对虾病毒的分离纯化和检测方法研究进展

对虾病毒的研究始于本世纪70年代［Couch1974］,全世界现已发现的对虾病毒至少在18种以上［陈细法等1997］。自1993年我国沿海地区暴发大面积养殖对虾病毒性流行病以来,病毒病的不断发生与传播已给我国养虾业造成了空前的危害,全国养殖对虾产量从1992年的220000t跌至1993年的87000t和1994年的53000t［石拓等1998］。1995～1997年养殖对虾的产量仍在低水平线上徘徊。时至1998年6月上旬,在未采用对虾病毒病综合防治技术［WangAL和WangWN1996］的大部分养虾区,当养殖对虾体长达到30～4Omm时即纷纷死亡。虾病不仅未随时间的推移有所减…     

对虾病毒的分离纯化和检测方法研究进展

对虾病毒的研究始于本世纪70年代［Couch1974］，全世界现已发现的对虾病毒至少在18种以上［陈细法等1997］。自1993年我国沿海地区暴发大面积养殖对虾病毒性流行病以来，病毒病的不断发生与传播已给我国养虾业造成了空前的危害，全国养殖对虾产量从1992年的220000t跌至1993年的87000t和1994年的53000t［石拓等1998］。1995～1997年养殖对虾的产量仍在低水平线上徘徊。时至1998年6月上旬，在未采用对虾病毒病综合防治技术［WangAL和WangWN1996］的大部分养虾区，当养殖对虾体长达到30～4Omm时即纷纷死亡。虾病不仅未随时间的推移有所减…     

牛初乳IgG的特性及检测方法

主要介绍了牛初乳中IgG的理化特性和生理功能及其在胃肠内的抗降解特性,同时介绍了牛初乳IgG的提取及常用检测方法,并对牛初乳IgG作为保健产品和医疗药品基料的趋势作出展望。     

DHA来源及分离纯化方法的研究进展

二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)是具有重要生理功能而人体自身又无法合成的一类多不饱和脂肪酸。通过外源补充DHA可提高人体自身免疫机能、增强体质。本文主要就DHA的原料来源和分离纯化方法进行了综述,并提出了DHA相关领域需深入研究的几个问题,以期为将来开展DHA相关研究提供参考。     

蛙皮抗菌肽活性检测方法的筛选及其分离纯化

对传统抗生素的活性测定方法进行了比较及改进,建立了蛙皮抗菌肽的活性测定方法-TTC微量稀释法;利用Sephadex G25凝胶层析分离抗菌肽粗品获得一个活性组分命名为G5,利用TTC微量稀释法测定活性组分G5抑制大肠杆菌的MIC是80μg/mL、抑制铜绿假单胞菌的MIC是20 μg/mL、抑制金黄色葡萄球菌的MIC是80 μg/mL;活性组分G5再经凝胶HPLC分离纯化获得两个活性组分Ⅰ和Ⅱ,组分Ⅰ和组分Ⅱ再分别经过RP-HPLC分离纯化获得两个色谱纯的活性组分命名为RanaⅠ和RanaⅡ.     

大鼠胰岛的分离、纯化与评价方法改良

【目的】简化胰岛的分离纯化方法,建立完善的胰岛评价体系。【方法】采用Ⅴ型胶原酶分离出Spra-gue-Dawley大鼠胰岛,并采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛。纯化的胰岛通过双硫腙(Dithi-zone,DTZ)染色进行计数及纯度检测,丫啶橙(AO)-碘化丙啶(PI)双染色法确定分离细胞的存活率,体外葡萄糖刺激释放胰岛素试验检测胰岛的分泌活性。采用Adobe Photoshop程序改进了常规的胰岛计数方法,并进行胰岛标准计数。【结果】平均每只成年Sprague Dawley大鼠的胰腺,可获得(3 840±24)当量数(IEQ)纯化胰岛,纯度可达到90%,细胞平均存活率达92%。【结论】采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法及基于Adobe Photoshop程序的标准计数方法,可分别用于大鼠胰岛分离纯化和计数。     

农用抗生素分离纯化的研究进展

目前我国农用抗生素大规模生产的品种主要有井冈霉素、阿维菌素和赤霉素,而未能大规模生产的抗生素共同存在的问题是技术不成熟,生产成本较高,进而限制了其在生产实践中的应用;另外我国农用抗生素研究的人力、物力过于分散.对一些优良品种投入太少,也是造成大规模生产的农用抗生素品种少的主要因素.阐述了国内外农用抗生素有效成分分离、提取、纯化技术特点与发展趋势.     

