2个野扁桃自交不亲和SFB基因全长的克隆与序列分析

为给野扁桃的遗传改良和自交不亲和机制的进一步研究提供理论依据,以新疆野扁桃花药为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆野扁桃自交不亲和性花粉特异性决定因子编码基因SFB全长序列。采用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找开放阅读框,CDD分析蛋白保守结构域,Prot Param分析蛋白理化性质,TMHMM预测蛋白跨膜区,Signal P预测蛋白信号肽,Sub Loc预测蛋白亚细胞定位,SOPMA分析蛋白二级结构,DANMAN进行氨基酸多序列比对,MEGA6进行系统进化分析,Prot Fun预测蛋白功能。结果表明:克隆到的Pt SFB16基因和Pt SFB17基因属于F-box基因家族,与其它多种植物的SLF/SFB基因的序列相似度为88%,推导的氨基酸序列均具有F-box蛋白典型结构;Pt SFB16基因ORF长1 146 bp,编码381个氨基酸,Pt SFB17基因ORF长1 131 bp,编码376个氨基酸;预测2个SFB蛋白均为略显亲水性、不稳定的细胞质蛋白,二级结构均以α-螺旋,延伸链和无规则卷曲为主,SFB/SLF蛋白在蔷薇科李属植物中具有较高的系统进化一致性,种间同源性可能大于种内同源性,SFB蛋白可能的功能主要有辅助因子生物合成、能量代谢和裂合酶。     

'凯特'与'新世纪'杏自交不亲和S-Rnase基因的检测及克隆

近几年来,植物自交不亲和性(self-incompatibility: SI)的分子机理研究取得了很大进展(Sassa et al.,1996; 张绍铃等,2001; Wang et al.,2003),一般SI被分为孢子体型自交不亲和性 (sporophytic SI:SSI)和配子体型自交不亲和性(gametophytic SI:GSI)两大类.     

中国梨新SFBB-gamma基因的鉴定及序列分析

通过分子生物学方法分离鉴定了4个新的梨SFBB-gamma基因,并对其序列进行了生物信息学分析。SFBB-gamma基因的特异性引物对4个梨品种进行PCR扩增结果表明,4个品种均扩增出一条1 250 bp左右的条带;通过DNA测序和生物信息学分析方法从‘鸭梨’、‘红皮酥’、‘中梨二号’和‘兰州软儿’等梨品种中分离鉴定了SFBB21(EU422961)、SFBB26(EU422961)、SFBB31(EU422959)、SFBBd-gamma(EU422962)基因。聚类分析中发现,仁果类SFBB基因和核果类和SFB基因明显的分成两类,仁果类中梨SFBB基因和苹果SFBB基因又各分成一类,这与物种的亲缘关系相符合。新鉴定的梨SFBB基因中从白梨中分离鉴定的SFBB21-gamma基因与梨其他SFBB-gamma基因的亲缘关系最远。该研究为梨自交不亲和机理研究和遗传改良提供理论基础。     

梨自交不亲和新基因S12-RNase的分离鉴定及序列分析

植物自交不亲和性(self-incompatbility,简称SI)是植物生殖过程中的一种普遍现象(Hiscock et al.,1996;Andrew et al.,1996).     

新疆扁桃结实率低的生理与分子机制

为给生产上提高扁桃产量和品质而制订科学的栽培管理措施提供理论依据,针对新疆扁桃结实率低的问题,就扁桃的花芽分化、授粉受精、坐果和幼果发育的生物学特性及树体营养、激素等相关影响因素进行了3个国家自然科学基金项目的研究,结果基本摸清了新疆扁桃受精不亲和的生物学特性和分子机理及结实率低的生理机制;通过对新疆扁桃不同品种、类型...     

