银耳多糖对小鼠淋巴细胞免疫调节作用及PI3K/Akt、NF-κB信号通路的影响

试验旨在探讨银耳多糖（TFP）对小鼠脾淋巴细胞免疫调节作用及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B (Akt)、核因子κB (NF-κB)信号通路的影响。试验从体外分离小鼠脾淋巴细胞，分别设CK组、LMS组、TFP 20 mg/L组、TFP 40 mg/L组、TFP 80 mg/L组和TFP 160 mg/L组。采用MTT法检测脾淋巴细胞的增殖，ELISA法检测脾淋巴细胞细胞因子白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)和干扰素-γ (IFN-γ)的分泌，QRT-PCR法检测脾淋巴细胞细胞因子IL-6、IL-10、IL-12和IFN-γm RNA的相对表达量，Western blot法检测PI3K/Akt和NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示，银耳多糖能够促进脾淋巴细胞的增殖、IL-6、IL-10、IL-12和IFN-γ的分泌及mRNA的表达（P<0.01），降低磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（P-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B (P-Akt)、κB抑制因子激酶α (IKK-α)、κB抑制因子激酶β(IKK-β)和NF...     

朱砂七多糖体外免疫增强活性研究

研究朱砂七多糖(Polygonum cillinerve polysaccharide, PCP)对鸡外周血淋巴细胞和小鼠脾淋巴细胞免疫活性的影响。用MTT法和ELISA等方法分别检测PCP对鸡外周血淋巴细胞和小鼠脾淋巴细胞的毒性、细胞增殖及小鼠脾淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ细胞因子分泌水平的影响。结果显示,PCP浓度为1.95μg/mL～31.25μg/mL时,对鸡外周血淋巴细胞和小鼠脾淋巴细胞无毒性,能促进鸡外周血淋巴细胞和小鼠脾淋巴细胞增殖,促进小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IL-10、IFN-γ等细胞因子,表明PCP在体外具有较好的免疫增强活性。     

蓝黄青口服液对小鼠体外诱生细胞因子的影响

在对体外诱生小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子的影响试验中,用双抗体夹心ELISA法测定蓝黄青口服液(LHQY)对脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ及INF-α含量的影响,结果显示,LHQY在有无诱生剂ConA存在的条件均能极显著促进小鼠T淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ(P<0.01),加入诱生剂的组,分泌的量较大;在PHA-M的协同作用下,除药物浓度为1:10外,均可极显著促进小鼠脾淋巴细胞分泌INF-α(P<0.01),但其本身对于INF-α的分泌主要起抑制作用.     

中药地翁颗粒对小鼠脾淋巴细胞功能的影响

为观察中药地翁颗粒在体外对小鼠脾淋巴细胞功能的影响,设置高（100mg/L）、中（10mg/L）、低（1mg/L）3个剂量组,采用3 H法进行刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）诱导脾淋巴细胞增殖试验,ELISA方法检测ConA或金黄色葡萄球菌Cown株灭活菌体（SAC）刺激的脾淋巴细胞上清液IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的含量。结果显示,在安全浓度范围内,地翁颗粒能够明显促进T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖;能够促进ConA刺激的淋巴细胞分泌INF-γ;能够促进SAC刺激的淋巴细胞分泌IL-12、INF-γ和IL-6,并抑制IL-10的分泌。结果表明,地翁颗粒能够有效调节小鼠脾淋巴细胞的功能,促进细胞免疫。     

硼对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的影响

为了研究硼对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的影响,分别采用CCK-8、ELISA及qPCR技术检测不同浓度硼协同刀豆凝集素(concanavalin A,ConA)或脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠脾淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及其mRNA表达的影响。结果显示,当硼协同ConA作用于脾淋巴细胞时,随着硼浓度的增加,细胞存活率呈先上升后下降的趋势;IL-2的分泌量逐渐下降,IL-6的分泌量没有显著变化;IL-2、IFN-γ及IL-6 mRNA的相对表达量有所增加,IL-10则表现为逐渐下降的趋势。当硼协同LPS作用于脾淋巴细胞时,随着硼浓度的增加,细胞存活率也呈先上升后下降的趋势;显著促进了IL-2、IL-6的分泌(P<0.05);硼浓度为1,10,50 mmol/L时,IL-2及IL-10 mRNA的相对表达量均显著低于LPS单独刺激组(P<0.05),IL-6 mRNA的相对表达量先下降后上升,IFN-γ则表现为逐渐下降。结果说明低浓度的硼对脾淋巴细胞的增殖及细胞因子的分泌起促进作用,高浓度的硼则对细胞产生毒性作用且在一定程度上抑制相关细胞因子的分泌,且硼对脾淋巴细胞的细胞因子表达也起到了一定的调控作用。     

