怀地81与主栽品种单株鲜质量和指标成分含量比较

为了选育怀地黄优良新品种,利用高效液相色谱法测定怀地81与5个怀地黄主栽品种的指标成分——梓醇和毛蕊花糖苷含量,并采用SPSS分析其单株鲜质量和指标成分的差异。结果表明,怀地黄单株鲜质量依次为怀地8185-5金九怀丰沁怀北京3号,怀地81与其他主栽品种差异极显著;梓醇含量依次为北京3号(1.601%)沁怀(1.588%)怀地81(1.314%)金九(1.277%)85-5(1.073%)怀丰(0.924%),怀地81梓醇含量与金九差异不显著,与其他主栽品种差异极显著;毛蕊花糖苷含量依次为怀地81(0.096%)沁怀(0.069%)85-5(0.047%)北京3号(0.035%)怀丰(0.023%)金九(0.022%),怀地81毛蕊花糖苷含量与5个主栽品种差异极显著。说明怀地81单株鲜质量和指标成分综合性状较主栽品种有显著优势。     

地黄配方颗粒HPLC特征图谱研究及其毛蕊花糖苷含量测定

[目的]建立地黄配方颗粒的HPLC特征图谱,并测定其毛蕊花糖苷的含量。[方法]以流动相乙腈-0.1%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,柱温25℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长334 nm;进样量10μL。[结果]建立了地黄配方颗粒的HPLC特征图谱,确定8个特征峰;毛蕊花糖苷在4.89～195.68μg/mL(R~2=0.999 6)与色谱峰面积呈良好的线性关系;其平均加样回收率为101.57%,RSD为1.29%。[结论]该方法简单、准确、重复性好,为地黄配方颗粒的工艺研究及质量控制提供了参考依据。     

不同产区地黄的比较研究

用石蜡切片法、薄切片法、高效液相色谱法对不同产区地黄块根的外部形态和内部解剖结构以及有效成分梓醇含量进行了比较研究,用SPSS 10.0软件系统分析了不同产区的主要生态因子与地黄块根中梓醇含量的相关性。结果表明,地黄道地药材怀地黄从外观上有以下特征:颜色较深,为黄褐色,形状为块状,最粗处直径大,长度/粗度比值小。而其解剖构造上的特征如下:横切面有菊花心,其他产区的地黄没有菊花心;怀地黄木质部/韧皮部的比值为3.7,木质部及木质部中薄壁细胞所占的比例都较其他产区要高。怀地黄中主要药用成分梓醇的含量也高于其他产区,通常都在9%以上。土壤类型与地黄块根中梓醇含量密切相关,怀地黄的道地产区土壤为砂壤土,是由黄河冲积而成的,这种土壤的特点是pH值为7.5~8.5、透气性好、持水保肥能力差。说明透气性好的弱碱性土壤适合地黄生长和梓醇积累。外地引种怀地黄块根有逐步退化变小的趋势,说明怀地黄之所以能成为“道地药材”与怀庆地区这个得天独厚的自然地理条件有密切关系。     

卵叶钓钟柳的离体再生及特殊中药成分的HPLC检测

以卵叶钓钟柳无菌苗的下胚轴为外植体,通过不定芽诱导、增殖和生根建立离体再生体系,并采用HPLC 检测试管苗中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量.结果表明,在MS+1.0mg/LBA 0.5mg/LNAA 培养基中,下胚轴 20d不定芽诱导率为88.33%;在MS 0.5mg/LBA 0.2mg/LNAA培养基中,不定芽1~3代平均繁殖系数达 7.5;在1/2MS培养基中,不定芽20d生根率达100%;48株试管苗移栽到田间,30d成活46株,成活率达 95.83%.试管苗全株含毛蕊花糖苷约40.37μg/gDW,不含松果菊苷.该试验成功建立了卵叶钓钟柳离体再生体 系,为其快速繁殖和遗传转化奠定了基础.     