7个砂梨品种S基因型的确定及1个新S-RNase基因的分离鉴定

砂梨是重要的经济树种,表现出典型的配子体自交不亲和性,在生产和育种上需鉴定品种的S基因犁以确定品种间的亲和性.选取7个砂梨品种为试验材料,使用梨S-RNase(S基因)通用引物进行基因组PCR扩增,产物通过1.8%的琼脂糖凝胶电泳分析.结果表明:‘楚比香'等4个品种中产生了预期的2条电泳条带,而其他3个品种都只产生1条带产物,通过6%的聚丙烯酰胺电泳对该3个品种的PCR产物进一步分析,结果产物被成功分离.将7个品种中分离到的14个条带分别回收、克隆、测序及序列分析,从中鉴别出10个具有梨S-RNase基因序列特征的S基因,其中‘政和大雪梨'中494 bp的基因片段被鉴定为新的S基因,暂命名为S43-RNase(GenBank接受号EF566873).RT-PCR试验证明S43-RNase仅在化柱中特异表达,符合S-RNase的表达特征.通过比对S43-RNase的基因组序列和cDNA序列,确定其内含子大小为294 bp.在推导氨基酸水平上,S43-RNase与苹果亚科其他S-RNase表现出65%～92%的相似性.     

菘蓝自交不亲和性鉴定

通过亲和指数法对菘蓝花期、蕾期自交亲和指数进行了测定，发现花期人工自交授粉平均亲和指数为0．11，花期天然自交授粉平均亲和指数为0．078，而蕾期人工自交授粉平均亲和指数为0．821。以上结果表明，菘蓝具有明显的十字花科植物的花期自交不亲和特性，可用来培育自交不亲和系，蕾期授粉有明显的亲和性，具备了较好的繁殖自交不亲和系原种特性，自交不亲和性作为菘蓝杂种优势利用制种将是一个较有效的育种途径。     

中国白梨S基因研究17个品种S基因型的确定和2个新S基因的鉴定

梨S基因型的确定对授粉品种的选择具有指导作用.采用PCR-RFLP检测、DNA序列分析和田间杂交试验,鉴定了两个新S-RNase基因,分别为S17-RNase和S21-RNase,同时确定了7个白梨品种的S基因型.S17-RNase和S21-RNase基因的内含子大小分别为142 bp和139 bp,HV区长度分别为16个和15个氨基酸,信号肽-P2的推导氨基酸长度分别为99个和98个氨基酸,信号肽大小均为27个氨基酸,C1大小均为11个氨基酸,C2大小均为12个氨基酸.白梨品种海棠酥、六瓣、恩梨、鸭梨、大核白、香椿、青梨等品种的S基因型分别为S1S12S19、S17S19、S1S19、S1S21、S16S19、S3S19、S19S19.该研究可为梨遗传改良和丰产栽培提供重要的理论依据.     

中国白梨S基因研究Ⅰ 7个品种S基因型的确定和2个新S基因的鉴定

梨S基因型的确定对授粉品种的选择具有指导作用.采用PCR-RFLP检测、DNA序列分析和田间杂交试验,鉴定了两个新S-RN ase基因,分别为S17-RN ase和S21-RN ase,同时确定了7个白梨品种的S基因型.S17-RN ase和S21-RN ase基因的内含子大小分别为142 bp和139 bp,HV区长度分别为16个和15个氨基酸,信号肽-P2的推导氨基酸长度分别为99个和98个氨基酸,信号肽大小均为27个氨基酸,C1大小均为11个氨基酸,C2大小均为12个氨基酸.白梨品种海棠酥、六瓣、恩梨、鸭梨、大核白、香椿、青梨等品种的S基因型分别为S1S12S19、S17S19、S1S19、S1S21、S16S19、S3S19、S19S19.该研究可为梨遗传改良和丰产栽培提供重要的理论依据.     

配子体自交不亲和基因产物作用机制研究进展

综述了配子体植物的自交不亲和基因产物作用机制的研究进展,并一一总结作图.在明确S基因产物活性之前,人们基于一些间接的证据提出了抗原抗体、蛋白质-糖等模式.实验证实S-核酸酶活性后,人们提出了膜受体和胞内抑制剂模式.近年来,又有人提出了更为完善的修正抑制子模式等其他作用模式.     