四种黄柏生物碱对热应激后小鼠脾淋巴细胞体外增殖以及IFN-γ和IL-4水平的影响

采用MTT法测定了热应激后小鼠脾淋巴细胞增殖的情况,以此作为醇提、碱提、酸醇提、酸提4种提取方法所得黄柏生物碱的筛选依据;采用ELISA法测定了醇提黄柏生物碱对热应激后小鼠脾淋巴细胞IFN-γ、IL-4分泌水平的动态影响.结果表明,4种提取方法所得的黄柏生物碱均能促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,其中黄柏醇提生物碱对淋巴细胞增殖能力的促进作用最强;热应激使IFN-γ,的分泌水平上升、IL-4的分泌水平下降;黄柏生物碱下调IFN-γ的分泌量、上调IL-4的分泌量,使二者的含量均恢复到正常水平.结果证明,黄柏生物碱可显著调节热应激所致的IFN-γ、IL-4分泌水平的紊乱.     

桔梗皂苷D对小鼠巨噬细胞和脾淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响

研究探讨桔梗皂苷D对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、腹腔巨噬细胞吞噬及诱导淋巴细胞分泌细胞因子的影响。采用MTT法检测桔梗皂苷D和桔梗皂苷D与脂多糖(LSP)组合对淋巴细胞增殖及金黄色葡萄球菌感染淋巴细胞增殖的影响;ELISA法检测桔梗皂苷D对诱导淋巴细胞γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌的影响;MTT法检测桔梗皂苷D对诱导巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌功能的影响。结果显示,桔梗皂苷D在一定质量浓度范围内,均能诱导淋巴细胞的增殖,促进IFN-γ和IL-6的分泌,且呈双向调节;不能协同LSP诱导淋巴细胞的增殖;在金葡菌感染淋巴细胞时桔梗皂苷D能促进淋巴细胞的增殖,但效果低于桔梗皂苷D单药组;能提高巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的功能。桔梗皂苷D能有效促进脾淋巴细胞的增殖和巨噬细胞的吞噬功能,可通过淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-6发挥免疫增强作用。     

牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

为了探究牦牛脾脏非特异性转移因子(specificity transfer factor,TF)对小鼠淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响,应用ELISA测定了小鼠注射TF后不同时间相关细胞因子分泌量的变化。结果显示,牦牛TF对分泌细胞因子具有促进作用,且用ConA或用TF再次刺激鼠淋巴细胞后各细胞因子分泌量均高于鼠淋巴细胞单独增殖组。其中小鼠γ-干扰素(IFN-γ)含量表现为先增加后减少,峰值出现在第48 h,并持续分泌时间较长,与对照组相比,TF+ConA组鼠淋巴细胞分泌IFN-γ的量在48 h和72 h时显著高于TF组和细胞单独增殖组(P0.05);小鼠白细胞介素-1(IL-1)含量的变化随着时间的延长呈上升趋势;白细胞介素-12(IL-12)的动态变化全部表现出前期(12 h)和中期(48 h)两个分泌高峰,并且在48 h时,ConA协同TF组明显高于细胞单独增殖组与TF组(P0.05);白细胞介素-4(IL-4)的动态变化表现不明显;白细胞介素-2(IL-2)含量随着时间的延长,呈上升再下降的趋势,48 h达到峰值,并显著高于TF组和细胞单独增殖组(P0.05),而后下降。说明TF协同ConA刺激小鼠淋巴细胞后,均可提高各种细胞因子的分泌能力。     

猴头菇多糖协同ConA对小鼠脾细胞分泌Th1、Th2细胞因子及基因表达的影响

研究了猴头菇多糖协同ConA对小鼠体外脾淋巴细胞分泌Th1、Th2细胞因子的量及mRNA表达量的影响,旨在探讨其协同免疫调节机制。用ELISA法检测HEP协同ConA刺激脾淋巴细胞细胞上清液中Th1、Th2细胞因子的量;RT-PCR法检测Th1、Th2细胞因子和转录因子mRNA的表达。结果显示,HEP在25~400mg/L质量浓度范围内能显著协同ConA刺激T细胞亚群Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)和Th2细胞因子(IL-4、IL-6)的分泌及mRNA的表达(P0.05),并显著促进转录因子(T-bet、Gata-3)mRNA的表达(P0.05)。结果表明,HEP能协同ConA促进小鼠脾淋巴细胞Th1、Th2细胞因子的分泌及基因的表达,通过调节Th1/Th2平衡,发挥双重免疫调节作用。     

