蜜蜂线粒体DNA（mtDNA）研究进展

蜜蜂线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）研究进展王瑞武董捷乔广辉（中国农科院蜜蜂研究所，北京１０００９３）线粒体是细胞中进行能量代谢的重要细胞器。线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）是线粒体中的遗传物质。长期以来，人们对ｍｔＤＮＡ的结...     

用地高辛探针对江苏省鸡传染性贫血病进行流行病学调查

用地高辛标记的核酸（ＤＮＡ）探针对的扬州、江都、连云港、苏州、无锡等５蛭９个养鸡场（户）随机取样１０６份（分别为１２￣６０日龄的肉鸡、蛋鸡和草鸡,采集胸腺、法氏囊和脾脏组织,抽提ＤＮＡ）进行检测ＣＡＶ感染情况,ＣＡＶ阳性鸡２２份阳必率为２０．７％,各鸡场阳性率人５￣６０％不等。结果表明,在处的一些地区鸡群中ＣＡＶ的感染已非常普遍,有的地区甚至十分严重,控制该病的发生已刻不容缓。     

五个畜种和一个鱼种的多位点DNA指纹,RAPD-标记的研究和线粒体DNA(mtDNA)的限制性分析

五个畜种和一个鱼种的多位点ＤＮＡ指纹，ＲＡＰＤ－标记的研究和线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的限制性分析（博士论文摘要）陈宏导师：Ｐｒｏｆ．Ｄｒ．Ｆ．Ｌｅｉｂｅｎｇｕｔｈ利用３种分子方法，（１）多位点ＤＮＡ指纹通过地高新（ｄｉｇｏｘｉｇｉｎａｔｅ）标...     

近交系大鼠DNA指纹图稳定性的研究

为建立ＤＮＡ指纹技术在近交系大鼠遗传监测中的方法，采用ＤＮＡ指纹图对国内已知的７个品系近交系大鼠群体进行了分析，并对相同ＤＮＡ进行了多次ＤＮＡ指纹图重复实验，其结果表明：不同品系之间ＤＮＡ指纹图差异较大，其平均图带数为（１６．３６０±２．１７８），共有带率为（０．０６１±０．００８），相似系数为（０．０６２±０．００８），相同ＤＮＡ指纹图概率为３．６９１×１０－２３。相同ＤＮＡ不同次制作的ＤＮＡ指纹图谱基本一致（Ｐ＞０．０５）。同一个体不同组织的ＤＮＡ指纹图也基本相同，从而证实了该方法具有高度的稳定性和可重复性。     

云南文山牛和迪庆牛mtDNA的多态性研究

云南文山牛和迪庆牛ｍｔＤＮＡ的多态性研究文际坤，俞英，赵开典，朱芳贤（云南省肉牛和牧草研究中心，昆明６５０２１２）王文，刘爱华，李维智，张亚平，施立明（中国科学院昆明动物研究所，昆明６５０２２３）通过线粒体ＤＮＡ限制性片段长度多态性（ｍｔＤＮＡＲＦＬ...     

动物mtDNA遗传研究进展及在育种上的应用

动物ｍｔＤＮＡ遗传研究进展及在育种上的应用魏彩虹（甘肃省畜牧兽医研究所平凉７４４０００）自从Ｎａｓｓ（１９６２）发现线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）以来，有关ｍｔＤＮＡ的遗传结构、复制、转录、基因表达与调控等方面已积累了丰富的资料。动物的ｍｔＤＮＡ是共价闭...     

蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法

一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋…     

成人肝cDNA文库的构建

用异硫氰酸胍／盐酸胍法从人肝组织中提取ＲＮＡ，通过Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维柱分离出ｍＲＮＡ。以ｍＲＮＡ为模板，含ＮｏｔⅠ接头的Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物，在逆转录酶ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔⅡＲＴ催化下合成单链ｃＤＮＡ（ｓｓｃＤＮＡ），再在Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶Ⅰ与ＲＮａｓｅＨ和ＤＮＡＬｉｇａｓｅ共同作用下，ｓｃＤＮＡ拷贝成双链ｃＤＮＡ（ｄｓｃＤＮＡ）。经放射自显影测定，合成有全长ｃＤＮＡ片段。平末端ｄｓｃＤＮＡ与ＳａｌⅠ接头连接，ＮｏｔⅠ酶切后，通过过柱取掉小于５００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，大片段ｃＤＮＡ与载体ｐＳＰＯＲＴ１连接，转化受体菌ＤＨ５α，经稀释测定出含有重组子的文库大小为３．３×１０６。该文库适合于筛选低丰度ｍＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆。     

通过随机扩增的多态性DNA鉴别七种艾美球虫的研究

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）随机扩增的多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）鉴别艾美球虫。用七种长度１０到２０个核苷酸的引物任意同七种艾美球虫卵囊的ＤＮＡ结合产生唯一的ＤＮＡ指纹。在不同的反应申合成了长度２００—２２００碱基对（ｂＰ）的ＤＮＡ片Ａ。在大多数情况下观察到种特异性ＤＮＡ片断迁移率图谱。在几次试验中，合成了多种ＤＮＡ片断，在大多数试验中，较易鉴别出艾美球虫种类．在４９次试验中，仅６次没有产生ＤＮＡ片断。     

DNA指纹图谱法在动物遗传分析中的应用及操作方法

ＤＮＡ指纹图谱法在动物遗传分析中的应用及操作方法黄晓东，徐士清，王维洪（浙江省农业科学院畜牧兽医研究所）１ＤＮＡ指纹图谱法（ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）的基本概念在真核生物的染色体基因组中普遍分布着一些高可变区（ＨｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅＲｅ...     

用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫kDNA探针的研究

用长臂光敏生物素标记伊氏锥虫ｋＤＮＡ探针的研究王云飞，钟淑梅，周勇志（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）前言动基体ＤＮＡ（ｋＤＮＡ）是伊氏锥虫重要特征之一。应用同位素标记ｋＤＮＡ探针来检测伊氏锥虫，灵敏度高ｔ‘］。然而，同位素标记受实验条件限制，对于...     

鸡DNA指纹技术的发展与现状

鸡ＤＮＡ指纹技术的发展与现状王金玉，龚允陈，陈国宏扬州大学农学院（２２５００１）陈宽维江苏省家禽研究所（２２５０００）ＤＮＡ指纹技术是在分子生物学技术基础上发展起来的。１９７５年Ｓｏｕｔｈｅｒｎ提出了ＤＮＡ转移技术，结合特定的已标记基因片断（称为探针...     

限制性内切酶片段长度多态性在几个绵羊品种中的研究

本文利用羊的促卵泡激素（ＦＳＨ）ｃＤＮＡ，胸腺（Ｔｈｙｍｕｓ）基因组ＤＮＡ及卵泡抑止素（Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）ｃＤＮＡ等３种探针与泰国长尾羊，喀麦隆羊（Ｃａｍｅｒｏｏｎ）及它们Ｆ１代杂种的基因组ＤＮＡ进行分子杂交，结果在ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ和ＴａｑⅠ酶切的ＤＮＡ片段与ＦＳＨｃＤＮＡ杂交的图谱上，可观察到ＲＦＬＰ的存在，并可根据某些特殊区带的存在与否区别两个不同种的羊。用ＥｃｏＲＩ酶切的ＤＮＡ片段与胸腺基因组ＤＮＡ探针杂交，也发现了ＲＦＬＰ，而其它３种酶的酶切片段与此探针杂交，个体间的图谱是一致的。利用本实验所采用的４种限制性内切酶，在所测定品种及杂交种的卵泡抑止素位点没有发现变异。     

