不同底物及NaOH的添加对木聚糖酶酶活测定的影响

本试验采用DNS法对测定木聚糖酶酶活的底物性质进行研究。结果表明：以小麦木聚糖为底物时的木聚糖酶酶活最高,其次是燕麦木聚糖,再其次是山毛榉木聚糖,以桦木木聚糖为底物时的酶活最低;在底物配制过程中一般加入NaOH时测得的酶活低于不添加NaOH时的酶活,但以小麦木聚糖为底物时加入NaOH时测得的酶活高于不添加NaOH时的酶活。     

检测饲料添加剂中木聚糖酶活力

测定木聚糖酶活力的方法主要有黏度法、底物染色法、还原糖法。大量实践证明．影响木聚糖酶实际使用效果的因素很多．从目前的研究进展分析．采用还原糖法．分析影响酶活测定值的因素并结合生产实际．制定相对公正的评判标准是可行的．也是科学的。测定饲料添加剂中木聚糖酶活力应注意：固定反应体系，即固定反应温度、pH值、反应时间、底物浓度和要求的产物浓度范围。建议以燕麦木聚糖为标准底物．反应液中底物的浓度为5mg／mL：配制的木聚糖底物溶液的存放时间不超过12h．存放温度应在4℃下避光保存；反应体系的pH值为5．5；反应温度为37℃：反应体系的缓冲液中盐浓度为0．1mol／L：反应时间为30min．     

Bacillus subtilisT15产木聚糖酶的酶学特性及其在禽饲料中应用的初步研究

对BacillussubtilisT15生产的木聚糖酶作了部分酶学性质考察,研究表明:该酶是一种中性木聚糖酶,最适pH值为6.4,pH值稳定范围为5.6～8.0;最适温度为55℃,酶液在40～50℃处理4h后活力保持100%,含水量17%～20%的酶泥在85℃条件下2.5min活力保持67.4%;对燕麦木聚糖的主要降解产物为聚合度2～5的木寡糖。在考察酶学性质基础上,对该酶作了在禽饲料中的初步应用实验。饲养试验表明,在禽饲料中添加0.002%该酶能提高料肉比9.94%,饲养效果显著优于对照组(P<0.05)。     

Bacillus subtilisT15产木聚糖酶的学特性及其在禽饲料中应用的初步研究

对Bacillus subtilisT15生产的木聚糖酶作了部分酶学性质考察,研究表明该酶是一种中性木聚糖酶,最适pH值为6.4,pH值稳定范围为5.6～8.0;最适温度为55℃,酶液在40～50℃处理4h后活力保持100%,含水量17%～20%的酶泥在85℃条件下2.5min活力保持67.4%;对燕麦木聚糖的主要降解产物为聚合度2～5的木寡糖.在考察酶学性质基础上,对该酶作了在禽饲料中的初步应用实验.饲养试验表明,在禽饲料中添加0.002%该酶能提高料肉比9.94%,饲养效果显著优于对照组(P＜0.05).     

饲用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究

木聚糖是一种广泛存在于植物中的半纤维素,它是由β-1,4糖苷键连接而成的木糖聚合物。为了掌握常用饲用酶制剂中木聚糖酶的酶学性质,对某商品复合酶制剂中所含的木聚糖酶进行了热稳定性、最适pH值、最适反应温度、底物征对性、不同金属离子对其酶活的影响、反应进程曲线及其Km值等的测定,以其对常用的木聚糖酶的酶活测定、保存及应用有一定的指导意义。1材料与方法1.1实验仪器精密pH计:±0.01pH;电子天平:d=1mg;紫外分光光度计UV-1601;恒温水浴锅;蠕动泵;紫外检测器;分布收集器;Φ2.6cm×100cm色谱柱。1.2实验材料某商品酶制剂。1.3酶活…     