黄芪多糖对犬脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达的影响

探讨黄芪多糖(APS)对犬脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达的影响。10μg/mL APS作用于ConA或LPS刺激的犬脾淋巴细胞,RT-PCR方法检测相关细胞因子mRNA表达。结果表明,APS对IL-2、IFN-γ和TNF-αmRNA表达有显著增强作用,促进IL-2和IFN-γmRNA表达的效果显著优于ConA,而对IL-4 mRNA表达没有明显影响;在上述相关细胞因子mRNA表达抑制时,APS能使其表达显著提高。结论:APS通过对犬脾脏T淋巴细胞Th1型和Th2型细胞因子mRNA表达的整体调节来促进细胞免疫。     

人参皂苷-Rh2衍生物体外诱生小鼠细胞因子的作用及对NO水平的影响

探讨了经分子修饰后的人参皂苷-Rh2(衍生物)对小鼠脾T淋巴细胞分泌IL-2与IFNγ-、腹腔巨噬细胞分泌TNF-α与NO水平的影响。应用双抗体夹心ELISA法测定3种细胞因子的含量,硝酸还原酶法测定NO的含量。结果表明,衍生物的3个浓度(100,200和300μg/mL)均抑制了IL-2(P<0.01)和NO(P>0.05)的分泌,明显促进了IFN-γ和TNF-α的分泌(P<0.01)。提示衍生物可能是通过细胞因子途径来调节机体的免疫功能。     

PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌的影响

本试验探讨PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌量的影响。选择已免疫CSFV弱毒疫苗的猪为实验动物,提取四肢长骨骨髓,进行T淋巴细胞的分离培养。分别在培养后的24、72 h,用PRRSV特异性肽N1、N2对所培养细胞进行刺激,再进行培养12 h,经离心方法得到细胞上清液,最终检测上清液中细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌含量变化。结果显示,PRRSV特异性肽-N对于免疫猪骨髓中IFN-γ的分泌影响较小,能够抑制IL-12的分泌,不利于机体免疫反应,对IL-10的分泌影响复杂,需进一步研究。     

金丝桃苷对小鼠T淋巴细胞亚群及血清细胞因子的影响

观察金丝桃苷对小鼠免疫系统的作用,将Balb/c小鼠随机分成5组,空白对照组(在第1、3、5天腹腔注射生理盐水)、免疫抑制组(在第1、3、5天腹腔注射环磷酰胺)、给药组(在第1、3、5天腹腔注射环磷酰胺,第1~7天每天以150/300mg/kg金丝桃苷水溶液灌胃)和阳性对照组(在第1、3、5天腹腔注射环磷酰胺,第1~7天每天以0.2mg/kg黄芪多糖水溶液灌胃)。用ELISA法测定小鼠T淋巴细胞亚群CD_3、CD_4、CD_8以及细胞因子IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α的水平。结果表明,与空白对照组相比,免疫抑制组的CD_3、CD_4、CD_8水平以及血清细胞因子IFN-γ、TNF-α水平显著降低(P0.05),IL-4、IL-6及IL-10水平显著升高(P0.05)。给予金丝桃苷后第8天,与免疫抑制组相比,CD_3、CD_4、CD_8水平以及血清细胞因子IFN-γ、TNF-α水平极显著升高(P0.01),IL-4、IL-6、IL-10水平极显著降低(P0.01)。金丝桃苷能通过提高免疫抑制小鼠T淋巴细胞亚群的CD_3、CD_4、CD_8水平以及细胞因子IFN-γ及TNF-α水平,降低IL-4、IL-6、IL-10水平,来拮抗环磷酰胺所致的免疫机能抑制,提高机体免疫功能。     

辣椒碱对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞体外免疫调节活性的影响

为探讨辣椒碱的免疫调节作用。试验利用体外分离培养小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,辣椒碱单药和辣椒碱与脂多糖(LPS)复合刺激脾淋巴细胞,MTT法检测辣椒碱和复合物对脾淋巴细胞增殖的影响;用辣椒碱单药刺激脾淋巴细胞,酶联免疫吸附(ELISA)法检测辣椒碱对淋巴细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)的影响;用辣椒碱单药刺激腹腔巨噬细胞,MTT法检测辣椒碱腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;用ELISA法检测辣椒碱对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6的影响。结果表明,辣椒碱单药和辣椒碱与脂多糖复合均能促进脾淋巴细胞增殖,辣椒碱单药能促进淋巴细胞IFN-γ和IL-6的分泌。辣椒碱单药能增强巨噬细胞的吞噬功能,促进巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌。辣椒碱具有免疫调节作用。     

三型固有淋巴细胞对动物肠黏膜免疫的调节作用研究进展

三型固有淋巴细胞(ILC3)主要分布于小肠黏膜固有层,其分泌的细胞因子白介素(IL)-17、IL-22、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及γ干扰素(IFN-γ)在维持肠道菌群稳定、抵御病原体感染及保护肠黏膜屏障等方面发挥重要作用.但IL-17、IL-22、GM-CSF和IFN-γ等异常活化时还可加重肠道炎症...     

