CVI988/Rispens疫苗的过去、现在和未来

一、CVI988疫苗的过去荷兰农业渔业部动物科学和健康研究所Rispens博士1969年从自然界发现CVI988毒株，经过三年的研究，于1972年以该博士命名的CVI988／Rispens 液氮疫苗问世，在荷兰全国推广应用到现在，有效地控制了鸡马立克氏病MD。CVI988／Rispens疫苗是世界养禽业的重大科技成果，了解Rispens博士研究的历史，对于我国控制MD的危害是十分有意义的。1． CVI988／Rispens种毒的培育 制疫苗种毒的原始分离株在鸭胚成纤维细胞上传4代，然后在鸡胚和鸭胚成纤维细胞交替传14代，测定安全性、免疫原性、检查外源病原等，继续在…     

应用北京产CVI988液氮疫苗防制鸡马立克氏病

氏病专题一、用北京产CVI988液氮疫苗替代火鸡疱疹病毒冻干疫苗20世纪80年代以来，我们一直在使用HVT疫苗预防MD，对控制MD的流行起到了重要作用。20世纪90年代以来，我所发现小鸡虽经HVT疫苗免疫，但仍有20％～30％以上的鸡发生MD。经过认真的分析认为与MD病毒毒力增强有关，由于强MD病毒对易感鸡的毒力和免疫抑制作用较强，对用了HVT疫苗免疫过的鸡具有高度致瘤作用。因此，为了克服HVT疫苗的缺点，首先加强孵化室、育雏舍的消毒，严防雏鸡早期感染。另一办法是必须使用CVI988／Rispens液氮疫苗。针对这一情况，1999年初，决…     

鸡马立克病疫苗株CVI988/Rispens meq基因编辑及缺失毒株的构建与鉴定

meq是鸡马立克病病毒（MDV）最重要的致瘤基因，在马立克病（MD）肿瘤发生中发挥关键作用。同时，它在疫苗株和强毒株之间具有明显的序列差异性。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以MDV疫苗株CVI988/Rispens meq基因为靶点，设计合成gRNA，克隆构建pX459-gRNA质粒，转染CEF并感染CVI988/Rispens，然后对meq基因编辑的病毒噬斑进行克隆纯化，经过PCR扩增、测序分析及IFA鉴定，成功构建1株meq基因编辑的缺失毒株CVI988Δmeq-C7，为后续筛选和鉴定抗MD疫苗株MEQ单抗及鉴别诊断研究奠定了基础。     

鸡马立克氏病meq基因缺失疫苗(SC9-1株)的临床应用效果比较研究

鸡马立克氏病基因缺失活疫苗(SC9-1株)的临床试验分别在3个鸡场进行,试验鸡分别为1日龄雪山黄鸡20 600只、1日龄京红1号蛋鸡17 000只、1日龄北京油鸡9 732只。临床安全性试验观察期内,免疫鸡群的精神状态、采食、饮水情况、生长性能与对照组无异。临床免疫效力试验期间,将免疫SC9-1鸡群与免疫CVI988/Rispens(市售)鸡群进行对比,SC9-1鸡群的死淘率分别为2.7%与0.4%,均低于CVI988/Rispens免疫鸡群的3.7%与1.2%(P0.05)。另外分别将免疫SC9-1的鸡群与免疫CVI988/Rispens的鸡群在6日龄时攻击马立克超强毒Md5(1 000 pfu/只),结果显示SC9-1株疫苗攻毒保护率分别为35/35与34/35,显著高于CVI988/Rispens株疫苗的25/35与27/35(P0.05)。以上表明SC9-1株疫苗安全性良好,免疫效力较好,可能是一株理想的马立克氏病疫苗。     

鸡马立克病疫苗株CVI988/Rispens meq基因编辑及缺失毒株的构建与鉴定

meq是鸡马立克病病毒(MDV)最重要的致瘤基因,在马立克病(MD)肿瘤发生中发挥关键作用。同时,它在疫苗株和强毒株之间具有明显的序列差异性。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV疫苗株CVI988/Rispens meq基因为靶点,设计合成gRNA,克隆构建pX459-gRNA质粒,转染CEF并感染CVI988/Rispens,然后对meq基因编辑的病毒噬斑进行克隆纯化,经过PCR扩增、测序分析及IFA鉴定,成功构建1株meq基因编辑的缺失毒株CVI988Δmeq-C7,为后续筛选和鉴定抗MD疫苗株MEQ单抗及鉴别诊断研究奠定了基础。     

鸡马立克氏病CVI 988/Rispens毒株生物学特性的研究

对荷兰农业渔业部提供的初代次 CVI988/ Rispens种毒 ,繁殖到 37代 ,用间接荧光抗体试验测定属血清 型 ,经接种雏鸡进行 6代毒力返强试验观察到 70日龄和对 1日龄雏鸡接种 4 5 0 0 0个蚀斑单位 ,观察到 12 0日龄均为安全。对 1日龄雏鸡接种免疫剂量的疫苗 ,于 4日龄产生病毒血症 ,7～ 14日龄达到高峰。用 37代毒繁殖生产的三批 CVI988/ Rispens疫苗 ,与国外 CVI988/ Rispens疫苗进行免疫效力比较 ,保护指数为 94 .5 %～ 10 0 %。     