7个杏李品种花粉SFB基因的克隆鉴定

以美国杏李品种为试验材料,利用Prunus的SFB基因特异性引物,对7个杏李品种进行PCR扩增,并进行克隆、测序。采用生物信息学分析方法分离鉴定了‘恐龙蛋’等7个杏李品种的花粉SFB基因。PCR结果显示,‘风味皇后’、‘味帝’、‘味王’、‘风味玫瑰’、‘味厚’、‘味馨’、‘恐龙蛋’等7个品种均扩增出一条460 bp左右的片段;对PCR产物回收克隆后测序,并通过BLAST比对和生物信息学分析表明,‘风味皇后’、‘味王’、‘风味玫瑰’、‘味厚’、‘味帝’、‘恐龙蛋’等6个品种中克隆到了一个SFBh基因;‘风味皇后’、‘味王’、‘风味玫瑰’、‘味厚’、‘味馨’等5个品种中克隆到了一个SFBe基因;‘味帝’和‘恐龙蛋’中分离克隆了SFBb基因;‘味馨’中分离克隆了一个SFB2基因;故7个杏李品种的花粉SFB基因型鉴定为:‘风味皇后’、‘味王’、‘风味玫瑰’和‘味厚’等4个品种的花粉SFB基因型相同,为SFBeSFBh;‘味帝’和‘恐龙蛋’的花粉SFB基因型相同,为SFBbSFBh;味馨’的花粉SFB基因型为SFBeSFB2。     

杏花粉萌芽率与生命力测定及大棚杏花期授粉试验

杏树是一种投资少、易管理的果树 ,但存在着产量不稳的问题。这除与管理有关外 ,授粉授精不良是造成低坐果率的重要原因之一。大棚杏的花期 ,一般早于自然界 30～ 6 0天 ,天气比较寒冷 ,棚内杏花基本与外界隔绝 ,露地栽培条件下 ,能自然授粉丰产的机会又被剥夺。为此 ,研究杏树花粉的萌芽率与生命力及大棚杏花期授粉 ,从而提高座果率 ,是取得大棚杏高产稳产的重要措施之一。1　材料与方法1.1　不同品种的花粉萌芽率测定采集果实发育期短 ,已成功进行大棚栽培且已进入盛果期 (5年生 )的红荷苞、二花曹、车头杏、金星、红玉杏、白水杏、玛瑙杏…     

油桐桐酸合成酶基因克隆和植物表达载体构建

α-桐酸合成酶是控制亚油酸向α-桐酸(18:3Δ9cis,11trans,13trans)转化的关键酶。本研究以发育中的油桐种子为材料,利用改良TRIzoL法提取总RNA,并根据GenBank中已经登录的α-桐酸合成酶基因FADX的序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,克隆得到FADX基因全长cDNA,长度为1221bp。通过生物信息学分析结果表明,该序列5’端和3’端非编码区序列长度分别为13bp和47bp,含有一个开放阅读框(14～1174bp),编码386个氨基酸,含有典型的脂肪酸脱氢酶结构域。将所得基因经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建反义表达载体pBI121fadx。     

杉木木质素合成酶基因CCR的克隆和序列分析

以杉木(Cunninghamia lanceolata)茎叶为材料,根据已报道的肉桂酰辅酶A还原酶(Cinnamoyl-CoA reductase,CCR)基因保守区设计简并引物,采用RT-PCR结合RACE的策略克隆获得杉木CCR基因的全长cDNA(命名为CLCCR),该基因cDNA序列全长1 379 bp,具有一个975 bp的开放阅读框(Open Reading Frame,简称ORF),编码324个氨基酸,序列分析表明:杉木CCR基因核苷酸序列与已报道的欧洲云杉(Picea abies,CAK18610.1)CCR基因具有87%的相似性;与其他植物氨基酸序列聚类分析显示杉木与松科植物欧洲云杉、马尾松(Pinus massoniana)、火炬松(P.taeda)的亲缘关系较近。     

