碱性脂肪酶产生菌的发酵条件及酶学性质研究

研究1株碱性脂肪酶产生菌L198发酵条件及酶学性质.结果表明,产酶发酵培养基为(;):豆饼粉1.0,玉米浆1.0,葡萄糖1.0,K2HPO4 0.5,NaNO3 0.5.500 mL三角瓶装液50 mL,30℃,180 r/min摇床培养40 h.酶学性质研究:最适反应温度为40℃,最适pH 9.0;在pH 8～10稳定.其热稳定性较好,在20～40℃放置6 h后仍可以保持较好酶活力.金属离子Na+、 K+对酶活有显著激活作用,而Cu2+对酶活有显著抑制作用,而K+、Mg2+、Fe+对酶活有抑制作用.     

一株脂肪酶产生菌的生理生化及酶学性质

从新疆伊犁土壤中筛选得到一株脂肪酶产生菌株Y-605,通过对该菌株相关生理生化特征的测定及其酶学性质的研究,鉴定其为节杆菌属.研究了不同pH值、温度对其酶学性质的影响.结果表明,其最适生长温度45℃,最适pH值8.0,在pH值7.0～9.0、温度40～50℃之间有较好的稳定性.     

一株耐热脂肪酶产生菌XD-23的酶学性质研究

从云南寻甸油污样中获得1株产脂肪酶的菌株XD-23,研究了该菌株的酶学性质.结果表明,该菌株所产脂肪酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH值为6.0,为高温中性酶;酶活力在pH值4.0～7.0范围内较稳定,有一定的耐酸性;在65℃保温30min酶活力保留70%,具有良好的热稳定性.金属离子Ca2+、Co1+、K+对酶活...     

纤维素降解菌N32产酶条件优化及其酶学性质

本试验筛选出一株高纤维素酶活性菌株—弗村假单胞菌N32.通过单因素及正交设计试验优化发酵条件,再利用发酵罐扩大培养,最后对N32酶学性质进行研究.结果 表明,单因素试验显示最佳产酶条件为:培养时间3d,碳源淀粉,氮源酵母粉,初始pH 5.0,装液量100 mL,培养温度30 ℃,接种量2.0％,摇床速度160 r/min;最佳组合为A3B2C2D2E1F3G3,与单因素不同条件pH 6.0,摇床速度140 r/min,培养温度35℃,装液量125 mL;酶学性质研究表明最适温度为30℃,最适pH为4.0,Na+、Cl-、NO3-、CH3COO-对CMC酶活均有一定的激活作用,而K+、Mg2+对CMC酶活均产生抑制作用,尿素、EDTA、SDS对CMC酶活均产生抑制作用,其中EDTA的抑制作用最强.     

产脂肪酶中度嗜盐菌ZF-03的分离鉴定与酶学性质研究

[目的]研究盐碱地产脂肪酶的中度嗜盐茵菌株的形态和生理生化特点及其所产胞外脂肪酶的性质。[方法]利用平板筛选法分离得到一株产脂肪酶中度嗜盐菌,对其进行形态、生理生化和分子水平的鉴定,并对其产生的脂肪酶的部分酶学性质进行研究。[结果]产脂肪酶的菌株命名为Nesterenkoniahalobiasp．ZF-03。对脂肪酶粗酶液酶学性质的研究结果显示该脂肪酶的最适反应温度在46～50℃之间,温度小于70℃时的稳定性较好;最适pH为8．5,在pH7．5～9．5范围内,相对酶活性较高,酶具有良好的稳定性;反应的最适NaCl浓度为0—3％,在0—5％NaCl浓度下有很好的稳定性。[结论]分离得到了一株产脂肪酶活性较高的中度嗜盐茵。     

耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇（0、5%、10%、15%、20%）的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2＋、K＋和Zn2＋对该酶有激活作用,Mn2＋和CO2＋有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。     

