正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2 、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系.结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2 μL 10譖CR buffer、60 ng模板DNA、Mg2 1.50 mmol/L、dNTP 260 μmol/L、引物0.25 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20 μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2 浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据.     

狗牙根SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

利用正交设计,从Mg2 、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4种因素3个水平以及不同的模板DNA浓度来优化狗牙根SRAP-PCR反应体系,并对引物进行了全面筛选。狗牙根SRAP-PCR优化反应体系结果为:2μL 10×buffer4、0 ng模板DNA、Mg2 1.25 mmol/Ld、NTP 260μmol/L、引物0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U,总体积20μL。运用该结果从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物34对。优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用SRAP标记技术进行狗牙根遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础。     

海雀稗SRAP-PCR分子标记体系优化及引物筛选

以4个代表性海雀稗（Paspalum vaginatum）种质的叶片DNA为模板,采用L₉（3⁴）正交试验设计,对影响海雀稗SRAP-PCR反应的Mg²⁺、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶的用量进行了优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增的影响,以确定适合海雀稗的SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明：海雀稗SRAP-PCR最佳反应体系为10×PCR buffer 1 μL、模板DNA50 ng、Mg²⁺2.5 mmol·L^-1、dNTP150 μmol·L^-1、引物0.4 μmol·L^-1、TaqDNA聚合酶1.0 U,总体积10 μL。利用该反应体系从100对引物中筛选出可扩增清晰条带的引物83对,在83对引物中选出多态性丰富的引物44对。SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选,为今后利用SRAP标记技术进行海雀稗遗传多样性研究、基因定位、遗传图谱的构建以及分子标记辅助育种提供技术支持。     

利用正交设计优化羊食道口线虫SRAP-PCR反应体系

本研究利用正交设计L16(4)对羊食道口线虫SRAP-PCR反应体系的4因素:Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物进行摸索。结果表明:各因素的不同水平对SRAP-PCR反应结果都有显著的影响,正交设计组合4中扩增的条带最清晰;羊食道口线虫SRAP-PCR最佳反应条件:最佳引物给合为Me1/Em7,最佳反应体系为25μL:2.5μL 10×PCR buffer、20 ng模板DNA、Mg2+(25 mmol/L)3μL、dNTPs(2.5 mmol/L/μL)3μL、引物(10 pmol/μL)4μL、rTaq DNA聚合酶(5U/μL)0.2μL、灭菌ddH20补足。本研究结果为进一步采用SRAP技术来研究食道口线虫遗传进化奠定了坚实基础。     

杂花苜蓿SRAP-PCR反应体系的正交优化

利用正交设计L₁₆(4⁵)对杂花苜蓿(Medicago varia Martin.)SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg₂⁺、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验,旨在建立一套适用于苜蓿属(Medicago L.)种质资源的SRAP标记技术体系。结果表明:各因素对PCR反应结果都有显著影响,由F值可知,dNTP的量对反应结果影响最大,其次是Taq酶的量,模版DNA浓度的影响最小,各因素水平的变化对PCR反应的影响依次为:dNTP>Taq酶>Mg₂⁺>引物>模板DNA;筛选出各反应因素的最佳水平,建立杂花苜蓿SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:dNTP 2μL(0.20 mmol·L^-1),TaqDNA聚合酶0.3μL(1.50 U),Mg₂⁺3μL(1.50mmol·L^-1),上、下游引物各1μL(0.40μmol·L^-1),50ng模板DNA1μL,10×PCR buffer 2.5μL(不含Mg₂⁺)。这一优化体系的建立,为今后利用SRAP标记技术进行苜蓿属植物遗传图谱构建、遗传多样性分析及种质资源鉴定等研究奠定了技术基础。     

