蝉棒束孢菌的生物学活性研究进展

蝉棒束孢菌（Icaria cicadae Miq．）是中药蝉花（Cordyceps ciecadae Shing）的无性型,作为一种功能食品被用于预防和治疗多种疾病,具有广阔开发利用前景。从蝉棒束孢菌化学成分、生物活性及发酵生产等方面的研究现状进行概述,探讨了该研究领域的发展前景。     

褐蘑菇多糖脱蛋白方法研究

对褐蘑菇多糖脱蛋白方法进行研究.以糖保留率和蛋白去除率为指标,对Sevag法、三氯乙酸法、氯化钠法、氯化钙法、盐酸法和木瓜蛋白酶法6种脱蛋白方法进行比较.结果表明,酶法脱蛋白效果最好,Sevag法也能达到近似的脱蛋白效果.通过正交试验确定了Sevag法的最优条件为:样品:氯仿一正丁醇3:1,氯仿:正丁醇5:1,振荡20 min,添加试剂2次.     

响应面优化蛹虫草多糖脱蛋白工艺研究

以人工培养的蛹虫草（Cordyceps militaris…L.）为原料,以多糖损失率和蛋白去除率为指标,采用木瓜 蛋白酶对蛹虫草粗多糖进行脱蛋白处理,通过单因素与响应面分析法探索蛹虫草多糖除蛋白的优化工艺条件。结 果表明当酶液与样液的体积比为1.72∶1、酶解温度为64℃、pH…6.23、酶解时间为3…h时,蛋白质脱除率为68.9%, 多糖损失率为10.13%,结合一次Sevage法后,蛋白脱除率与多糖损失率分别为83.37%、19.43%。     

浙江天目山蝉花虫草的分离及基质栽培

在浙江天目山竹林土壤感染的竹蝉若虫上分离获得了一株蝉花虫草TM06菌株,分析了TM06菌株ITS序列,采用小麦为基质建立了TM06菌株的基质栽培技术.结果表明,分离获得的TM06菌株与蝉花虫草亲缘关系最近,以小麦为基质可培养蝉花虫草TM06的子实体,添加5％的蝉蛹粉可显著提高子实体产量,每瓶子实体干重平均为11.61 ...     

传统药用菌蝉花退化菌株虫体活体复壮的研究

选择不同退化程度的蝉棒束孢（Isaria cicadae）菌株,用柞蚕蛹（Antheraea pernyi）和大蜡螟（Galleria mellonella）作为替代寄主进行复壮,并对复壮后的菌株进行了栽培验证实验。结果表明,蚕蛹复壮效果优于大蜡螟,但是复壮周期较后者长1倍。所有菌株均能通过注射接种侵染蚕蛹,但菌株退化程度不同对蚕蛹的侵染力不同;侵染大蜡螟的方法不同,其效果有显著差异,菌液浸蘸法优于固体培养物接触法。退化严重的菌种通过虫体复壮难以恢复产孢梗束能力。     

蝉拟青霉多糖的纯化工艺

以多糖含量为指标,对除蛋白、脱色、透析纯化工艺参数进行优化,以期提高蝉拟青霉多糖的纯化工艺水平。结果显示:以木瓜蛋白酶提取液,Sevag法脱蛋白2次基本除蛋白完全;AB-8型大孔吸附树脂纯化效果最好,在p H为7、温度25℃、4mg/m L上样液浓度、2m L/min上样速度;透析时间为72h的纯化条件下,纯化效果最好。     

蝉拟青霉多糖醇沉淀研究

为进一步对蝉拟青霉多糖醇沉淀工艺进行研究,对提取时间、醇沉浓度、浓缩倍数等提取工艺影响因素分别做了探讨,并通过正交实验得出了较优化提取工艺路线。结果表明,醇沉时间为60 h,醇沉浓度为70%,浓缩倍数为3倍时进行醇沉试验最佳。     

提高蝉拟青霉多糖产量的液体发酵条件研究

以蝉拟青霉(Paecilomyses cicadae)0305-3菌株为材料,研究了提高蝉拟青霉多糖含量的液体发酵条件。结果表明,蝉拟青霉多糖含量的最佳液体发酵条件为:在液体培养基中,以7%的接种量将浓度为107个/mL的孢子悬液接入装液量为20%的液体培养基中,于pH 7、27℃1、50 r/min的转速下发酵7 d,0305-3菌株的多糖产量可达3.24 g/L。     

蝉拟青霉多糖反馈抑制的初步研究

在摇瓶中考察了蝉拟青霉发酵菌丝体生长、多糖合成的动态过程,探讨了蝉拟青霉多糖自身反馈抑制作用。在培养144 h后,生物量达到最大值31.07 g/L;培养168 h后,蝉拟青霉多糖达到最高浓度3.24 g/L,大致与生物量变化的趋势呈正相关。在摇瓶培养基中添加同源多糖,以浓度梯度实验法考察培养基中的同源多糖浓度对蝉拟青霉菌丝体及多糖产量的影响。结果表明:当培养基中添加的同源多糖浓度大于0.6 g/L时,蝉拟青霉菌丝体及多糖的产生明显受到抑制,随着培养液中同源多糖浓度的增加,反馈抑制作用逐渐增强,当浓度达到2.2 g/L时,蝉拟青霉菌丝体的生长和多糖的产生完全被抑制。     