一株碱性脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

【目的】从土壤中分离筛选具有较高酶活力的脂肪酶产生菌,并进行菌种鉴定和酶学性质研究.【方法】以橄榄油为唯一碳源,采用中性红油脂平板初筛,再用改进铜皂-分光光度法测定酶活力进行复筛;利用形态学观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析进行菌种鉴定,并对脂肪酶的酶学性质进行研究.【结果】筛选出4株产脂肪酶菌株,其中菌株LZ-24脂肪酶活力最高,为3.28U/mL;菌种鉴定为液化沙雷氏菌;该菌所产脂肪酶在15~45℃时稳定性较高,最适作用温度为45℃;在pH值7.0~9.0时稳定性较高,最适pH值为8.0;Ca2+、Mg2+和吐温20对脂肪酶有激活作用;Fe2+、Zn2+对脂肪酶有抑制作用,EDTA、SDS则使脂肪酶失活;该酶对丙三醇耐受力较高.【结论】菌株LZ-24所产脂肪酶的酶活力高,是一种碱性脂肪酶,并且作用温度较高,有望应用于食品加工业和洗涤剂行业.     

一株脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

分离筛选脂肪酶高产菌株,为生物降解富含油脂的工业及生活污水提供菌种资源.从校园食堂附近土壤中分离微生物,结合中性红油脂平板筛选法与三丁酸甘油酯平板透明圈法筛选脂肪酶高产菌株.根据菌株形态特征、生理生化特性以及分子生物学特征鉴定高产菌株,进而利用酸碱滴定法定量测定脂肪酶酶活,探究该菌株产生脂肪酶的最适酶促反应温度、pH值等酶学性质.研究结果表明,筛选获得的脂肪酶产生菌SLB-1为革兰氏阳性芽孢杆菌;硝酸盐还原呈阳性,能够水解淀粉和液化明胶;基于16SrDNA的系统发育分析结果表明SLB-1菌株与登录号为NR116240甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)处于同一最小分支,故将SLB-1菌株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌,命名为B.methylotrophicus SLB-1,该菌株产脂肪酶的最适培养时间是24h,酶促反应的最适温度为30℃,最适pH值为7.0.本研究分离鉴定了脂肪酶产生菌Bacillus methylotrophicus SLB-1,且由该菌所产生的脂肪酶为中性常温酶.     

铜绿假单胞菌S8脂肪酶酶学性质及固定化研究

以耐甲醇铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)S8为出发菌株,通过摇瓶发酵产脂肪酶,对发酵脂肪酶粗酶液进行酶学性质及固定化研究。结果表明:该脂肪酶反应的最适温度为35℃,最适p H值为7.0,在p H 6.0~8.0酶活较稳定。以硅藻土为载体,采用吸附法,对脂肪酶进行固定,脂肪酶的最佳固定化条件为:载体硅藻土与脂肪酶质量比为10,固定化温度为30℃,缓冲液p H值为7.5,固定化时间为2.5 h。     

根霉产脂肪酶液态发酵条件及部分酶学性质研究

对根霉脂肪酶液态发酵条件进行了研究 ,结果显示 :豆饼粉和麸皮各 5g对产酶有利 ;2 8℃、15 0r/min ,添加 0 .3g蔗糖和 0 .3g硝酸钠对产酶最有利。接种量为 2ml( 1× 10 7) ,2 8℃培养时 ,可得较高的酶活力。酶的最适反应pH值为 6.5 ,温度为 3 5℃。酶的半失活温度为 47.5℃ ,在pH值 6～ 8酶活力保持在 90 %以上     

巨菌草根内生固氮菌Klebsiella variicola的分离、鉴定及培养条件的优化

采用Ashby和Nfb无氮培养基从巨菌草成熟期根部分离得到1株具有高效固氮性能的内生固氮菌GN02,其在分离的菌落中所占比例最高,且酶活性较高.经16S rDNA序列鉴定,该菌株与克雷伯氏菌属各菌株同源性关系可达99%,结合其形态、生理生化特征,初步鉴定为变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola).在含氮源的KP培养基中菌株GN02的生长情况明显优于无氮源的Ashby培养基.菌株GN02在KP培养基中的最优培养条件为:温度37.1℃,pH 5.6,蔗糖25.6 g·L~(-1),在此条件下其D_(600 nm)能达到1.48,比优化前提高了22.31%.响应面优化所得到的培养条件重复性好,准确、可靠.     