怀地黄品种比较和质量研究

以地黄苷A、梓醇和地黄多糖3种成分为指标,采用高效液相色谱法和紫外分光光度法对怀庆-4等10个主要怀地黄农家种植品种进行了其含量测定,综合比较各品种间的质量差异。结果表明,不同品种的地黄中3种成分含量差异较大,地黄苷A含量较高的怀地黄品种有怀庆-5、9302和北京-1等,梓醇含量较高的怀地黄品种有怀庆-5、北京-1、红薯王等,多糖含量较高的怀地黄品种有金状元、白状元、怀庆-7等。同时,怀地黄各农家种植品种中,地黄苷A、梓醇和多糖的含量高低没有一致性的规律,在进行怀地黄的品种比较和质量研究时,应增加检测指标和测定方法,以更加全面地评价药材质量。     

独一味4种药用成分含量的测定

为了建立同时测定独一味中连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素4种药用成分含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法,采用独一味样品的甲醇提取物,建立了该测定方法,并进行了连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素的线性范围和平均加样回收率的分析.结果表明:独一味样品中含连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素4种药用成分;精密度,连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素的峰面积(RSD)分别为0.65％、0.92％、0.73％和0.77％;稳定性,连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素的RSD分别为0.78％、1.15％、1.06％和1.22％;重复性,连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素的RSD分别为1.35％、0.76％、1.18％和0.91％;4种药用成分的加样回收率分别为100.66％、99.32％、97.07％和99.65％,RSD分别为2.83％、1.97％、2.01％和1.58％;10批药材中4种药用成分的含量分别为0.430～6.782mg/g、0.661～8.600 mg/g、1.320～6.877 mg/g和0.043～0.154mg/g.该方法准确可靠,重复性好,可用于独一味中连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、木犀草苷和木犀草素含量的同时测定.     

40种苦苣苔科植物毛蕊花糖苷与总黄酮含量的测定

为给苦苣苔科植物的药用研究提供依据,采用反相高效液相色谱法和紫外分光光度法测定苦苣苔科4属40种植物的毛蕊花糖苷与总黄酮含量。结果表明:40种苦苣苔科植物中有30种含有毛蕊花糖苷,其中只有半蒴苣苔属11种植物全部含有,吊石苣苔属不含有毛蕊花糖苷,且半蒴苣苔属在4个属间分布含量较高,平均含量为0.078%;吊石苣苔属分布含量最低,平均含量为0.004 4%。40种苦苣苔科植物中均含有丰富的黄酮类化合物,其含量为0.31%~7.84%。报春苣苔属、半蒴苣苔属、吊石苣苔属和芒毛苣苔属的黄酮含量分布均无明确规律,含量高低差异较大。其中,半蒴苣苔属植物毛蕊花糖苷和总黄酮平均含量均最高,分别为0.078%和4.53%。     

管花肉苁蓉全生育期物质成分变化研究

为明确管花肉苁蓉物质成分动态变化规律,分析管花肉苁蓉全生育期干物质累积量、可溶性糖、淀粉、毛蕊花糖苷、松果菊苷和甘露醇含量的变化。结果表明:1)管花肉苁蓉全生育期内,可溶性糖含量持续降低,由146.89mg/g降低至54.28mg/g,淀粉含量在未伸长期内不断升高,峰值为44.87mg/g,出土后迅速降低。单株干物质累积量呈现"S"型,在伸长期达到142.11g,之后相对稳定。2)营养生长阶段,相同质量管花肉苁蓉松果菊苷、毛蕊花糖苷、甘露醇含量不受季节影响,松果菊苷含量和毛蕊花糖苷含量随着管花肉苁蓉单株干物质累积量增加而降低,甘露醇含量则先升高后降低。全生育期内,松果菊苷和毛蕊花糖苷累积量表现为未伸长期伸长期现蕾期开花期蒴果形成期。松果菊苷、毛蕊花糖苷和甘露醇累积量在营养生长阶段不断升高,出土开花后不断降低。3)相关分析表明松果菊苷含量、毛蕊花糖苷含量和可溶性糖含量显著正相关,相关系数分别达到0.87和0.89。     

