牛流行热亚单位疫苗的研究——Ⅴ.牛流行热病毒及亚单位疫苗抗原成分、活性的初步分析

试验证明,牛流行热病毒裂解疫苗(亚单位疫苗)对牛安全、有效,特别是在牛流行热大流行期间,应用亚单位疫苗进行紧急预防接种,迅速控制了本病的流行。本试验旨在通过对牛流行热病毒及其裂解(亚单位)疫苗抗原活性和成分分析,探讨疫苗的有效成分,为进一步研制稳定、高效的疫苗     

牛流行热病毒亚单位疫苗与G蛋白疫苗对牛免疫效力比较试验

为比较哈尔滨兽医研究所(HVRI)研制的牛流行热病毒(BEFV)亚单位疫苗(简称 HVRI 疫苗)与澳大利亚联邦科学工业组织(CSIRO)长袋实验室研制的 BEFV G 蛋白疫苗(简称 CSIRO 疫苗)交叉攻毒的保护力,于1991年9～10月在哈尔滨由两国科技人员共同进行了本项试验。现将结果报告如下。     

牛流行热病毒亚单位疫苗的研究 Ⅲ.亚单位疫苗在广州区域试验的初步观察

为防制牛流行热,我们研制出一种油佐剂亚单位疫苗,经实验室多批次试验证明安全,免疫效果良好。随于1988～1991年在广州燕塘牧场及云燕奶牛场进行了4年的区域试验。现将结果汇总如下。     

牛流行热病毒灭活疫苗的研究

我们研制的牛流行热病毒亚单位疫苗对牛安全、免疫效力良好,在生产实践中应用,对控制牛流行热的流行起到了显著作用。但亚单位疫苗的生产工艺要求较高,程序复杂,为简化生产程序,省去制备亚单位疫苗抗原的两次超速离心和超声波裂解步骤,直接将牛流行热病毒 CHK_(21)细胞培养液用 Triton X-100溶液裂解灭活,制成牛流行热病毒灭活疫苗。现将灭活疫苗的制备、对牛的安全性和免疫原性、免疫期、保存期以及区域性试验等报告如下。     

牛流行热病毒亚单位疫苗的研究 Ⅱ、亚单位疫苗对牛的免疫期和保存期试验

继1988年发表亚单位疫苗对牛的安全性和免疫试验之后,我们又以该疫苗对牛进行了免疫期、保存期试验。现报告如下。     

传染性牛鼻气管炎亚单位疫苗免疫原性的研究

用犊牛睾丸细胞培养传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV），反复冻融，差速离心提取病毒，用Triton X-100溶解，超声波处理，制成IBRV TritonX-100亚单位抗原，经SDS－PAGE电泳，其分子量在176kD-53kD之间，其中有6条清晰的蛋白带。该抗原与一定比例的白油－司盘佐剂乳化，接种育成年，经间接ELISA检测，可使接种的育成牛产生高效价的血清抗体（OD492mm=1.57)。2种不同剂量（80mg/头，40mg／头）的IBRV亚单位疫苗接种育成牛，体内抗体效价相差不显著，抗体可在体内持续12周，用IBRV TrionX-100亚单位疫苗2次接种育成牛，其体内抗体效价显著高于用灭活疫苗2次接种育成牛体内的效价。试验结果表明：提取的IBRV多肽制作的亚单位疫苗具有良好的免疫原性，且抗体持续时间较长。     

牛流行热亚单位油佐剂苗免疫效果观察

牛流行热是一种呈周期性发生的严重影响牛生产性能的疾病,目前尚无确实可靠的预防方法.我们在1990年底、1991年初对本县部分奶牛进行了牛流行热抗体的检测,结果发现,所检的牛全部反应阳性.而且离上次流行期已间隔7年,所以,我们认为在近期内可能会发生牛流行热.为此,我们及时开展了牛流行热亚单位油佐剂苗免疫效果的观察,以便为今后预防本病积累经验.一、材料和方法1、试验牛:在本县八个奶牛场中随机抽取646头牛注射疫苗,其它2764头作对照.2、疫苗:由哈尔滨兽医研究所提供,批号91042.牛流行热指示毒:由哈尔滨兽医研究所提供,批号0170VFB.牛流行热阳性血清、阴性血清:由哈尔滨兽医研究所提供,批号分别为91061、91063.BHK-21细胞,由卫生部药品生物制品检定所提供.     