红毛丹ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

红毛丹ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选     

草地早熟禾愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

通过多因子的正交试验,筛选出草地早熟禾Poa pratensis Baron品种的最适愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D(1 mg/L) 6-BA(0.1 mg/L) CuSO4(3 mg/L) 酸水解酪蛋白CH(1 g/L),各因子影响程度为2,4-D＞CuSO4＞CH＞6-BA.对于Midnight品种,最适愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D(2 mg/L) 6-BA(0 mg/L) CuSO4(3 mg/L) CH(1 g/L),各因素影响程度为2,4-D＞CH＞CuSO4＞6-BA.通过用所得培养基进一步诱导比较,证明通过正交设计方法获得的结果为最佳诱导配方,用正交设计筛选愈伤组织诱导培养基是一种较好、可靠的方法.同时,在愈伤组织诱导试验中,建议使用胚性愈伤诱导率作为统计指标.     

正交设计优化山野豌豆ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系与引物筛选

 采用正交试验设计,以山野豌豆叶片ＤＮＡ 为模板,从Ｍｇ^２＋ 、ｄＮＴＰ、引物和ＴａｑＤＮＡ 聚合酶４种因素３个水平,对山野豌豆ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板ＤＮＡ 对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 最佳反应体系。结果表明,山野豌豆ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 最佳反应体系为：２μＬ１０×ＰＣＲｂｕｆｆｅｒ（不含Ｍｇ^２＋ ）、３０ｎｇ的模板ＤＮＡ、引物２．０μｍｏｌ／Ｌ、Ｍｇ^２＋ ２．０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＴａｑＤＮＡ 聚合酶１．５Ｕ、ｄＮＴＰ０．２ｍｍｏｌ／Ｌ,总体积为２５μＬ。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,ｄＮＴＰ 浓度的影响最小。运用该体系对３份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从９８对ＳＲＡＰ 引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的２０对引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为ＳＲＡＰ分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础。     

航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系的优化以及引物的筛选

航天育种的变异频率高、变异幅度大、有益变异多、稳定性强,优势明显。依据正交试验设计原理,设计了用正交试验和细调正交试验来确定航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系中各成分的浓度,从dNTP、Taq酶、Pri mers、Mg2+4种因素对航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系进行了优化,得到适合航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR最佳反应体系,即25μL的反应体系中含有dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA聚合酶2U、引物0.7μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、以及10×buffer和60 ng模板DNA。在试验确定最佳反应体系基础上,对17对SSR引物进行筛选,选出6对扩增条带信号强、背景清晰的引物。     

早熟禾ISSR反应体系的优化

以早熟禾基因组DNA为模板.利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Mg2+、dNTP、Taq酶)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合早熟禾的最佳ISSR反应体系:25μl反应体系中1.25U Taq酶、1.5mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.5μl、0.4 mmol/L dNTP、1μl引物、1μl DNA模板.扩增程序为:94℃预变性3min;94℃变性30s,56.4℃退火30s,72℃延伸1min,循环35次;72℃延伸7min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带.     

本氏针茅SRAP PCR反应体系的建立及引物筛选

以本氏针茅（Stipa bungeana）幼嫩叶片为材料,建立适合本氏针茅基因组DNA提取的改良CTAB法,在此基础上采用正交试验设计和单因素分析相结合的方法,对本氏针茅SRAP PCR反应体系中的5个主要因素（DNA、Taq酶、dNTPs、Mg2+和引物）进行优化,旨在建立适合本氏针茅SRAP分析的反应体系。结果表明,在20 μL总的反应体系中各组分的加入量分别为：DNA（20 ng·μL-1）3 μL、Taq DNA酶(5 U·μL-1)0.2 μL、dNTPs（2.5 mmol·L-1)1.4 μL、引物（10 μmol·L-1）1.0 μL、Mg2+ (25 mmol·L-1)2.0 μL、10×Buffer 2.5 μL、ddH2O 8.9 μL。体系验证和引物筛选试验表明,该体系适于本氏针茅遗传多样性分析,该体系的建立可为本氏针茅种质资源遗传多样性研究和黄土高原植被恢复及生态建设提供理论基础。     