DNA探针、粪检菌和ELISA三种方法在诊断副结核病中的比较研究

本研究在已构建的副结核分枝杆菌Ｃ２株ＤＮＡ基因文库的基础上，应用正、反向杂交试验从基因文库中筛选出特异性片段ＰＴＰ３１，以光敏生物素标记制成ＤＮＡ探针。用此ＤＮＡ探针以及粪检菌和ＥＬＩＳＡ三种方法分别对３２份副结核菌素（ＰＰＤ）变态反应阳性牛粪便及相应血清样品进行检测，其检出率分别为４７％（１５／３２）、５６％（１８／３２）和３４％（１１／３２）。对随机采集的２７６份牛粪便及血清样品，３种方法的检出率分别为１０％（２７／２７６）、１３％（３６／２７６）和７％（７９／２７６）。本研究结果表明，ＤＮＡ探针与粪检菌呈现正相关性，ＤＮＡ探针比ＥＬＩＳＡ方法能够检出更多的阳性数。     

鸡的DNA指纹应用研究

鸡的ＤＮＡ指纹应用研究王金玉，龚允陈，陈国宏（扬州大学农学院２２５００１）陈宽维（江苏省家禽研究所２２５００３）鸡的ＤＮＡ指纹技术研究始于１９８８年，Ｒｙｓｋｏｖ等人证明用Ｍ１３噬菌体作为探针与ＢｓｐＲⅠ酶切的鸡ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，可产生...     

家禽DNA指纹标记及其在遗传育种上应用的研究进展

家禽ＤＮＡ指纹标记及其在遗传育种上应用的研究进展顾志良，周勤宣（江苏省家禽科学研究所２２５００３）１９８０年，Ｗｙｍａｎ和Ｗｈｉｔｅ，发现人类基因组ＤＮＡ中含有高变区（ＨＶＲｓ），并证明了这些高变区是一系列的可变数目申状重复序列（ＶＮＴＲｓ），即小卫...     

柞蚕蛹增殖核型多角体病毒的研究

柞蚕蛹增殖核型多角体病毒的研究谢秉泉，周怀民，郑作运（河南省云阳蚕业试验场）在Ｓｍｉｔｈ（１９８３）、前田进（１９８４）取人干扰素基因分别与苜蓿尺蠖核型多角体病毒ＤＮＡ（Ａｕ－ｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮＰＶ－ＤＮＡ）和家蚕核型多角体病毒...     

新城疫病毒F48E8株cDNA文库的构建

以新城疫病毒（ＮＤＶ）中国标准强毒株为材料，分别用基因组ＲＮＡ及ｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ为模板反转录合成ｃＤＮＡ。将ｃＤＮＡ通过同聚物加尾ｐｏｌｙ（ｄＣ）后克隆于末端加有ｐｏｌｙ（ｄＧ）的线性化质粒ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）上，转化大肠杆菌ＴＧ１，经ＩＰＴＧ和Ｘ－ｇａｌ筛选及电泳检查，其中有５６个克隆含有大小在０．２～２．７ｋｂ范围的外源片段。斑点杂交鉴定有５２个是ＮＤＶｃＤＮＡ克隆，平均长度为１．３１ｋｂ，从而构建了ＮＤＶｃＤＮＡ文库。文库的统计学质量检验表明，拥有５２个克隆的Ｆ４８Ｅ８株ｃＤＮＡ文库可能覆盖ＮＤＶ整个基因组     

天蚕和柞蚕核多角体病毒DNA限制性内切酶酶解图谱的比较试验

天蚕和柞蚕核多角体病毒ＤＮＡ限制性内切酶酶解图谱的比较试验张秀珍，张显博，孙芳义，邹碧珍，齐云翔，李鹤（黑龙江省蚕业研究所）（黑龙江省应用微生物研究所）用酚法提取天蚕和柞蚕ＮＰＶ－ＤＮＡ，并用限性内切酶ＥｃｏＲⅠ水解两种蚕的ＮＰＶ－ＤＮＡ，其酶切图谱...     

花粉中核酸的研究

花粉中核酸的研究王开发张玉兰张盛隆（同济大学花粉应用研究中心：２０００９２）花粉营养成分非常丰富，而其中的核酸是重要的成分之一，核酸分ＤＮＡ（脱氧核糖核酸）和ＲＮＡ（核糖核酸）两大类，核酸的基本结构单位是核苷酸，ＤＮＡ主要由四种脱氧核糖苷酸组成，ＲＮ...