共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
鸽Ⅰ型禽副粘病毒F基因克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术获得了编码鸽Ⅰ型禽副粘病毒GD-P1分离株F0裂解位点附件884bp的F基因cDNA片段,并将其克隆到pGEM-T Easy质粒中,获得了重组质粒T-pPMV-F-I,核酸序列测定和分析表明,该片段与新城疫病毒强毒株F48E9和HER/33相应区域的同源性分别为87.5%和88.19%,与新城疫病毒弱毒株LaSota和B1株的同源性分别为83.83%和84.15%。该病毒F0裂 相似文献
2.
用EcoRI酶切PR5B4质粒,采用“V”字形内槽电洗脱法回收约0.804Kb牛冠状病毒基因工程抗体4H12/1D4单链基因片段,并将其插入载体质粒PET-17b的EcoRI位点构成重组质粒PET-D4,将重组质粒转化DH5α感受态细胞,在IPTG的诱导下表达,细菌裂解物经SDS-PAGE电泳筛选,发现含PET-D4细菌经诱导新增一条约28KDα蛋白带,该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符,经光密度扫描,表达量约占菌体总蛋白的14% 相似文献
3.
本研究利用对应于PRRSVATCCVR-2332株及LV株ORF5基因保守序列的1对均为25个碱基的引物1005PS、1006PR对PRRSV中国分离株B13进行RT-PCR,扩增出了包括完整ORF5基因的DNA片段,片段长约730bp。将此片段定向克隆入pUC18载体的EcoRI和stI位点之间,获得了B13ORF5基因与pUC18载体的重组质粒。通过EcorI/PstI、EcorI/HindⅢ 相似文献
4.
5.
选用FPV282E4株BamHI7.3kb含非必需区片段,经XbaⅠ酶切,将A、B、C3个片段亚克隆于KS(—)质粒中,同时使D片段自身环化,获得KSFa、KSFb、KSFc、pUCFd4个重组克隆,经酶切鉴定证明亚克隆正确。为以FPV基团组非必需区的BamHI7.3kb片段中BglⅡ片段所在区域构建重组载体质粒和体内重组表达外源基因的研究以及非必需区的核苷酸序列分析奠定基础 相似文献
6.
7.
8.
从云南省弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝,植斑分离,经免疫电镜(IEM)鉴定为TMV(Tobacco mosaic virus),在红花大金元品种中以TMV普通株作对照进行致病力测定,确定为强毒株系。以烟草花叶病毒RNA云南强毒株系为模板。根据国内外研究结果自行设计、合成寡核苷酸引物,通过RT-PCR体外扩增,E.coli菌株DH5a克隆,获得了云南烟草54KD(TMV复制酶)全基因片段,顺序分析表明 相似文献
9.
采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-Ⅰ(huIGF-I)基因的4条寡核苷酸 片段,再通过片段1、2与3、4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIGF-IDNA片段,用 EcoR I/PstI酶切后克隆于 pGEM T-Easy Vector,经测序证明所得 DNA序列与设计的序列完全一致;选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子,并在ATG处增加Kozak序列后,插入pBI121的BamHI/ SacI位点,构建了以 35S为启动子的植物表达载体;以 Hind II/EcoRI切下“35S-Kozak-IGF-I-NOS(ter.)”插入 pCAMBIA2300之Hind II/EcoR I位点,构建成huIGF-I植物表达载体;通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农 杆菌EHA105(Rif.r),并以菌落原位杂交技术和 DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选,所获得的重组农杆菌菌株为培育huIGF-I豆药用植物奠定了基础。 相似文献
10.
本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应,体外扩增芜菁花叶病毒(TuMV)外壳蛋白基因及其克隆,并在大肠杆菌中获得表达的结果;从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物,提纯后,经50ng/mL蛋白酶K和0.5%SDS处理,苯酚/氯仿和氯仿抽提两次,酒精沉淀,获得了纯化的病毒RNA,该RNA与oligo(dT)_(15)退火后,在AMV反转录酶的作用下合成了单链cDNA,然后加入用以扩增TuMV-CP基因的上下游引物,35个循环后,得到了一条长约0.85kb的片段,将该片段克隆到pUC18质粒的SalⅠ限制性酶切位点,分析了限制性酶切图谱,分析表明该片段含有EcoRⅠ和XbaⅠ以及引物设计时带人的McoⅠ三个酶切位点,该片段克隆到大肠杆菌(Escherichiacoli)原核表达载体pKK233-2质粒的NcoⅠ和HindⅡ位点后,经IPTG诱导,以该病毒的抗血清为第一抗体,Westernblot检测该基因的表达产物,结果表明该基因的表达产物为TuMV-CP蛋白,因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。 相似文献
11.
从成熟的番茄果实中提取总RNA,进行RT-PCR扩增合成乙烯形成酶cDNA,并将其克隆至载体Bluescript的EcoRV位点,经限制酶谱分析,构建亚克隆进行全序列测定和序列分析。将所克隆基因以反义基因的形式定向重组到载体pSPROK上,同时将带有完整启动子和终止子的标记基因BAR基因引入pSPROK中,最终获得表达乙烯形成酶反义基因和BAR基因的植物表达载体pBAR-EFE。 相似文献
12.
