertility of the sperm thawed by three kinds of thawing devices (thermostat water bath,hotfunnel and hotplate ) were tested. The results showed that:①There was similar order of the sperm motility and fertility in the different dilution groups (LR > F > B > L),and there was significant difference among those groups (P < 0.05).②The motility was the best when the frozen semen was thawed with large thin-wall glass tube at 60℃.③The best temperature range of the 3 devices was different. The highest motility for thermostat water bath was 50 to 60℃ (0.51 to 0.59),and thermostat hotfunnel was 40 to 45℃ (0.42 to 0.46),while thermostat hotplate was 50 to 55℃ (0.61 to 0.63).There was no significant difference of the motility in the optimum temperature range for each device (P > 0.05).④The fertility of the different devices in their best thawing temperature was 26.91% (55℃,thermostat hotplate),23.08% (60℃, thermostat water bath), 20.93% (40℃, thermostat funnel),respectively,and there was no significant differences among those groups (P > 0.05).Therefore,the efficiency thawing condition for the Black Silkies frozen semen was the LR diluent,DMA cryoprotectant,pellet freezing,thawed in the thermostat hotplate at 54.9℃.     

解冻稀释液中添加精浆对冻融猪精子品质的影响

【目的】 探究冷冻前添加热休克蛋白A8(heat shock protein A8, HSPA8)和解冻后添加不同浓度精浆(seminal plasma, SP)对冻融猪精子的影响。【方法】 采用手握法采集长白猪精液, 添加0.5 μg/mL HSPA8到猪精液冷冻保护剂中进行细管分装, 投入液氮中保存3周后进行解冻, 解冻后添加不同浓度精浆(0、10%、30%和50%), 对冻融后长白猪精子的运动能力、质膜完整性、顶体完整性、细胞凋亡、线粒体膜电位、鱼精蛋白缺乏及体外获能水平等进行评估。【结果】 与对照组相比(无HSPA8和精浆), 添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)的精子直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)、平均路径速度(VAP)和前向性运动(STR)均显著提升(P<0.05), 精子直线性运动(LIN)和运动的摆动性(WOB)均无显著差异(P>0.05);精子质量参数中活力、质膜完整性和顶体完整性均显著升高(P<0.05), 细胞凋亡水平与线粒体膜电位均显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。之后在解冻液中添加不同浓度的精浆, 与添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)相比, 精浆添加量达到50%时, 精子VSL、VCL、VAP、LIN、STR和WOB均显著提升(P<0.05);精子活力、质膜完整性、顶体完整性和线粒体膜电位均显著提高(P<0.05), 细胞凋亡水平显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。【结论】 在冷冻基础液中添加0.5 μg/mL HSPA8和解冻稀释液中添加50%精浆联合使用可以有效改善冻融精子质量, 将会对猪精液的冷冻保存及商业化生产提供一定的参考。     

几种因素对鸵鸟冷冻精液精子活力影响的研究

对每组20份精子样品,采取不同冷冻程序,分析了各单因子如:稀释液种类、稀释液中甘油浓度、稀释方法、4℃低温平衡时间、冷冻面与液氮面距离及热平衡时间对鸵鸟冷冻精液的精子解冻复苏活率的影响。结果表明:以含甘油浓度2.8%的(MEM·蛋黄)稀释液,采用两步稀释,低温平衡2.5h,冷冻面与液氮面距离1.5cm进行2min热平衡,鸵鸟精液的冷冻效果较好。     

蛋黄中低密度脂蛋白对冻融后猪精子DNA完整性及受精率的影响

本实验目的是评价低密度脂蛋白(LDL)对冻融后猪精子DNA完整性及受精率的影响。结果表明:添加9%LDL处理组冷冻解冻后,精细胞DNA完整率(彗星长为13.21,尾长为10.28,尾部DNA(%)为16.54,尾矩为2.31)和卵裂率(43.12%)都与7%、8%和10%LDL处理组差异显著(P<0.05)。本实验表明LDL能显著提高冷冻解冻后猪精子DNA的完整性;也能显著改善冷冻解冻后猪精子体外受精(IVF)率。