HPLC测定肉苁蓉微粉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量

[目的]建立高效液相色谱法同时测定肉苁蓉微粉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量.[方法]采用安捷伦1260高效液相色谱仪和Waters C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1ml/min,检测波长330 nm,柱温30℃.[结果]松果菊苷和毛蕊花糖苷进样量分别在0.40～4.00、0.44～44.00μg范围内均与峰面积呈良好线性关系,平均回收率分别为97.4％和101.3％,RSD分别为1.70％、1.52％.[结论]该方法简单可行、重现性好、精密度高、结果可靠,可用于同时测定肉苁蓉微粉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量.     

怀地黄不同主栽品种花粉形态比较

利用扫描电镜观察8个怀地黄不同主栽品种花粉粒形态及表面纹饰,数据采用SPSS统计软件分析.结果根据花粉粒大小可分为大型花粉粒(长34.33～36.02μm,宽18.12～19.05μm)包括85-5、怀地2号和怀地3号,中型花粉粒(长36.93～37.80μm,宽17.14～17.40μm)包括北京1号、生津和北京3号,小型花粉粒(长31.38～36.06μm,宽16.02～16.23μm)包括沁怀和怀地1号;根据花粉粒网眼密度可分为高密度(1.5～1.52个·μm-2)包括北京1号和怀地3号,中密度(0.73～1.20个·μm-2)包括生津,北京3号,85-5和怀地1号,低密度(0.61～0.62个·μm-2)包括沁怀和怀地2号.表明不同主栽品种怀地黄花粉粒的大小、网眼的密度、大小和深浅等均有一定的差异.     

油菜种子中烯丙基硫苷的HLPC检测体系建立及其含量测定

实验以油菜种子为材料,建立了其中所含烯丙基硫苷的HPLC检测体系,并对不同油菜种子中烯丙基硫苷的含量进行了测定.结果表明,烯丙基硫苷HPLC分离检测的最佳条件为:流动相:甲醇∶水(0.005mol.L-1KCl)=9∶91;流速:0.5mL.min-1;柱温:30℃;检测波长:230nm.推广品种‘中陇油5’号烯丙基硫苷含量最高,达到8.677μmol.g-1;‘绵杂04-20’种子烯丙基硫苷含量只有0.032μmol.g-1.杂交品系油菜种子中的烯丙基硫苷含量普遍高于推广品种,最高达11.705μmol.g-1.     

Complete Genome Sequencing and Analysis of Rehmannia Mosaic Virus Isolate from Shanxi Province

Using double-stranded RNA(dsRNA) technology and sequence-independent amplification(SIA), the molecular identification on infected Rehmannia glutinosa in the field with mosaic symptoms was performed and the whole-genome of the Rehmannia mosaic virus(ReMV) Shanxi isolate(ReMV-SX) was sequenced. Sequencing analysis showed that the virus that infected Rehmannia glutinosa was Rehmannia mosaic virus(ReMV). The full-length of the obtained ReMV-SX sequence(GenBank accession no. JX575184) was 6 395 nt, containing four open reading frames(ORFs). The sequence homology analysis of the complete nucleotide sequence showed that ReMV-SX was 93.8%-97.0% homologous to ReMV in Tobamovirus subgroup I, while only 49.8%-58.9% homologous to the isolates in subgroups II and III of the same genus. Phylogenetic analysis showed that ReMV-SX and ReMV-Henan formed a separate branch and had the closest genetic relationship. The results laid the foundation for ongoing researches in the taxonomic status and evolution of ReMV and for further investigating the pathogenic mechanism of ReMV infecting Rehmannia glutinosa.     