13.
家蚕Y,Nl基因和Z染色体的RAPD分子标记研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用RAPD技术,对转座黄血(W^Y)系统Y010,X射线诱发染色缺失的第1无半月纹Ml系统,伴性赤蚁油蚕(Z^schodZ^schod)与782(Z^++W)的P1,P2及F1,RF2进行了多态性分析,结果表明,通过60、120和205个随引物的扩增,获得了与W^Y连锁的OPG-03650与Nl^l连锁的OPA-08480和Z^++连锁的3个RAPD标记,初步讨论了RAPD技术在家蚕分子标记寻找 相似文献
14.
从5个爆发产蛋下降综合的鸡场收集80个样品中,分离到5株具血凝性的病毒,命名为CAV-Z16、Z2、W4、T1和T3株。病毒大小70-80nm,无囊膜,二十面体对称;对氯仿不敏感,PH3-5下稳定,50~60℃1小时不被实例灭活;在DEF细胞上繁殖能被IUDR抑制;经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与AV-127株属同一血清型,鉴定为EDS-76病毒。CAV-Z16株能在鸭胚上繁殖,致死鸭 相似文献
15.
马铃薯Y病毒复制酶基因植物表达载体构建及转基因烟草的培育 总被引:5,自引:0,他引:5
用BamHI/KpnI从重组克隆PZD-1中切下马铃薯Y病毒脉坏死株系复制酶基因,将其插入质粒PROD2相庆切点中构成植物表达载体。用重组pROD2转化农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404菌株,通过重组农杆菌侵染叶盘将复制酶基因转入烟草品种NC89中获得转基因植株。分子生物学检测结果表明,复制酶基因在转基因烟草中获得品种NC89中获得转基因植株。分子生物学检测 相似文献
16.
通过根癌农杆菌介导法获得新疆甜瓜抗病优质新品系 总被引:2,自引:0,他引:2
用新疆甜瓜无菌苗子叶块,通过根癌农杆菌介导法,将黄瓜花叶病毒外壳蛋白cDNA基因导入“新红心脆”等6个品种(系),经卡那霉素筛选,获得大量Km抗性植株,其中部分Km抗性植株经Luis法检测,表达了胭脂碱合成酶活性。进一步经SDS-PAGE,DOT-Elisa,PCR特异扩增。Western-Blot等方法检测,结果证明了Km抗性植株基因组中整合了CMV-CP基因,长度为1kb,并能有效表达,表达产 相似文献
17.
新型伪狂犬病病毒基因缺失株的构建及生物学特性研究(初报) 总被引:16,自引:0,他引:16
以伪狂犬病病毒Fa株为起始材料 ,构建的 pp6 3LacZ转移载体质粒与PRVFaDNA经磷酸钙转染 ,在MDBK细胞内同源重组获得PRVFagE-/gI-/LacZ基因缺失株。以PDTK3 - 6 ,5 - 6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK-143细胞内同源重组 ,获得PRV -SA2 15等三基因缺失株。经核酸杂交证实构建是成功的。生物学特性观察显示 ,该基因缺失株对多种动物安全 ,具有良好的免疫原性 ,有望成为一株优秀的PRV疫苗候选株。 相似文献
18.
研究了红参皂甙(总皂甙,皂甙组分Rb1和Rg1)对酵母菌(Saccharomycescerevisiae)中的β-半乳糖甙酶诱导的影响,认为人皂甙将穿过细胞膜,在细胞核中起甾体激素作用。为了达到这一目的,把包含CAL1启动子的EcoRI的DNA片段(685bp)插入到质粒YEp356(7.966kb)的LacZ基因上游的多酶切点,假设由此产生的质粒PGAL1-LacZ在半乳糖存在下仅表达β-半乳糖 相似文献
19.
尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将人尿激酶原基因cDNA分别插入到真核表达载体pcDNA3的CMV启动子和pSV2neo的SV40启动子下游,构建了重组表达质粒pcDNA3-UK和pSV-2-UK分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染BHK21细胞。ELISA检测结果表明,pcDNA3-UK和pSV2-UK在哺乳动物细胞中能够表达,72h表达量分别为28.7ng/ml和13.5ng/ml。 相似文献
20.
用 P C R 技术,从马立克氏病病毒( M D V) C V I988/ C 株感染的鸡胚成纤维细胞( C E F)基因组 D N A 中扩增出含起始密码子的 M D V pp 38 基因同源物编码序列。在以 Digoxigenin ( Dig.)标记的 pp38 基因作为探针,在 Southern blot中,该探针能识别该 P C R 扩增片段。将该 P C R 扩增片段在 Bam HⅠ和 PstⅠ位点克隆进 p U C18 质粒载体,酶切分析筛选到含 pp38 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 pp 38 基因同源物克隆。 相似文献