乳酸链球菌抗菌肽的分离纯化及生物活性检测

通过凝胶过滤层析及制备型高效液相色谱法,从乳酸链球菌发酵液中筛选分离出了具有广谱抗菌活性的物质,利用金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠杆菌(ATCC25922)、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、耶尔森菌、粪肠球菌对该活性物质的抗菌谱及杀菌机理进行了研究。结果表明:经过分离纯化,得到的较纯的活性物质为乳酸链球抗菌肽,该物质除了对绿脓杆菌没有杀伤作用,对其他5种细菌均具有杀伤作用。透射电镜观察结果显示,金黄色葡萄球菌(ATCC25923)经抗菌肽处理后,细胞出现破损或肿胀,有部分细胞内容物外泄,并伴有细胞质稀释的现象,细胞膜界限模糊不清,细胞膜甚至完全溶解。由于细胞内容物外渗,最终导致菌体死亡。     

鸡SIgA的纯化鉴定及免疫小鼠效果的观察

为了探索鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)分离、纯化及鉴定方法,以新鲜的鸡胆汁为材料,采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯鸡SIgA,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定和纯化SIgA重链,用纯化的鸡SIgA重链蛋白免疫Balb/C小鼠。结果表明,SIgA重链分子量为67~70kD,轻链为26~28kD。免疫Balb/C小鼠抗血清针对SIgA重链的间接ELISA效价可达1∶16000。为进一步研究SIgA生物学特性、单克隆抗体制备和黏膜免疫状况检测提供了技术支持。     

蛋黄卵磷脂的分离纯化研究进展

该文介绍了卵磷脂的理化性质、生理功能,综述了国内外对蛋黄卵磷脂的分离提取和精制方法及其在食品中的应用等方面的研究进展,展示了其在食品、药品等研究开发方面的广阔前景.     

奶牛初乳SIgA的提纯与电泳分析

为了建立提取奶牛初乳中SIgA的方法，本试验取分娩当日的奶牛乳汁，经10000 r/min离心10min，0.2mol/L（PH=6.0）PBS透析，上清液加0.06 mol/L硫酸锌处理后，调PH值为6.8-6.9，加入饱和硫酸铵，取沉淀溶于水，并在0.02mol/L（PH=8.0）PBS中透析至无NH4+，样品浓缩后上DEAE Sepharose (Fast Flow)柱，用0.02mol/L（PH=8.0）至0.3mol/L（PH=8.0）PBS梯度洗脱；收集峰蛋白上葡聚糖凝胶-200层析柱，用0.01mol/L（PH=7.4）PBS洗脱；收集出现蛋白峰的洗脱液，经SDS-PAGE电泳鉴定，为SIgA单体。经初步测定奶牛初乳中SIgA含量为3.47mg/ml。本试验已成功建立提取奶牛初乳中SIgA的方法。     

牛初乳中免疫因子研究进展——以长江中下游油菜和水稻种子生产商为例

对牛初乳中富含的免疫球蛋白、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、溶菌酶等多种免疫因子的稳定性、分离纯化技术以及相应生物学功能的研究进展进行了综合分析,为牛初乳进一步开发提供参考。     

生姜蛋白酶的部分纯化及酶学性质研究

对姜块中的生姜蛋白酶进行部分纯化，并对其主要酶学性质进行了研究。以酪蛋白为底物时，其最适pH值为6.0最适温度为60℃，30℃下保温30min，酶活力不变，高于72℃酶活力迅速下降，60℃、75℃、80℃时，该酶的半衰期分另为17、12和3min，Km值为0.270mmol/L；二硫苏糖醇（DTT）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）对酶有激活作用；对氯汞苯甲酸（PCMB）、氯化锌、硫酸铜等对酶有抑制作用；氯化钙、硫酸镁、三氯化铝对酶活影响不大。     

四种方法对鲢血清免疫球蛋白的纯化及分子量测定

采用mannan-binding protein(MBP)、TG及免疫亲和层析法和饱和硫酸铵沉淀法纯化鲢血清免疫球蛋白IgM,并比较了4种纯化方法的纯化效果.SDS-PAGE显示鲢血清免疫球蛋白的重链和轻链分子量分别为76.4 kD和27.2 kD,推算其总分子量约828.8kD     

牛eIF5基因原核表达与蛋白纯化

研究应用PCR方法扩增牛e IF5基因编码序列,通过Eco RⅠ和SalⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-e IF5,并转化大肠埃希菌BL21。酶切和测序鉴定正确后,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化,SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-e IF5构建成功,Western Blot证实融合蛋白大量表达,纯化后获得GSTe IF5融合蛋白,为深入研究牛e IF5蛋白功能奠定基础。     