克雷伯氏菌胞外多糖的发酵培养基优化及乳化性质

[目的]以克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)PHRC1.001为发酵对象,优化该菌产胞外多糖的培养基组分,并初步评价了该多糖的乳化性质.[方法]以多糖粗产量为考察指标,采用单因素试验和正交试验法进行了发酵培养基组分优化,并通过发酵罐培养验证了优化培养基下的粗多糖产量.[结果] Klebsiella sp.PHRC1.001产胞外多糖的最优培养基为:蔗糖40 g/L,CaCl2 0.8 g/L,KNO32.5 g/L,MgSO4·7H2O9.0 g/L,NaH2PO43.5 g/L,起始pH 7.O,在此培养基条件下发酵罐最高粗糖产量达到21 g/L,约是初始培养基条件下的2.1倍.此外,以中链甘油三酸酯(MCT)为油相(20％),1％胞外多糖为乳化剂制备O/W乳液,通过激光粒度仪、光学显微镜和荧光显微镜表征乳液的粒径分布和颗粒形态,通过加速试验表征乳液储藏物理稳定性,结果发现,PHRC1.001多糖具有较好的乳化活性,该O/W乳液储藏物理稳定性高.[结论] Klebsiella sp.PHRC1.001为一株高产胞外多糖菌株,且该多糖具有良好的乳化活性,工业应用前景良好.     

利用响应面法优化耐冷纤维素降解菌产内切纤维素酶的发酵条件

为探究1株耐冷纤维素降解细菌HQ产内切纤维素酶的最佳发酵条件,通过测定菌株HQ细胞培养液和超声细胞破碎液的CMCase酶活,确定CMCase为胞外酶。以CMCase酶活为指标,运用Plackett-Burman方法初步筛选出影响CMCase酶活的3个主要因素,即初始pH、接种量和促进因子。以响应面法对菌株HQ发酵条件进一步优化,最终确定菌株HQ较优的发酵条件为:30.0g/L CMC-Na为培养基碳源、40.0g/L 1∶1牛肉膏-蛋白胨为氮源、0.11%吐温-80作为促进因子、初始pH为5.35、最适产酶温度为40℃、接种量为6.42%。在最适条件下摇瓶培养,4d后CMCase酶活可达到32.5U,较优化前提高2.96倍。经16SrDNA序列测定及GenBank序列相似性分析,鉴定HQ为枯草芽孢杆菌亚种(Bacillus subtilis subsp.)。     

耐热链霉菌B221产生角蛋白酶的液体发酵条件研究

以羽毛粉为底物,采用链霉菌(Streptomycessp.)B221液体发酵生产角蛋白酶,考察了温度、pH值、氮源、碳源以及接种菌量对角蛋白酶生成的影响。结果表明,该菌能够分解羽毛角蛋白,产生角蛋白酶,且在40℃、pH值为9.0、接种量为5%时酶活力最强。与培养基中只含有羽毛的发酵过程相比,添加蔗糖更有利于提高角蛋白酶的活性,而葡萄糖和可溶性淀粉对酶的活性则有不同程度的抑制作用;添加NH4C l和KNO3对角蛋白酶活性均有一定的促进作用,而尿素和蛋白胨则对角蛋白酶活性有抑制作用。本试验研究结果为进一步利用微生物技术手段开发羽毛角蛋白资源奠定了基础。     

淡紫拟青霉FZ-0289产几丁质酶的条件优化

通过单因素和多因素正交试验对淡紫拟青霉FZ0289产几丁质酶的条件进行了研究.单因素试验表明:100目几丁质粉末对菌体产几丁质酶的诱导性最强;添加蛋白胨能使产酶高峰提前,产酶量增加.多因素正交试验表明,在添加2g·L-1100目几丁质粉末、2g·L-1蛋白胨、1g·L-1KH2PO4、0.5g·L-1MgSO4、0.2g·L-1CaCl2和0.2g·L-1NaCl的培养基中接入经马铃薯蔗糖培养基(PSA)活化10d的菌碟(接菌孢子量为6×109个·L-1,500mL摇瓶中培养体积为150mL),在28℃、150r·min-1的条件下培养3d,发酵液中几丁质酶活达到0.11U·mL-1.     