CpG ODN对仔猪淋巴细胞增殖和细胞因子诱生的影响:在体和离体试验

将CpGODN、non CpG ODN分别接种初生仔猪，同时分离仔猪的外周血单核细胞，以CpGODN、non CpG ODN对外周血单核细胞体外培养，分别检测仔猪Th1型细胞因子分泌情况。结果表明，与non CpG ODN和对照组相比，CpG ODN能在体内显著提高仔猪的淋巴细胞白介素-2诱生活性、淋巴细胞增殖、血清中IFN-γ和IL-12水平（P〈0．05），亦能在体外刺激仔猪的外周血单核细胞分泌IFN-γ和IL-12（P〈0．01）。这显示CpG—ODN能显著增强动物的免疫应答能力。     

PRRSV特异性肽对CSF、PRRS免疫猪IFN-γ、IL-10分泌的影响

应用PRRSV-GP5特异性肽刺激CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞,采用ELISA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IFN-γ及IL-10的水平,分析PRRSV-GP5特异性肽刺激后,淋巴细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,CSFV高抗PRRSV低抗体组于PRRSV免疫14d,肽刺激组中IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05);其他组均差异不显著(P>0.05)。PRRSV免疫14d,细胞培养24,72h后加PRRSV-GP5肽刺激,各组中试验组与对照组相比IL-10水平明显降低(P<0.01);PRRSV免疫28d,各组中肽刺激组与空白组相比,IL-10水平均无显著性差异(P>0.05)。结果表明,PRRSV-GP5肽在PRRSV免疫早期可以促进IFN-γ的分泌,并抑制IL-10的产生,但在免疫后期对淋巴细胞分泌的调节作用还需进一步研究。     

HBV转基因小鼠T细胞免疫状态

以正常非转基因 ICR小鼠为对照 ,用 3H-Td R掺入法和 ELISA分别测定了 HBV转基因 ICR小鼠脾淋巴细胞针对 HBe Ag的特异性增殖功能及其培养液上清中 Th1、Th2相关细胞因子 m IFN-γ、m IL-2、m IL-6、m IL-1 0含量。结果 ,HBV转基因小鼠脾淋巴细胞对 HBe Ag刺激引起的增殖反应、HBe Ag与 Con A共同刺激引起的增殖反应及其培养液上清中 4种细胞因子含量均明显低于对照组。以上结果表明 ,HBV转基因小鼠 Th1、Th2淋巴细胞所介导的特异性免疫功能均受到抑制     

猪重组IL-2、IL-4和IFN-γ对口蹄疫合成肽疫苗的免疫增强作用研究

为了研究猪IL-2、IL-4和IFN-γ对口蹄疫合成肽疫苗的免疫佐剂效应,将经测定具有生物学活性的猪重组IL-2、IL-4和IFN-γ与口蹄疫合成肽疫苗配伍免疫仔猪,检测仔猪抗口蹄疫抗体水平和血清细胞因子IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ含量的变化,观察其免疫佐剂效应。结果表明:制备的IL-2、IL-4和IFN-γ重组蛋白质均有较好的生物学活性,其中IL-2和IFN-γ重组蛋白质均能极显著提高仔猪抗口蹄疫抗体水平(P0.01),而IL-4重组蛋白质抑制口蹄疫抗体的产生(P0.01)。血清细胞因子检测结果发现口蹄疫疫苗+IL-4组的IL-4和IL-10含量均较空白疫苗免疫猪显著升高(P0.05),口蹄疫疫苗+IL-2组及口蹄疫疫苗+IFN-γ组的IFN-γ含量较空白疫苗免疫猪极显著升高(P0.01)。结果提示,重组细胞因子IL-2和IFN-γ分别作为免疫佐剂与口蹄疫疫苗联用,能显著增强机体的体液和细胞免疫应答。     

淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞免疫功能的影响

为探讨淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞的免疫功能,体外分离小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,以淫羊藿苷进行刺激,同时设空白对照组和阳性对照组,采用MTT法检测淫羊藿苷对巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测淫羊藿苷对淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的影响。结果显示,淫羊藿苷能够提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能,促进脾淋巴细胞增殖,刺激淋巴细胞细胞因子的分泌。结果表明,淫羊藿苷能够提高小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的免疫功能。