猪瘟E2亚单位疫苗研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的危害极大的一种传染病,具有高度的传染性和致死性,利用疫苗控制该病的流行是世界各国使用的广泛策略。E2亚单位疫苗具有安全性好、稳定性强的特点,且具有自然感染和接种疫苗的抗体差异,是未来新型疫苗研究的方向之一。本文综述了E2亚单位疫苗的保护效力、影响因素及未来发展方向。     

猪圆环病毒Cap蛋白亚单位疫苗研究进展

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒(PCV)引起的猪的一种多系统功能障碍性疾病,预防该病的有效方法是采用疫苗进行预防接种,除了传统的灭活疫苗外,国内外学者正在积极研究开发PCV2的亚单位疫苗、DNA疫苗以及基因工程活载体疫苗,本文结合国内外对猪圆环病毒亚单位疫苗的研究结果,以抗原蛋白表达系统分类对其研究情况作一综述。     

转移因子对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响

<正>为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响,将猪脾脏研磨,并反复冻融研磨液,离心获取冻融上清,用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后,以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合,制成TF–Cap疫苗,并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组,首次免疫后每隔     

猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫攻毒保护效力试验

为了评价猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫效果,本试验在试验猪场用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟减毒活疫苗分别免疫供试猪,并定期测定猪瘟病毒抗体。饲养至24周龄时,每组随机选取5头运至检验动物房,用猪瘟石门系强毒进行人工感染。根据试验猪攻毒后临床症状、病理剖检和猪瘟抗原、抗体检测结果,比较分析了猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫保护力。结果显示,对照组的试验猪攻毒后12 d内全部死亡,并表现出典型的猪瘟症状和病理变化;免疫猪全部存活,未见猪瘟症状和肉眼可见的组织器官病变,血样的猪瘟抗原ELISA检测结果均为阴性。结果表明,猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫1次后,24周仍能为靶动物提供可靠的免疫保护效力,与猪瘟减毒活疫苗2次免疫的保护效力相当。     

猪瘟E2亚单位疫苗攻毒保护效力研究

猪瘟E2亚单位疫苗是一种用杆状病毒载体系统表达的猪瘟病毒E2重组蛋白,与油佐剂按比例混合、乳化制成的新型灭活疫苗,可区分感染和接种疫苗动物,有助于猪场的猪瘟净化。为评价该疫苗免疫效力,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟兔化弱毒疫苗(传代细胞源)分别免疫靶动物,二免后2 w用强毒人工感染试验动物,连续测温16 d,并记录试验猪临床症状,结合病理剖检、组织器官病毒含量测定结果,比较不同疫苗保护力。结果显示:对照组猪攻毒后体温高热稽留,表现出典型猪瘟症状,攻毒后11 d内5/5发病死亡,尸检剖检呈典型猪瘟病理解剖学变化;免疫猪全部健活,未表现任何猪瘟症状,组织器官剖检无病变。结果表明,猪瘟E2亚单位疫苗与活疫苗保护效力相当,可为靶动物提供可靠的免疫保护效力。     

猪瘟E2基因工程亚单位疫苗使用效果分析

正猪瘟俗称"烂肠瘟",又称"猪霍乱",是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起,一年四季均可导致不同年龄、性别、品种的猪和野猪感染发病,具有高度传染性和致死性,在养猪生产中猪瘟的防控至关重要。猪瘟E2基因工程亚单位疫苗可以有效改善目前猪瘟的防控现状。从猪瘟E2基因工程亚单位疫苗免疫前后检测结果得出,猪场阳性率从55.88%升高到     

马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗小鼠免疫试验

为获得控制猪链球菌病安全高效的疫苗，本试验进行了马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗的研制。应用热酸法提取马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白，并分别采用羟基磷灰石（HAT）层析和冷酒精沉淀法进行纯化，结果得到较纯的类M蛋白。用热酸提取的粗制类M蛋白、2种纯化的类M蛋白及全菌苗免疫小鼠，结果保护率分别为92％（11／12）、100％（12／12）、100％（12／12）和83％（10／12），表明类M蛋白亚单位疫苗有进一步开发的必要。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因工程亚单位疫苗免疫保护试验