周毛德克斯氏菌产生胞外多糖的适宜条件的探讨(Ⅱ)

试验结果表明 ,周毛德克斯氏菌产生胞外多糖的适宜条件为每 1 0 0 m L培养液接种 1 2 -1 6m L菌液 ,3 2℃培养 3 -4d,每升培养液中酵母膏的适宜添加量为 0 .5 g,发酵液的起始 p H值为 5 .5 -7.2 .试验中还对培养基的 4种主要成分即玉米糖、玉米浆、K2 HPO4 和葡萄糖酸钙进行正交试验 ,筛选出的最佳组合为 :每升培养液中玉米糖 40 m L、玉米浆 5 m L、K2 HPO4 0 .2 g、葡萄糖酸钙 2 .0 g     

1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其产脂肪酶特性

【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定;通过菌落和芽胞计数、生长曲线测定,对MY016的生长特性进行分析;通过产脂肪酶量和酶活检测、脂肪酶基因扩增和系统进化分析,对MY016菌株的产脂肪酶特性进行探讨。【结果】产脂肪酶细菌MY016经形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA分析,被鉴定为枯草芽胞杆菌。MY016在培养2 h后进入对数生长期,生长迅速;培养10 h其菌液600 nm吸光度最高达到4.7,随后进入稳定期;12 h时活菌数约为5.3×10⁹ CFU/mL;培养22 h后开始二次生长,吸光度最高达5.2;培养46 h后进入衰退期。芽胞观察和计数结果显示,MY016菌株在接种16 h后开始形成芽胞,随着培养时间延长,芽胞形成率逐渐升高,直至72 h完全形成芽胞,芽胞数最高为1.9×10⁹ CFU/mL。产脂肪酶能力检测结果显示,MY016菌株在培养36 h时产酶量达到最大,为246.918 mg/L,然后总酶量逐步降低;48 h时总酶活达到最高,约为281.883 U/L。成功扩增了MY016菌株的脂肪酶基因,并构建系统进化树,结果显示MY016脂肪酶基因与其他芽胞杆菌的脂肪酶基因亲缘关系最近,表明其脂肪酶基因进化保守。【结论】产脂肪酶枯草芽胞杆菌MY016生长迅速、产酶量稳定,总酶活较高,适合后期规模化生产和在畜牧业中推广应用。     

微孢根霉产凝乳酶的发酵条件优化

筛选得到一株高产凝乳酶的菌株F518,鉴定为微孢根霉。通过单因素试验优化了微孢根霉F518液体发酵产凝乳酶的发酵条件。结果表明:发酵产酶的最适碳源为酒糟,最适氮源为酵母浸粉,培养基最适初始pH为5.0。在优化后的发酵条件下30℃培养72h,微孢根霉F518产凝乳酶活性最高,达到1 001SU/mL。微孢根霉F518在凝乳酶生产方面有很大的应用前景。     

链霉菌Z18产木聚糖酶的发酵条件

为进一步研究木聚糖酶的纯化和性质,对本研究室新筛选出的一株高产木聚糖酶的链霉菌Z18的液态发酵条件进行了研究。结果表明:最佳碳源为1.5%(质量分数)的玉米芯水不溶性木聚糖,培养第5天其酶活性浓度达435.03 U/mL。不同来源木聚糖诱导产木聚糖酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳及酶谱分析结果表明,链霉菌Z18能够产生3种木聚糖酶,以22 ku的木聚糖酶为主;初始pH5.5、培养温度30℃时所得木聚糖酶活性最高。在优化后的培养基和培养条件下,第7天链霉菌Z18产木聚糖酶活性达到峰值,其活性浓度为755 U/mL,为目前国内报道链霉菌属最高产酶水平。     

产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的选择

采用摇床液体发酵试验,对18个菌株产纤维素酶进行滤纸酶活性、CMC酶活性、β-葡萄糖苷酶活性测定,筛选出1株产纤维素酶活性较高的菌株(C真3),并通过正交试验,确定该菌株的最优产酶条件.结果表明,最佳组合条件是液体发酵时间7d,摇床培养温度30℃,起始粗酶发酵培养基pH值5.5.