康宁木霉产木聚糖酶的稳定性研究

本文研究了不同无机离子、pH值和温度对康宁木霉(Trichoderma koningii)产木聚糖酶稳定性的影响.结果表明:(1)不同种类、不同浓度的无机离子对木聚糖酶的活性表现出不同程度的激活或抑制作用.Cu2+、Mn2+和Ba2+可抑制木聚糖酶活性,而Co2+、Na+、K+、Fe2+、Ca2+和Mg2+可激活木聚糖酶活性.(2)不同pH和温度对木聚糖酶的活性也有显著影响.康宁木霉产木聚糖酶的最适保存pH和温度分别是7.0和30℃.且在pH 5～8时相对酶活可保持80%以上.     

温度和pH值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性影响的研究

本试验采用DNS法,分别在温度为20~100℃,pH值2.4~7.2的条件下,研究了不同温度和pH值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性的影响。结果表明:温度在20~50℃时,木聚糖酶的活性随温度的升高而线性增强,40~60℃表现较高的水平,70~100℃活性逐渐稳定,并维持在20℃时的活性水平。说明动物体温为40℃左右时,木聚糖酶能表现出较高的活性;在制粒温度范围内,80℃热处理与未处理组木聚糖酶的活性比较损失不大,说明其在制粒工艺过程有一定的优势;在pH值3.6以前,随着pH值的增大,木聚糖酶的活性逐渐升高;pH值为3.6时,木聚糖酶的活性最高;且在3.2~4.4范围内木聚糖酶的活性维持较高浓度,说明消化道中食糜从胃的酸性环境转化成十二指肠后段碱性环境的过渡时期,木聚糖酶能表现出较高的活性,有利于促进其对底物的降解,从而提高营养物质的消化吸收。本研究得出:嗜热毛壳菌木聚糖酶在40~60℃表现较高的水平,实验室条件下的100℃以内的加热不会导致酶活性的严重损失。维持嗜热毛壳菌木聚糖酶活性的适宜的pH值范围为3.2~4.4。     

温度和pH值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性影响的研究

本试验采用DNS法,分别在温度为20．100℃,pH值2．4—7．2的条件下,研究了不同温度和pH值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性的影响。结果表明：温度在20—50℃时,木聚糖酶的活性随温度的升高而线性增强,40-60℃表现较高的水平,70—100℃活性逐渐稳定,并维持在20℃时的活性水平。说明动物体温为40℃左右时,木聚糖酶能表现出较高的活性;在制粒温度范围内,80℃热处理与未处理组木聚糖酶的活性比较损失不大,说明其在制粒工艺过程有一定的优势;在pH值3．6以前,随着pH值的增大,木聚糖酶的活性逐渐升高;pH值为3．6时,木聚糖酶的活性最高;且在3．2-4．4范围内木聚糖酶的活性维持较高浓度,说明消化道中食麇从胃的酸性环境转化成十二指肠后段碱性环境的过渡时期,木聚糖酶能表现出较高的活性,有利于促进其对底物的降解,从而提高营养物质的消化吸收。本研究得出：嗜热毛壳菌木聚糖酶在40-60℃表现较高的水平,实验室条件下的100℃以内的加热不会导致酶活性的严重损失。维持嗜热毛壳菌木聚糖酶活性的适宜的pH值范围为3．2—4．4。     

体外酶解菜籽粕最适条件的研究

本实验以菜籽粕为底物,研究纤维素酶和木聚糖酶体外酶解菜籽粕的最适反应条件。分别在温度为35℃、37℃、39℃、41℃,以及p H为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的条件下,研究纤维素酶和木聚糖酶降解菜籽粕的最适反应情况。结果表明,纤维素酶降解菜籽粕的最适温度为37℃、最适p H为6.0;木聚糖酶降解菜籽粕的最适温度为39℃、最适p H为5.0。比较而言,纤维素酶对菜籽粕的降解效果优于木聚糖酶。     

瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究

旨在表达来源于瘤胃厌氧真菌基因组的4个木聚糖酶基因A、C、D和F,并比较分析其酶学特性。首先根据大肠杆菌基因编码偏好,合成可在大肠杆菌中表达的木聚糖酶基因序列,然后采用同源重组的方法将各序列分别插入载体pET-28a中,在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中异源表达,并研究其酶学特性,结果成功表达出来源于厌氧真菌的4个木聚糖酶基因。测定其酶学性质发现,4种木聚糖酶的反应最适pH值均为8.0;木聚糖酶D的反应最适温度为37℃,其余3种木聚糖酶的反应最适温度均为45℃;4种木聚糖酶具有广泛的温度稳定性和pH稳定性;金属离子Ca²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺显著促进木聚糖酶活性(P<0.05),而Zn²⁺则有明显的抑制作用(P<0.05);4种木聚糖酶降解山毛榉木聚糖的能力显著高于其他底物(P<0.05)。本研究成功表达了4种来源于厌氧真菌的木聚糖酶,其良好的温度和pH稳定性具有潜在的工业应用价值。     

Partial characterization of structure and function of a xylanase gene from the rumen hemicellulolytic bacterium Eubacterium ruminantium

A gene encoding for xylanase activity in the rumen hemicellulolytic bacterium Eubacterium ruminantium was cloned into pBR322 in Escherichia coli (E. coli ). The primary clone had a 5.7 kb insert produced by Eco RI partial digestion. Subcloning followed by sequencing allowed for the discovery that this enzyme has a glycosyl‐hydrolase family 10 catalytic domain with a family 9 carbohydrate binding module at C‐terminus and a region partially homologous to a family 22 carbohydrate binding module at N‐terminus. Cloned xylanase is specifically active against xylan and oligoxyloside to produce xylobiose and xylotriose, showing optimal pH and temperature at 7.0 and 50°C, respectively. Molecular size of the xylanase (91 kDa) was confirmed by zymogram analysis of the E. coli clone, which agreed with the predicted size from the DNA sequence. Functions of the two modules at C‐ and N‐termini were evaluated by using xylanase variants with and without the respective module and the C‐terminal module was found to be functional in binding to acid‐swollen cellulose and insoluble oat‐spelt xylan, whereas the N‐terminal module was inactive for binding them.     

Characterisation and effects of a xylanase enzyme preparation extracted from Thermomyces lanuginosus cultures

This paper describes the production of an enzyme preparation from the fungus Thermomyces lanuginosus. Thermal resistance, pH stability and lignocellulolytic activity of the enzyme preparation high in xylanase were studied on a variety of grains and forages. The enzyme preparation preserved more than 70% of its original xylanase activity for 4 and 1 h at 60 and 70 degrees C, respectively. The xylanase activity remained over 80% when the preparation was incubated for 30 min at pH 4.5. In vitro digestibility studies indicated that the enzyme digested 7.5, 8.5 and 8.0% of the dry matter (DM) of barley meal, wheat bran and oat meal samples, respectively. When applying 60-min incubation, 7.5, 7.3 and 8.4% of DM of the oat straw, alfalfa hay and triticale straw was digested, respectively. When the time of digestion was increased to 360 min, the sunflower hull showed 15.8% DM digestibility.     