山东中西部地区草地早熟禾适用品种评价

1998－2000年对22个草地早熟禾品种特性进行对比试验。经过对供试草种的幼苗活力、遗传色、叶片质地、抗病性、综合质量等评价分析。结果表明：Ascot和Midnight的幼苗活力最好，Cacne和Alene最差；Midnight、Cynthia和Odyssey遗传色最深，Barrtitia、Cacne、Baronic遗传色最浅；Ascot,Alene,America,Cynthia,Bartitia,VB5649,Nuglade,Impact的叶片质地最细，Abbey,Cannon,Nottingham,Baronie的叶片质地最粗；Award、Nuglade、Ascot抗病性最好；Baronie的绿期最长，Award绿期最短；Impact、Midnight、Nuglade缩坦匀衡且评分较高，是山东省及周边地区重点发展的草地早熟禾品种。     

草地早熟禾的选育研究与利用

内蒙古畜牧科学院草原所自 1985年以来 ,对从荷兰、美国、瑞典等国家引进的草地早熟禾 11个品种和国内采集的野生种进行了引种驯化 ,筛选出了瓦巴斯、凯达布鲁克茅 2个品种适应内蒙古地区的气候特点 ,是适宜推广种植的优良品种。利用国内野生种采用单株选择方法培育出了大青山草地早熟禾品种 ,它较原始群体抗性增强 ,叶量增加。目前已有较大的推广利用面积     

草地早熟禾引种适应性研究

2000～2001年在贵州独山对引进的23个草地早熟禾不同品种进行比较试验。结果表明:有5个品种的适应性和综合坪用性状表现良好,可以在本地区及类似生态区推广。     

草地早熟禾愈伤组织诱导及植株再生

以成熟种子和胚轴为外植体诱导草地早熟禾愈伤组织,比较草地早熟禾四个品种的愈伤诱导情况和不同6-BA浓度、愈伤年龄等因素对愈伤组织分化能力的影响。结果表明:成熟种子的出愈率与胚性愈伤诱导率均高于胚轴;MS 2,4—D(2mg/L) 6-BA(0.1mg/L)培养基为草地早熟禾Mardona品种较为合适的愈伤培养基,其诱导率为58.3%;MS BA(3mg/L) KT(0.2mg/L)为较为适合的分化培养基,再生率高达70%;随着继代次数的增加,草地早熟禾分化能力能够继续保持。选择致密、易碎、生长迅速的愈伤继代能够保持草地早熟禾的胚性,可以为遗传转化提供长期良好的植物材料。     

草地早熟禾无融合生殖及其育种利用研究进展

介绍了无融合生殖的类型及意义,并从形态学、遗传机制、育种利用以及激素调控4个方面概述了草地早熟禾无融合生殖的最新研究进展。     

品种及施肥对草地早熟禾种子产量要素和产量的影响

采用5因素混合正交组合设计方案,连续2年对6品种草地早熟禾Poa pratensis种子生产进行研究,结果表明:品种男爵(Baronie)和公园(Park)在酒泉进行种子生产具有一定的优势;种子最高产量分别是584和537 kg/hm2;两品种施肥管理是施肥时期均为春季施1/2 上年秋季施1/2,施氮量均为90 kg/hm2,品种Baronie施P2O5量为120 kg/hm2,Park施P2O5量为90 kg/hm2。     

津奥啉诱导草地早熟禾雄性不育的初步研究

通过津奥啉(SC2053)化学杀雄剂诱导草地早熟禾雄性不育试验的结果表明:供试的3个草地早熟禾品种在生育期幼穗长0.5～1.2cm时分别喷施剂量为5ml/L,6ml/L和7ml/L的SC2053化学杀雄剂,山峰草地早熟禾雄性不育率分别为90%,94%和97%;公园草地早熟禾分别为98%,100%和100%;巴润草地早熟禾分别为95%,98.5%和100%。除在7ml/L的剂量下,巴润草地早熟禾的小穗数与其他处理差异显著外,3个供试品种在不同剂量下穗长与小穗数差异均不显著。