为了探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因工程亚单位疫苗的免疫保护效果,试验利用大肠杆菌表达并纯化了重组PRRSV N蛋白,添加佐剂制成亚单位疫苗进行免疫保护试验。试验猪分为2个不同佐剂制备的PRRSV N蛋白亚单位疫苗免疫组,1个PRRSV TJM-F92株减毒活疫苗免疫组和1个攻毒对照组。首免5周后,用PRRSV NVDC-JXA1强毒株攻击,观察临床表现并在攻毒后21 d对试验猪进行剖检。结果表明:首免3周后2个亚单位疫苗组和减毒活疫苗组抗体全部转阳,组间无显著性差异(P0.05);攻毒后PRRSV N蛋白亚单位疫苗免疫1#组有2/3的猪只、2#组有1/3的猪只的临床症状、体征和解剖病变较攻毒对照组猪只轻微,转归较好且成活,但保护作用不及PRRSV TJM-F92株减毒活疫苗组;剩余的亚单位疫苗免疫1#组1/3的猪只和亚单位疫苗免疫2#组2/3的猪只,与攻毒对照组猪只一样表现为比较典型的PRRS症状,并在8~12 d内死亡。说明PRRSV N蛋白亚单位疫苗能够引起机体的体液免疫反应,具有部分保护作用,但不能提供完全的保护,单独使用达不到减毒活疫苗的效果。     

亚单位疫苗在猪病防治中的应用研究进展

亚单位疫苗是新型疫苗的研究热点和开发方向。通过综述亚单位疫苗在猪病防治中的应用研究进展,以期为广大科研工作者及养殖场户对亚单位疫苗的研究和猪病防治提供参考。     

牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻每后，牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明，灭活苗免疫后，牛的CD4^ 显著升高，可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关，攻毒后，γδT细胞均显著上升，免疫组在攻毒后3周仍保持在相当的高水平，IL－2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高，而CD8^ 细胞没有明显变化。     

牛新孢子虫NcSAG1基因工程亚单位疫苗的免疫试验

为了解新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程亚单位疫苗对实验动物的免疫效果,本试验提取延边黄牛新孢子虫野毒株基因组DNA,用PCR技术扩增新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,将Western-blot鉴定具有免疫活性的重组蛋白与弗氏佐剂混合制备NcSAG1基因工程亚单位疫苗,免疫BALB/c小鼠,应用间接ELISA方法测定体液免疫水平,应用流式细胞技术测定细胞免疫水平,以此评价疫苗对实验动物的免疫应答反应。结果显示,制备的NcSAG1基因工程亚单位疫苗免疫BALB/c小鼠后,在三免后第3天时,检测抗体的OD450nm值达0.688;CD4+/CD8+值达3.650,均显著高于重组蛋白免疫组和PBS对照组,说明制备的基因工程亚单位疫苗能够提高实验动物的体液免疫和细胞免疫水平。本试验为牛新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程亚单位疫苗的深入研究奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征植物亚单位疫苗的免疫学研究

目前,防控猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)主要采用灭活疫苗和弱毒活疫苗。然而,灭活疫苗的效率十分有限,弱毒活疫苗的安全问题又令人担忧,所以研制新型疫苗非常必要。本试验尝试使用转基因植物这种经济有效且有可扩展性的体系表达和传递病毒蛋白,并制成PRRS口服亚单位疫苗。通过转基因技术利用玉米愈伤组织表达PRRSV的病毒膜蛋白M蛋白。小鼠口服转基因植物组织可诱导体内产生血清抗体和肠系膜抗原特异性抗体,且血清抗体和黏膜抗体表现出病毒中和活性。终免后血清和粪便中的中和抗体滴度可分别达到6.7和3.7。接种动物脾细胞内也可检测到PRRSV特异性IFN-γ反应。结果表明,转基因玉米是一种有效的PRRS亚单位疫苗产品,口服后可激发机体产生抗PRRS的系统免疫应答和黏膜免疫应答。     

乙型脑炎病毒NS1蛋白亚单位疫苗制备及其免疫效果评价

为制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)NS1蛋白亚单位疫苗并评价其免疫效果，将JEV NS1基因克隆至杆状病毒表达载体，构建重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染High5细胞，收集培养基上清，并用镍柱亲和方法纯化NS1蛋白。将纯化的NS1蛋白与弗式佐剂制成亚单位疫苗，并通过小鼠免疫接种和攻毒模型评价该疫苗的免疫效果。结果表明，50,100,200μg/只剂量的亚单位疫苗免疫组的保护率分别为70%,80%,90%;同时，较非疫苗免疫组，NS1亚单位疫苗免疫可以显著降低小鼠脑组织中的病毒载量和炎症因子的表达，减轻小鼠的神经症状和脑部病理损伤。以上结果表明NS1蛋白作为亚单位疫苗具有较好的免疫保护效果，具有开发为JEV新型疫苗的潜力。