地黄肌动蛋白基因片段的克隆与序列分析

笔者从分子生物学基础较薄弱的药用植物地黄（Rehmannia glutinosa）中克隆分离肌动蛋白基因片段,并对所获得的地黄肌动蛋白基因序列进行分析。     

地黄肌动蛋白基因片段的克隆与序列分析(英文)

[Objective] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Method] Degenerate primers were designed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia glutinosa and its similar species,RT-PCR was next conducted to amplify the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Result] The amplified fragment is 724 bp and correspondingly 240 amino acids. The BLAST results indicate that the homology between the amplified fragment and other higher plants for actin gene sequences and amino acid are more than 80% and 90%,respectively,suggesting that the amplified fragment is the actin gene of Rehmannia glutinosa. [Conclusion] Phylogenetic analysis shows that the actin gene of Rehmannia glutinosa has an intimate genetic relationship with actin7 gene of Nicotiana tabacum.     

地黄肌动蛋白基因片段的克隆与序列分析

[目的]克隆与分析地黄肌动蛋白基因片段。[方法]根据与地黄相近物种肌动蛋白基因序列的保守区设计兼并引物,通过RT-PCR方法扩增地黄编码区肌动蛋白基因。[结果]扩增片段全长为724 bp,对应编码240个氨基酸。序列比对分析发现其与其他高等植物肌动蛋白基因核苷酸序列同源性在80%以上,氨基酸序列在90%以上。[结论]系统进化分析表明,扩增到的地黄肌动蛋白基因与烟草actin7基因有较近的亲缘关系。     

Cloning and Sequence Analysis of Actin Gene from Rehmannia glutinosa

[Objective] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Method] Degenerate primers were designed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia glutinosa and its similar species,RT-PCR was next conducted to amplify the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Result] The amplified fragment is 724 bp and correspondingly 240 amino acids. The BLAST results indicate that the homology between the amplified fragment and other higher plants for actin gene sequences and amino acid are more than 80% and 90%,respectively,suggesting that the amplified fragment is the actin gene of Rehmannia glutinosa. [Conclusion] Phylogenetic analysis shows that the actin gene of Rehmannia glutinosa has an intimate genetic relationship with actin7 gene of Nicotiana tabacum.     

Cloning and Sequence Analysis of Actin Gene from Rehmannia glutinosa

[Objective] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutina. [Method] Degenerate primers were de-signed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia glutinosa and its similar species, RT-PCR was next conducted to amplify the ac-tin gene from Rehmannia glutinosa. [Result] The amplified fragment is 724 bp and correspondingly 240 amino acids. The BLAST results indicate that the homology between the amplified fragment and other higher plants for actin gene sequences and amino acid are more than 80% and 90%, respectively, sug-gesting that the amplified fragment is the actin gene ofRehmannia ghainosa. [Conclusion] Phylogenetic analysis shows that the actin gene of Rehmannia glutinosa has an intimate genetic relationship with actin7 gene of Nicotiana tabacum.     

基于HPLC法测定不同产地黄芪总黄酮和异黄酮的含量

[目的]探讨不同产地药材黄芪中总黄酮及异黄酮含量的差异。[方法]采用HPLC法测定了16个不同产地黄芪样品中总黄酮和4种异黄酮(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)的含量,比较其差异性,并采用主成分分析法进行分析。[结果]不同产地黄芪中总黄酮及4种异黄酮含量均存在差异,蒙古黄芪和膜荚黄芪中总黄酮和4种异黄酮含量差异不显著(P0.05)。16份样品中有5份样品的毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量符合药典不少于0.020%的要求。主成分综合得分结果显示,山西代县得分最高,其次为山西广灵、山西浑源泽清岭,且均为蒙古黄芪。SIMCA-P主成分分析可将16个不同地区的药用黄芪分为3类。[结论]膜荚黄芪与蒙古黄芪均可作为药材黄芪的基原物种。不同产地药材黄芪中总黄酮及异黄酮含量差异明显。应选择有效成分含量符合国家要求的地区进行黄芪的区域化种植。