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗的研制

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗毒力稳定，免疫原性好。免疫期可持续1年半，在液氮中保存，有效期1年以上，免疫鸡临床保护率近100％，对预防各品种雏鸡马立克氏病有明显效果。     

整合REV-LTR基因的MDV活疫苗与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力比较

利用同源重组技术将禽网状内皮组织增生症病毒（REV）的长末端重复序列（LTR）整合进CVI988/Rispens疫苗株基因组中所构建成的重组马立克氏病病毒株（r MDV-LTR株）,具有较高的增殖效率。为比较r MDV-LTR株与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力差异,开展了对这两种疫苗的比较试验。试验将这两种疫苗分别按照三个不同剂量经颈背部皮下接种1日龄SPF鸡。接种后第7 d,攻毒马立克氏病强毒株rMd5,连续观察60 d后进行剖检。临床病理观察结果发现,以不低于250 PFU/羽剂量的rMDV-LTR株或CVI988/Rispens株免疫SPF雏鸡都可以提供大于80%的免疫保护效率;以125 PFU/羽剂量的两种疫苗虽均不能提供大于80%的免疫保护效力,但rMDV-LTR株免疫组试验鸡未出现死亡,仅有2只鸡出现消瘦,剖解脏器无肿瘤,而CVI988/Rispens株免疫组鸡出现2只死亡,其中1只剖解后检出肿瘤。rMDV-LTR株和CVI988/Rispens株免疫组的免疫保护指数分别为77.78%和66.67%。由实验结果可见,在较小免疫剂量下,rMDV-LTR株免疫保护...     

鸡马立克氏病重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗免疫效力试验

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988／Kispem gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV—gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗时MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果，实验室免疫效力试验的结果表明，HVT rFPV—gB／R二价冻千苗时超强毒株Md5和RB1B攻击时的免疫保护效果明显优于HVT冻干苗，接近CVI988／Rfispens的水平，本研究证明HVT rFPV—gB／R二价冻干疫苗是一种安全、方便、高效的疫苗。     

鸡马立克氏病Ⅰ型疫苗的特点

马立克氏病Ⅰ型疫苗(CVI988/Rispens株)是我公司近年研制的、用于预防鸡马立克氏病的疫苗,也是目前免疫效力最好的疫苗之一。此疫苗有如下特点:     

马立克病毒二价活疫苗效价检测实验

由于CVI988/Rispense疫苗优良的免疫特性,已经被认为是目前防控马立克氏病（Marek＇sdisease,MD）效果最好的疫苗。然而,近年来随着马立克病毒（Marek＇sdisease virus,MDV）毒力的不断增强。CVI988/Rispense需要与MDV-Ⅱ或者HVT联合使用才能防止免疫失败的发生。本实验通过空斑计数和间接免疫荧光相结合的方法测定了马立克病毒CVI988/Rispense＋FC126二价活疫苗的效价。结果显示批次A中CVI988为4400PFU/dose,HVT为2600/dose;批次B中CVI988为4800PFU/dose,HVT为2400PFU/dose;批次C中CVI988为4600PFU/dose,HVT为2800PFU/dose。所得结果均显著高于国家标准CVI988不少于2000PFU/dose,HVT不少于1000PFU/dose,并且批次之间非常稳定,适合用作鸡群马立克氏病的防控。     

对一株超强马立克氏病毒株的检测和研究

对从发病鸡场分离到的一株超强马立克氏病毒株,用PCR扩增该分离毒株的meq致瘤基因并测定了其序列,发现其与超强病毒株SD2012-1的核苷酸同源性为99%。该分离毒株的meq基因序列在第575～577位比疫苗株CVI988/Rispens的meq基因序列多插入3个碱基（CAC）,与SD2012-1相同。使用该分离毒株进行疫苗免疫攻毒实验,未免组的发病率为80.0％,常规剂量HVT组和10×常规剂量HVT组的发病率分别为73.0％和76.6％,HVT不能提供有效免疫保护。常规剂量CVI988组和10×常规剂量CVI988组的发病率分别为30.0％和30.0％,常规剂量HVT+CVI988组和10×常规剂量HVT+CVI988组的发病率分别为26.6％和26.7％,免疫CVI988疫苗组鸡和HVT+CVI988联苗组鸡的发病率比免疫HVT疫苗组鸡低。说明,野外毒株的不断变异已经突破现有疫苗的免疫保护,会给养鸡业带来严重的损失。     

