食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达

【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高（27.45%）。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。     

紫菜中金黄色葡萄球菌的检测

笔者在对紫菜中致病菌污染现状分析的基础上,对金黄色葡萄球菌的检测方法进行了比较,结果表明快速检测因其方便省时可靠性高而值得推广应用。     

Presence of laminin receptors in Staphylococcus aureus

A characteristic feature of infection by Staphylococcus aureus is bloodstream invasion and widespread metastatic abscess formation. The ability to extravasate, which entails crossing the vascular basement membrane, appears to be critical for the organism's pathogenicity. Extravasation by normal and neoplastic mammalian cells has been correlated with the presence of specific cell surface receptors for the basement membrane glycoprotein laminin. Similar laminin receptors were found in Staphylococcus aureus but not in Staphylococcus epidermidis, a noninvasive pathogen. There were about 100 binding sites per cell, with an apparent binding affinity of 2.9 nanomolar. The molecular weight of the receptor was 50,000 and pI was 4.2. Eukaryotic laminin receptors were visualized by means of the binding of S. aureus in the presence of laminin. Prokaryotic and eukaryotic invasive cells might utilize similar, if not identical, mechanisms for invasion.     

Iron-source preference of Staphylococcus aureus infections

Although bacteria use different iron compounds in vitGro, the possibility that microbes distinguish between these iron sources during infection has hitherto not been examined. We applied stable isotope labeling to detect source-specific iron by mass spectrometry and show that Staphylococcus aureus preferentially imports heme iron over transferrin iron. By combining this approach with computational genome analysis, we identified hts (heme transport system), a gene cluster that promotes preferred heme iron import by S. aureus. Heme iron scavenging by means of hts is required for staphylococcal pathogenesis in animal hosts, indicating that heme iron is the preferred iron source during the initiation of infection.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究进展

万古霉素在临床上的使用越来越频繁,成为治疗MRSA的最后一道防线;然而,对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的出现,临床上抗感染治疗面临极大困难,引起了医学界普遍的关注。笔者对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的发展、耐药状况、作用机制和相关治疗等方面的研究进展进行了综述。     

金黄色葡萄球菌的群体效应研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中已知的群体效应系统是Agr系统和LuxS/AI-2系统,其在细菌浓度等于或大于1×10~7 CFU/mL时会被激活,通过调控相应基因,间接或直接调控生物被膜的产生和降解、细菌毒素的分泌以及细菌的生长。综述了金黄色葡萄球菌的群体效应研究进展,旨在为今后对金黄色葡萄球菌的研究寻找新方向,金黄色葡萄球菌致病性及生物被膜的形成与金黄色葡萄球菌的群体效应系统之间存在必然联系。     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测

建立一种快速聚合酶链反应(PCR)方法,用于食品中金黄色葡萄球菌的检测.针对金黄色葡萄球菌独有的SEA基因设计1对引物,在PCR体系中对相应片断进行扩增,最后通过电泳技术与阳性对照进行对比来判断阴阳性.结果表明,该方法检出率高,样品中模板DNA含量仅有0.05 pg即可检出金黄色葡萄球菌,24 h即可报告结果.因此,PCR方法是一种高效、敏感、特异性高的检测技术,可用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测.     

Passage of heme-iron across the envelope of Staphylococcus aureus

The cell wall envelope of Gram-positive pathogens functions as a scaffold for the attachment of virulence factors and as a sieve that prevents diffusion of molecules. Here the isd genes (iron-regulated surface determinant) of Staphylococcus aureus were found to encode factors responsible for hemoglobin binding and passage of heme-iron to the cytoplasm, where it acts as an essential nutrient. Heme-iron passage required two sortases that tether Isd proteins to unique locations within the cell wall. Thus, Isd appears to act as an import apparatus that uses cell wall-anchored proteins to relay heme-iron across the bacterial envelope.     

CTAB法在金黄色葡萄球菌DNA提取中的应用

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aures（以下简称金葡菌）是革兰氏阳性球状菌,直径0．8～1．0μm,呈葡萄状排列,有些菌株具有荚膜或黏层,广泛分布于空气、土壤、水、食具以及患有化脓性皮肤病人畜的皮肤上。金葡菌是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种主要细菌,食品受其污染后,不仅腐败变质,     

Toxic shock syndrome and lysogeny in Staphylococcus aureus

Lysogeny, or the presence of temperate bacteriophage, was demonstrated, by means of two Staphylococcus aureus indicator strains, in 11 of 12 strains of S. aureus isolated from patients with toxic shock syndrome. Only 1 of 18 strains of S. aureus that were not associated with toxic shock syndrome showed the presence of bacteriophage. A laboratory strain of S. aureus was lysogenized by bacteriophage from two of the toxic shock-associated strains. These results add support to the theory that lysogeny by one or more bacteriophage in certain strains of S. aureus may be responsible for the pathogenesis of toxic shock syndrome.     

