共查询到17条相似文献,搜索用时 78 毫秒
1.
利用滤膜过滤技术对经典碱裂解法进行改良,并将改良后的提取效果与经典碱裂解法和试剂盒法进行比较。结果表明,改良法提取的质粒DNA浓度显著高于经典碱裂解法和试剂盒法,并且质粒纯度与试剂盒法相近。改良方法适用于实验室的应用与推广。 相似文献
2.
质粒DNA的小量制备是基因克隆中的常规操作 ,可快速提取质粒DNA进行各种鉴定或进一步操作 ,本文就碱裂解法谈一下质粒DNA提取操作中应注意的问题。1)无菌条件下挑取琼脂培养板上的单菌落 ,移至 2~ 5ml,含适当抗生素的LB培养液中 ,37℃培养 8~ 10h为最适。2 )取 1 5ml培养液至离心管 12 0 0 0r/min离心 30s,离心机启动时间不应计算在此 30s内。3)弃上清 ,要使菌体和管壁上不残留液体 ,旨在去除细菌生长过程中代谢废物和脱落的细胞壁 ,否则会影响质粒的质量和内切酶酶切效果。4 )溶液Ⅰ、Ⅲ在使用前要预冷。5 )溶液Ⅱ现用现配 ,加溶液… 相似文献
3.
4.
5.
碱裂解法提取P.ananatis变异体质粒DNA改良研究 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]对常规碱裂解法进行改进。[方法]分别改变溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间,少量提取质粒DNA。根据产率和纯度,得出各溶液的最佳反应时间,以紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳结果验证提取效果。[结果]将常规碱裂法中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间由原来的5、5、5、15 min分别缩短至0、1、1、5 min,纯度达1.8~1.9,产率达180.0~248.0μg/ml。[结论]改良法提取质粒DNA,总提取时间缩短了23 min。 相似文献
6.
7.
碱裂解法快速提取番茄DNA的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
以转基因番茄MM-R3a的嫩叶、子叶、下胚轴和根为试验材料,用碱裂解法快速提取番茄总DNA并用于PCR扩增.结果表明,以番茄子叶和幼嫩叶片为材料,使用该方法提取的DNA纯度和质量浓度相对较高,以稀释10倍~30倍的DNA为模板的PCR结果相对稳定. 相似文献
8.
9.
10.
在碱解法的基础上,优化了提取空肠弯曲菌质粒DNA的条件。细菌经37℃,5%CO2培养48h后,每个样品以长满一个φ90mm平板(约2.86×106个/mL)的细菌用量为宜;溶菌液的最适SDS浓度和pH值为2%和12.0~12.5;最适温育温度和时间为55℃、60min。在该条件下用该方法提取了219株不同畜禽来源的空肠弯曲菌质粒DNA,质粒阳性率为10.96%,最大质粒DNA108kb,最小质粒DNA1.9kb。 相似文献
11.
为建立重组质粒DNA的快速鉴定方法,分别以阳性菌的菌斑,菌液的菌丝体以及质粒DNA为模板进行PCR鉴定重组质粒。结果表明:以菌斑或菌液的菌丝作为模板的PCR鉴定方法操作步骤便捷,结果可靠,可以作为重组质粒初步的筛选方法。 相似文献
12.
一种用高拷贝质粒载体制备BAC载体基本功能基因的新方法 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]简便有效地解决BAC载体序列因单一拷贝数带来的制备以及下游亚克隆操作的困难。[方法]选择适当的单一酶切位点,将单拷贝BAC载体质粒序列全部插入高拷贝质粒pUC119载体的适当位点。[结果]BAC载体基本功能基因序列在新质粒pUC119-BAC中失去了单一拷贝数控制功能,以高拷贝形式进行复制,利用单一酶切,可将BAC载体基本功能基因序列完整切下来,自连后重新恢复严格的单拷贝控制功能。[结论]利用高拷贝pUC119-BAC质粒,实现了BAC载体的基本功能基因序列高拷贝的复制和扩增,可以方便地用于分子克隆化重组病毒转移载体的构建或BAC文库的构建。 相似文献
13.
磁珠分离法快速提取大肠杆菌质粒DNA 总被引:2,自引:0,他引:2
以单分散羧基功能化纳米磁性粒子为固相载体,PEG/NaCl为结合液,对大肠杆菌(Escherichia coli)裂解液中的质粒DNA进行了纯化研究.结果表明:PEG8000质量分数7.5%,NaCl浓度1.25 mol/L,磁珠用量0.9 mg时,在室温下,从1.5 mL大肠杆菌菌液中提取到的质粒DNA量为8.3μg... 相似文献
14.
依据全球转基因作物商业化的强势发展态势,转基因马铃薯的普遍商业化已呈大势所趋。马铃薯是世界第四大食用作物,仅次于水稻、小麦和玉米。目前,全球获批商业化种植的转基因马铃薯45种,主要涉及抗虫、抗病毒及品质改良等性状。转基因技术在给人们带来巨大经济效益的同时,也引起了人们的担忧,主要包括食品安全及环境安全问题等,由此转基因生物产品成分的检测及监管的重要性凸显。在转基因检测领域,标准质粒以容易获得、纯度高、成本低与稳定性好等优点逐渐被广泛应用。在调研了所有商业化的转基因马铃薯的重要信息的基础上,针对这些转基因马铃薯的主要外源基因类型,构建含有抗马铃薯甲虫cry3A基因、胭脂碱合成酶启动子P-nos基因、抗马铃薯Y病毒pvycp基因及内标准基因尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶PATA基因的多靶标质粒pB JGMM003。该质粒可用于大部分已批准转化体及部分在研转基因马铃薯的鉴定、检测与监管工作,解决了转基因马铃薯的阳性标准品匮乏等问题,保障了转基因马铃薯相关工作的顺利进行。 相似文献
15.
对传统的小提质粒方法进行了简化,在15 min内提出重组子质粒,从而快速地排除不含质粒的假阳性菌落.为验证方法的可靠性,构建了7个重组子,并应用PCR方法进一步对筛选结果进行鉴定.结果表明:此方法简便、迅速、可靠、重复性好,适用于革兰氏阴性菌,可以先排除一部分假阳性克隆,缩小筛选范围. 相似文献
16.
以庆大霉素生产菌——绛红小单孢菌(Micromonospora purpurea,M.p),小诺霉素、庆大霉素生产菌——棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora,M.e)和西索霉素生产菌——伊尼奥小单孢菌(Micromonospora inyoensis,M.i)为研究材料,对其遗传性状特别是质粒DNA进行了分离、鉴别并对其功能进行了研究.结果表明:三株生产用小单孢菌质粒DNA与该菌产生孢子、色素有关,而与产生抗生素无关.说明这三株生产用小单孢菌产生抗生素的基因在染色体DNA上,从而为研究、改造这三株生产用小单孢菌染色体DNA遗传性状和提高产量奠定了基础. 相似文献
17.
重组质粒导入根癌农杆菌冻融法的研究 总被引:10,自引:1,他引:10
对重组质粒导入农杆菌冻融法的几个技术环节进行改进与优化。结果表明:该方案可简便、快速、有效地将重组质粒导入农杆菌,转化效率高、重复性好。应用该改进和优化的标准冻融法将重组质粒pBISPl.pBIPl,pBIAP1和pBISgpl20分别导入根癌农杆菌EHAl05和LBA4404,构建了植物双元表达载体,为用农杆菌介导法进行植物遗传转化提供了良好的载体系统。 相似文献