利用微生物净水研究进展

近年来中国近海渔业水域环境污染和生物栖息生境破坏现象日益严重,海水富营养化程度趋势加剧, 严重影响了海洋生态平衡,据调查,氮,磷NP污染是造成海水富营养化的主要因素,微生物作为水域生态系统中 的分解者,可对富营养化物质进行分解吸收,驱动着水体中氮,磷等元素的生物化学循环利用微生物净水技术和 其他技术相结合的新型技术在研究和实践中被广泛应用,将微生物净水技术广泛应用于富营养化海域,是一种有效 的防止海水富营养化措施,对国内外微生物净水的研究进展进行综述,以期为近海富营养化渔业水域的微生物净化, 海洋生态修复和近海渔业发展提供参考.     

牛乳酪蛋白酶解物的分离纯化及抗菌肽乳基料的制备研究

【目的】分离纯化牛乳酪蛋白酶解物,检测酶解物及其分离组分的抑菌活性,并制备抗菌肽乳基料。【方法】从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶中筛选一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,将其酶解产物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)为指标,分析酶解物和分离组分的抑菌活性。【结果】(1)木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白4.5h,其酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。(2)大孔吸附树脂将牛乳酪蛋白酶解物分离成4个组分,其中以体积分数75%乙醇洗脱组分的抑菌作用较强。(3)凝胶过滤色谱将体积分数75%乙醇洗脱组分分离成4个色谱峰,其中A峰对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用较强,B峰对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,A峰和B峰经冷冻干燥后成功制备了2种抗菌肽乳基料。【结论】牛乳酪蛋白酶解物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,其分离组分的抑菌活性逐步增强,能够用于抗菌肽乳基料的制备。     

复方中药免疫球蛋白制剂的研制与应用

【目的】结合中药与免疫球蛋白对仔猪疾病的不同防治机理,进行复方中药免疫球蛋白制剂的制备及其初步应用研究,为猪血的综合利用与兽用免疫球蛋白类制剂的开发应用提供依据。【方法】以健康猪血为原料,从其中分离纯化免疫球蛋白;将免疫球蛋白与白头翁、三颗针、黄柏、苦参、苍术、益母草等6种中药提取物相结合,制备复方中药免疫球蛋白制剂,并对断奶仔猪进行初步应用研究。【结果】免疫球蛋白粗品、纯品中的IgG含量分别为658.33和955.33ng/mL,IgG的效价分别为1∶128与1∶64;纯品的IgG含量和效价与标准品接近,二者无显著差异(P0.05)。与中药制剂、免疫球蛋白制剂相比,复方中药免疫球蛋白制剂使断奶仔猪的头均日增质量分别提高了20.1%(P0.05)和19.3%(P0.05),料质量比分别下降了10.5%(P0.05)和8.4%(P0.05);28～42日龄,血清中的IgG含量显著高于其他试验组(P0.05)。【结论】分离纯化免疫球蛋白的方法可行;复方中药免疫球蛋白制剂能够显著提高断奶仔猪生产性能与机体免疫力。     

刀豆蛋白A纯化猪流行性腹泻病毒的研究

为开发一种新型高效、低成本的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗原纯化方法,本研究尝试了一种基于凝集素(刀豆蛋白A,Con A)的PEDV浓缩纯化方法。通过Con A与PEDV病毒粒子的特异性结合,形成Con A-PEDV复合物,然后通过低速离心和竞争性解离即可实现病毒纯化。结果表明:1)当Con A的使用浓度为80 μg/mL,室温作用2 h,4 000 r/min离心15 min时,纯化效果较佳;2)利用Tris-HCl缓冲液(pH 7,0.01 mol/L,内含200 mmol/L甲基-α-D-吡喃甘露糖苷和50 mmol/L NaCl)进行解离时,较PBS缓冲液有更高的解离效率;3)该方法病毒回收率大约为80%,总蛋白去除率可达90%。综上,本研究利用Con A纯化PEDV是可行的,为高质量PEDV灭活疫苗的研发奠定基础。     

水动力对生物膜净化性能影响的研究进展

在水处理领域中,生物膜起到了吸附、降解水体污染物的作用,可表征水体净化能力.研究水动力对水体生物膜净化功能的影响机制,可为提高生物膜净化性能、改善水体自净能力提供重要依据.从生物膜群落、形态结构及其传质能力等3个方面综述了近年来国内外对水动力影响水体生物膜净化性能方面的研究进展,并在此基础上提出了生物膜研究领域今后可开展的研究方向.