不同来源木聚糖酶及其组合对木聚糖水解产物组成、细菌增殖与大肠杆菌黏附性的影响

本试验旨在研究不同来源木聚糖酶及其组合对木聚糖的水解效果,并研究不同木聚糖水解产物对细菌增殖及大肠杆菌对肠道上皮细胞黏附性的影响。试验用木聚糖酶A和木聚糖酶B分别来源于毕赤酵母和米曲霉。采用木聚糖酶A、木聚糖酶B、组合酶1(木聚糖酶A∶木聚糖酶B=3∶7)、组合酶2(木聚糖酶A∶木聚糖酶B=1∶1)、组合酶3(木聚糖酶A∶木聚糖酶B=7∶3)分别水解木聚糖,然后测定木聚糖水解产物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌增殖和大肠杆菌对肠道上皮细胞黏附性的影响。结果表明:1)2种木聚糖酶有一定的组合效应,木聚糖酶A、木聚糖酶B、组合酶1、组合酶2、组合酶3组木二糖和木三糖的总含量分别为95.70%、86.79%、93.11%、94.55%和87.55%,其中木聚糖酶A组木二糖含量最高,组合酶2组木三糖含量最高。2)培养20 h时,5种木聚糖水解产物对大肠杆菌的增殖(以菌液吸光度值表示)没有产生显著影响(P0.05);培养20和30 h时,5种木聚糖水解产物显著促进枯草芽孢杆菌的增殖(P0.05);培养13和17 h时,5种木聚糖水解产物显著促进乳酸杆菌的增殖(P0.05)。3)5种木聚糖水解产物均可以显著降低大肠杆菌对肠道上皮细胞的黏附率(P0.05)。由此可见,通过不同来源木聚糖酶及其组合水解木聚糖,可以产生以木二糖和木三糖为主要组分的水解产物,从而起到促进枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌增殖、减少大肠杆菌对肠道上皮细胞黏附的作用。     

固态混菌发酵生产饲用复合酶制剂营养条件和培养条件的研究

黑曲霉变种(A.niger v.Tiegh)CGMCC1182、黑曲霉MA-56(A.niger MA-56)CGMCC2722和黑曲霉XY-1(A.niger XY-1)CGMCC1182分别为α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和木聚糖酶生产菌株。为获得高产α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的复合酶制剂,通过单因素实验,研究了黑曲霉三种菌株在固态发酵条件下产复合酶制剂的培养基组成和培养条件。结果表明,黑曲霉混菌发酵生产复合酶的最适培养基组成为:麸皮∶豆粕为7∶3(m/m),在此基础上(以麸皮和豆粕总量为10 g计算)添加玉米芯1.0 g,魔芋粉0.1 g,葡萄糖0.5 g,(NH4)2SO4 0.2 g,NaNO3 0.1 g,MgSO4 0.1 g,KH2PO4 0.2 g,H2O 11 mL。产酶最适培养条件为:培养温度30℃,固形物与加水比1∶1,α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和木聚糖酶接种比例为5∶6∶6,接种混合孢子悬浮液2.5 mL(以一支菌种斜面加30 mL无菌水为标准),300 mL三角瓶中装量8 g培养基,发酵60 h时,复合酶产量达到最优,α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和木聚糖酶三种酶制剂的活力分别可以达到221、894、10188 IU/g。     

木聚糖酶对不同木聚糖含量的仔猪饲粮养分消化率的影响

试验设计3个消化试验分别研究在3个饲粮木聚糖水平下添加不同剂量的木聚糖酶对养分表观消化率的影响。饲粮木聚糖水平分别为5.33%、6.47%和8.44%。每个消化试验(即每个木聚糖水平下)设5个处理,分别饲喂不添加酶的基础饲粮和添加4个木聚糖酶水平的饲粮。随着饲粮木聚糖含量的提高,木聚糖酶的添加量相应增加。结果表明:当饲粮木聚糖含量低于6.47%时,添加木聚糖酶对养分消化率没有改进作用,而当木聚糖含量高达8.44%时,木聚糖酶的添加对养分消化率有一定的改进效果。与不加酶组比,加酶组粗蛋白、有机物、钙、磷、酸性洗涤纤维和能量的平均消化率分别提高了2.92%、1.05%、5.80%、5.15%、2.36%和0.84%。     

In vitro Evaluation of Feed Enzyme Compound Produced by Aspergillus sulphureus in Solid-state Fermentation