大蒜素对金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究

[目的]研究不同种类,不同处理方法蒜液抑菌效果及大蒜素最低抑菌浓度和对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响,为进一步利用大蒜素资源提供理论依据。[方法]用大蒜提取蒜液为材料,定硫法测定其中蒜素含量,研究大蒜素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。[结果]大蒜液中含有的大蒜素对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,经过机械破碎或挤压得到的蒜液抑菌效果比蒸煮后蒜液好,紫蒜抑菌效果优于白蒜,蒜素的最低抑菌浓度为32 mg/ml。细菌生长曲线表明,对数生长期的金黄色葡萄球菌对大蒜素敏感,而稳定期的菌体抑制作用较弱。[结论]大蒜素在体外对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌作用。     

金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法的比较

为寻求一种较为实用的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）基因组DNA提取方法,对酶解法、十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）法、FDA法、热裂解法等常见的4种不同提取方法进行了改良和比较.结果表明,4种方法中,SDS法提取的DNA质量最好,检测灵敏度高,当金黄色葡萄球菌的DNA稀释至2.95 pg或更少时,SDS法还能够通过PCR将其检测出来;并且该方法的稳定性好,经济性高,是金黄色葡萄球菌基因组DNA理想的提取方法.     

金黄色葡萄球菌GapC基因的克隆和表达

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)GapC蛋白,应用PCR方法扩增出S. aureus菌株BMSM855/23-1的gapC基因,随后将其克隆到pMD18-T载体上.重组克隆pMD-T/gapC经测序后,与GenBank上已发表的序列进行对比分析.然后,将gapC基因插入到pQE-30质粒,构建重组质粒pQE30/gapC.重组质粒转化大肠杆菌E.coli M15(pREP4),IPTG诱导后,SDS-PAGE鉴定GapC融合蛋白的表达.结果表明成功扩增并克隆了S.aureus gapC,该菌株的gapC基因与GenBank上S. aureus BM10株的核苷酸序列一致性为99.3%,推导氨基酸序列一致性为99.4%.SDS-PAGE结果表明,GapC蛋白在E. coli M15(pREP4)中获得表达.     

金黄色葡萄球菌蛋白A基因的克隆

[目的]获得SPA蛋白的IgG结合结构域的基因克隆。[方法]采用优化的CTAB法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,通过PCR扩增获得SPA基因。[结果]金黄色葡萄球菌基因组DNA的纯度较高,完整性好,扩增获得了SPA基因。[结论]改进的CTAB法适用于金黄色葡萄球菌DNA的提取．且成功地获得了SPA基因。为进一步构建SPA非融合表达奠定了基础。     

葡萄球菌铁表面决定簇IsdB的研究进展

金黄色葡萄球菌是一种具有重要生物学意义的细菌,可以引起人和动物的多种疾病。根据目前对葡萄球菌铁表面决定簇系统的研究进展,从IsdB的结构、功能以及应用等方面进行综述。     

牛肉中金黄色葡萄球菌的复核鉴定研究

[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。     

金黄色葡萄球菌荚膜多糖的提取及其多糖含量的测定

为提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖并测定多糖含量.采用超声波破碎菌液,用CTAB结合其中的多糖、CaCl2解离、乙醇沉淀等化学方法提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖,利用苯酚-硫酸法测定其含量.结果显示,得到荚膜多糖0.31 g,含量为65.06%.结果表明,成功提取金黄色葡萄球菌荚膜多糖,并对其含量进行了测定,初步确定了粗提金黄色葡萄球茵荚膜多糖的方法.     

电解水对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响

为了阐明不同性质的电解水在控制金黄色葡萄球菌生物被膜中的作用,本研究分别使用酸性、碱性和中性电解水处理生物被膜,并测定处理前后生物被膜生物量、活性、活菌数和构造的变化。结果表明,酸性电解水能够有效杀死生物被膜中的菌体,但不能有效去除生物被膜;其有效氯含量与杀菌作用呈正相关。碱性电解水能够有效去除生物被膜,其pH值直接影响去除能力。中性电解水的作用与酸性电解水相似。不锈钢表面的生物被膜用碱性、酸性和中性电解水处理10min后,活菌数从7.5lgCFU/cm2分别减少至5.3,2.3和3.2lgCFU/cm2。电解水有潜力成为生物被膜杀菌剂和去除剂。