鸡马立克氏病三价活疫苗剂量配比和免疫剂量的研究

用马立克氏病病毒BJMDV-1株分别攻击由CVI988/B5、HCV2/B5和FC126/B5毒株组成的,剂量配比不相同的马立克氏病(MD)三价活疫苗免疫的鸡群,结果表明MD三价活疫苗中CVI988/B5、HCV2/B5及FC126/B5毒株的合适配比为2:1:2。按照此剂量配比制备的MD三价活疫苗,用RB1B超强毒株进行攻毒,当RB1B攻毒对照组MD阳性率为85.71%时,MD三价活疫苗的半数保护剂量(PD50)均数为111PFU/只,95%置信区间为585～53PFU/只的范围内,并确定MD三价活疫苗的免疫剂量为2500PFU/只。用该剂量对鸡进行MD三价活疫苗免疫,可使鸡体产生抗RB1B超强毒株攻击的坚强免疫力。     

马立克氏病液氮疫苗介绍

鸡马立克氏病病毒不易被杀灭是由于感染马立克氏病病毒的阳性鸡终生排毒。使用疫苗是预防该病的有效方法，而目前最有效的是CVI988/Rispens液氮苗。     

鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立

为建立鸡马立克病(MD)活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的间接免疫荧光检测方法,本研究通过向MD活疫苗中添加不同剂量的REV,用拟定的方法对样品检测REV。结果表明,Ⅰ型MD活疫苗、火鸡疱疹病毒活疫苗(Fc-126株)和MD二价活疫苗(HVT+CVI988株)中污染REV的最低检出量分别为每500羽份疫苗中污染5TCID50、10TCID50和15TCID50的REV。应用建立的方法对国内10家企业生产的43批MD活疫苗进行了检验,结果显示,2个企业生产的4批疫苗REV检测阳性。随机选取了5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染检验结果的符合率为100%。因此,本研究建立的IFA法可替代鸡检查法,用于疫苗中REV污染的检验。     

鸡马立克氏病疫苗

马立克氏病(MD)仍然是养禽业发展的主要障碍之一,在生产上多使用下面三种疫苗以预防该病的发生。(1)CVI-988株是Rispens等(1969年)从荷兰的一群无临诊     

企业

正大华农取得一项疫苗发明专利证书广东大华农动物保健品股份有限公司8月21日发布公告称,公司近日收到国家知识产权局颁发的一项发明专利证书,发明名称为"一株马立克氏病病毒疫苗株及其分离鉴定和应用"。大华农称,该发明在健康鸡场中分离到一株鸡马立克氏病病毒(MDV),命名为CVTR株。MDV CVTR株不会诱发鸡的肿瘤,对鸡群也没有免疫抑制作用。CVTR株病毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)上或鸡体内比目前广泛使用的CVI988/Rispens疫苗株增殖更迅速。将CVTR株用作马立克氏病活疫苗的生产毒株所制备的疫苗,预防超强毒MDV诱发的鸡马立克氏病,其保护力优于目前国内外市场上应用     

马立克氏病液氮疫苗介绍

<正> 鸡马立克氏病病毒不易被杀灭是由于感染马立克氏病病毒的阳性鸡终生排毒。使用疫苗是预防该病的有效方法,而目前最有效的是CVI988/Rispens液氮苗。1 液氮马立克氏病疫苗液氮马立克氏病活疫苗分Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型,这3种型的病毒都必须在活细胞中生存,当我们按规定的程序从液氮中取出疫苗并在规定的水温中快速融     

马立克疫苗的质量检测及其对鸡源食品安全的影响分析

山东某种鸡场7个父母代鸡群应用2个批次马立克（MD）CVI988/Rispens疫苗免疫后仍发生疑似MD病。本研究对其送检的3瓶MD苗（2个批次，编号为F11、F21、F22，其中F21、F22为同一批次）进行了毒力测定及禽白血病病毒（ALV）的检测。结果显示：MD疫苗F11、F21、F22的毒力检测结果分别为800PFU/羽份、1300PFU/羽份、1480PFU/羽份，3瓶疫苗的毒力均低于国家兽医药典规定2000PFU/羽份的标准，F11低于OIE规定不少于1000PFU/羽份的标准；3瓶MD疫苗冻融后上清和细胞培养上清的p27抗原均为阳性；3瓶疫苗均检测出E亚型ALV（ALV-E）的囊膜蛋白（env）基因（PCR方法扩增2400bp片段，包括LTR序列），与经典ALV-E株RAV-0（E）、SD0501（E）的同源性为98.9%-99.4%。本研究发现，送检的3瓶2个批次MD疫苗存在毒力不足和内源ALV污染的质量问题，有可能是该种鸡群发生疑似MD病的原因之一。     

鸡马立克氏病二价苗免疫机理的探讨

鸡马立克氏病（MD）是由马立克氏病毒（MDV）引起的淋巴组织增生性肿瘤疾病。MD发病机理非常复杂，并能引起免疫抑制和许多功能障碍，给世界养禽业带来巨大经济损失，在我国也是三大禽病之一。疫苗接种是防制MD的主要手段，常用疫苗有HVT冻士苗、MDV血清1型CVI998/Rispens疫苗和由MDV血清1、2、3型组成的双价苗和三价苗。近来年，由于MDV超强毒株的出现和早期感染很难完全防制，使经典的火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗常常发生免疫失败。近15年来用液氮苗取代HVT冻干疫苗已成为全世界的趋向。