油茶氧化鲨烯环化酶基因序列分析

氧化鲨烯环化酶（oxidosqualene cyclase,OSC）是甾醇和三萜合成的关键酶之一。以油茶（Camellia oleifera）未成熟种仁为材料进行转录组分析,并鉴定出4个OSC基因,分别命名为CoOSC1/CoCAS、CoOSC2/CobAS、CoOSC3/CoLAS及CoOSC4/CoaAS,CoOSC1和CoOSC2为全长序列。 OSC系统进化树表明,CoOSC1为环阿屯醇合成酶、CoOSC2为β-香树素合成酶、CoOSC3为羊毛甾醇合成酶、CoOSC4为α-香树素合成酶。     

重庆樟树溃疡病病原菌的鉴定及序列分析

目的 为了明确重庆樟树溃疡病的病原菌种类。 方法 采集重庆市渝中区、北碚区和涪陵区的樟树溃疡病样品进行病原菌的分离与纯化,观察病原菌的形态学特征,对不同菌落形态代表菌株的rDNA-ITS、β-tubulin和EF1-α序列进行扩增和测序,构建系统进化树,并测定其致病性。 结果 从重庆不同地区采集的樟树溃疡病样品中共分离得到48份菌株,单菌丝纯化后得到68株纯化菌株,根据纯化菌株在PDA培养基上的培养特性及分生孢子特征,将其分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型3种类型。选取不同类型的代表菌株构建系统进化树,结果表明：这3类菌株分别为葡萄座腔菌属中的Botryosphaeria dothidea、B.parva和B.rhodina。致病性测定结果发现：所有菌株均能使樟树枝条产生黑色坏死病斑,且B.parva菌株的致病性最强,B.rhodina菌株的致病性次之,B.dothidea菌株的致病性最弱。 结论 重庆樟树溃疡病的病原菌为B.dothidea、B.parva和B.rhodina,其中B.rhodina和B.parva为引起樟树溃疡病的首次报道。     

黄皮LEAFY同源基因的克隆与序列分析

LEAFY(简写为LFY)同源基因是控制花分生组织形成的基因之一,并调控植物开花的时间(Weigel et al.,1992),是开花启动所必需的,处于成花相关基因网络中比较关键的位置,为转入生殖发育的中心调节剂,LFY基因不仅参与花分生组织属性的决定,还对抑制成花的EMF基因和TFLl基因起负调作用(王利琳等,2004).     

雷竹OsFCA同源基因的克隆与序列分析

分别以雷竹嫩叶的基因组DNA和幼穗的cDNA为模板,采用PCR方法扩增出长为490bp及262bp的片段。序列分析结果表明,该基因序列包含1个长为228bp的内含子。其编码区共编Ns86个氨基酸。其氨基酸序列与水稻中OsFCA、小麦中TaFCA的一致性分别为79．8％与69．9％,表明雷伢中可能存在调控开花的自主调控途径。     

苦杏仁中氨基酸的成分分析

经测定，苦杏仁中含有17种氨基酸，总量为26．725％，比对照巴旦杏仁高3．194％。其中含8种人体必需氨基酸7．922％；2种儿童必需氨基酸3．320％；甜味氨基酸6．093％及鲜味氨基酸9．259％。其含量均比巴旦杏仁略高。结果表明，苦杏仁是一种富含氨基酸，且有利于人体氨基酸营养平衡及保健作用的天然干果资源。     

HbSNP12基因及HbCBF1基因在巴西橡胶树中的差异分析

以抗寒性较强和较弱的两组巴西橡胶树为材料,从NCBI中搜索HbSNP12、HbCBF1基因序列,用Primer Premier 5.0软件设计特异引物,PCR扩增后进行测序,比对两基因在两组材料中的碱基及氨基酸序列信息。结果表明,HbSNP12基因在105 bp、538 bp处,HbCBF1基因在92 bp、387 bp处,两组材料的碱基序列均存在差异,将其翻译为氨基酸序列后差异同样存在。本实验探讨了与抗性相关的HbSNP12、HbCBF1两基因在两组抗性相差较大材料中的单核苷酸多态性,为橡胶树抗寒性相关的SNP标记筛选提供依据。