Three trials were conducted to analyze a multi-enzyme compound produced by Aspergillus sulphureus in solid-state fermentation (SSF) as a potential feed additive.The results of the first trial showed that there were at least 5 non-starch polysaccharide enzymes:xylanase,β-glucanase,pectinase,mannase and carboxy methyl cellulase (CMCase) contained in the compound.Xylanase and β-glucanase showed good activities at pH 2.5-7.0,which were in the range of 649-1046 U/g and 444-648 U/g,respectively.Pectinase showed good activity in acidic solution (pH 2.5-3.0),which ranged from 195 to 917 U/g.Mannase showed high activity of 235-298 U/g at pH 3.5-4.5 and the activity of CMCase was relatively constant at pH 2.5-7.0,which was in the range of 38.2-78.6 U/g.The second trial was aimed to test the stability of the enzymes in gastric liquor (pH 2.6) of finishing pigs and Na2HPO4-gastric liquor (pH 5.5).After 6 h incubation at 40℃ in gastric liquor,the retained activity of xylanase,β-glucanase,pectinase,mannase and CMCase was 26.3%,65.0%,71.0%,74.8% and 85.6%,respectively.While after 6 h incubation at 40℃ in Na2HPO4-gastric liquor,the retained activity of xylanase,β-glucanase,pectinase,mannase and CMCase was 87.9%,91.1%,92.3%,95.0%,and 97.5%,respectively.The third trial was carried out in a jejunum liquor (pH 5.8,200 mL),which contained 0.2 g of the multi-enzyme compound and 10 g of soybean hull or wheat bran,respectively.After 8 h incubation at 40℃,18.7% of soybean hull and 20.1% of wheat bran could be degraded to soluble saccharide,respectively.Compared with the traditional methods for feed enzyme testing which involve feeding animals for 1-3 months,enzyme assay in this way was relatively convenient.     

枯草芽孢杆菌XY1905木聚糖酶酶学性质的初步研究

对从土壤中筛选到的一株枯草芽孢杆菌XY1905木聚糖酶的酶学性质进行了初步研究,结果表明:木聚糖酶测定的最佳条件是pH为6,反应时间10min,反应温度60℃;热稳定性很强,在80℃下保温1h,剩余酶活96.44%;对金属离子不敏感。     

4种芽孢杆菌来源木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及酶活分析

研究旨在比较4种不同来源木聚糖酶基因在大肠杆菌E.coli BL21中表达后的酶活等性质,为生产中筛选高表达量及耐极性木聚糖酶基因提供依据。根据已发表的木聚糖酶基因序列设计引物,分别扩增出浸麻芽孢杆菌(B.macerans)B3、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)B6、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)B10和枯草芽孢杆菌(B.subtilis)B12的木聚糖酶基因片段,经克隆表达后获得4种工程菌。经培养和IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳检测及酶特性分析。测序结果表明,4个基因的开放阅读框均为642 bp。其中前3种木聚糖酶基因均为首次报道。4种重组木聚糖酶在55℃下的酶活分别为:36.16、3.85、7.22、98.98 U/ml。4种重组木聚糖酶的最适反应温度均在50~60℃,且枯草芽孢杆菌木聚糖酶最为耐热。结果提示,枯草芽孢杆菌来源的木聚糖酶具有较高的酶活和较好的耐热性。     

1株产碱性木聚糖酶的芽胞杆菌的分离鉴定及其相关研究

分离到1株产碱性木聚糖酶的革兰氏阳性菌株,通过菌落形态及16srDNA序列同源性分析,确定该菌株为短小芽孢杆菌。生长条件和产酶条件研究结果显示,最适温度和pH分别为50℃和pH8·0。培养基优化试验显示在有机和无机混合氮源条件下(NH4NO30·57%;牛肉膏1%;蛋白胨0·5%;酵母提取物0·5%;木聚糖0·5%)木聚糖酶产量达到最高(180U/mL)。酶学试验表明最适反应条件为50℃,pH8~9;在pH9的条件下,孵育120min时仍具有75%的活力,表明该酶具有较强的碱耐受性。