竹林中虫草及其相关真菌的研究

对安徽省3个不同地区竹林样地的虫草及虫生真菌进行了野外采集和调查,发现安徽省竹林中分布的虫草分别为多座线虫草（小蝉草）Ophiocordyecps sobolifera、大蝉草 Cordyceps cicadae、拟细线虫草 O. gracilioides、一种线虫草 O. sp.;主要虫生真菌分别为蝉棒束孢 Isaria cicadae、细脚棒束孢 I. tenuipes、球孢白僵菌 Beauveria bassiana、布氏白僵菌 B. brongniartii、柱孢绿僵菌 Metarhizium cylindrosporae。其中蝉棒束孢最多,在3个地区竹林中均占60%以上。竹林中主要寄主为蝉若虫,在3个地区竹林中均占80%以上。并且对竹林中蝉棒束孢的发生规律和发生周期进行了研究。     

不同食用方式下蝉花麦角甾醇、虫草素、腺苷和多糖的比较

开展对蝉花不同食用方式下其子实体、菌核、浸提液和浸提后蝉花,进行麦角甾醇、虫草素、腺苷和多糖的定量研究,以期得出有实用价值的差别性数据,为对蝉花进一步的综合利用提供理论数据。不同食用方式分为直接食用蝉花粉末、水煮后制剂和水煮后蝉花整食。根据市场上将蝉花质量高低按子实体大小划分,分别开发食用蝉花子实体、蝉花菌核、蝉花浸提液和浸提后蝉花。研究结果表明:(1)麦角甾醇。子实体中为0.34±0.05 mg·g~(-1),浸提蝉花中为0.31±0.03 mg·g~(-1),菌核中为0.07±0.01 mg·g~(-1),浸提液中未检出。(2)虫草素。子实体中为0.54±0.04mg·g~(-1),浸提蝉花中为0.28±0.02 mg·g~(-1),浸提液中为0.37±0.03 mg·g~(-1),菌核中为0.14±0.02 mg·g~(-1)。(3)腺苷。子实体中为0.61±0.04 mg·g~(-1),浸提蝉花中为0.35±0.05 mg·g~(-1),菌核中为0.30±0.06 mg·g~(-1),浸提液中为0.45±0.04 mg·g~(-1)。(4)多糖。菌核中为(14.84±1.79)%,浸提蝉花中为(13.34±0.95)%,子实体中为(13.17±1.02)%,浸提液中为(9.61±0.71)%。结果显示,蝉花子实体、菌核与浸提前后蝉花活性成分存在差异。     

肉苁蓉多糖脱蛋白工艺的优化

优选肉苁蓉多糖的脱蛋白工艺,为肉苁蓉多糖纯化提供试验依据。以脱蛋白率为指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag联合法对肉苁蓉粗多糖的脱蛋白效果,采用正交试验优选最佳工艺。结果表明,Sevag法优于酶法和酶-Sevag联合法,Sevag法脱蛋白的最佳工艺为:三氯甲烷与正丁醇的体积配合比4∶1,料液体积比1∶3,搅拌40 min,脱蛋白4次。在该工艺下平均脱蛋白率为87.11%,RSD为1.34%;平均多糖保留率为83.05%,RSD为1.54%。试验证明该工艺稳定可靠,适用于肉苁蓉多糖的纯化。     

蝉花多糖提取工艺的优化

利用水提法对野生蝉花进行多糖提取,通过预浸泡时间、超声时间、料液比等不同提取条件的试验,探索不同因子对蝉花多糖提取的影响,以优化多糖提取工艺。结果表明,在60 ℃的提取温度下,预浸泡的加水量20倍、超声时间45 min、预浸泡时间6.5 h时,蝉花多糖的提取率得到提高,达27.0%。     

蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究

采用以大米、蚕蛹为主原料的培养基培养蛹虫草子实体。通过正交实验对蛹虫草水溶性多糖的提取工艺进行了研究,利用蒽酮-硫酸法来测定多糖含量。发现90℃、加水20倍、分3次提取、每次3 h为最佳提取条件。同时考查了不同除蛋白方法对虫草多糖的蛋白去除效果。     

酶法提取蝉拟青霉多糖的研究

用正交优化的方法分别研究木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶对蝉拟青霉多糖得率的影响。结果表明,木瓜蛋白酶法提取的多糖产量最高,其最佳提取条件是:温度50℃、pH7、木瓜蛋白酶1%、酶作用时间2h。     

酶-Sevag法除酸浆果实多糖蛋白工艺的研究

[目的]优化木瓜蛋白酶-Sevag法去除酸浆(Physalis alkekengi L.)果实多糖中蛋白质的工艺条件。[方法]以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,通过对酶解温度、时间、p H及酶添加量进行单因素试验及L9(34)正交试验确定酶解条件,并结合Sevag试剂除蛋白。[结果]各因素对酶解法脱酸浆果多糖液蛋白的影响程度大小依次为:酶解温度、酶解时间、p H、酶添加量。在酶解温度60℃、酶解时间2.0 h、p H 6.0、酶添加量2.5%条件下,粗多糖液蛋白脱除率为62.07%,多糖保留率为93.16%。原料经酶处理后,可使游离蛋白和部分与多糖结合的蛋白质被水解,再经Sevag试剂(氯仿∶正丁醇为4∶1)处理2次,蛋白质脱除率为81.65%,多糖保留率为89.43%,可达到较理想的脱蛋白质效果和较高的粗多糖保留率。[结论]采用酶和Sevag试剂相结合的方法除酸浆果多糖中的蛋白质,效果良好,操作简单,可为酸浆果多糖的纯化提供理论依据,但其对多糖结构和生物活性的影响还有待于进一步研究。     

竹林中虫草及其相关真菌的研究

对安徽省3个不同地区竹林样地的虫草及虫生真菌进行了野外采集和调查,发现安徽省竹林中分布的虫草分别为多座线虫草(小蝉草)Ophiocordyecps sobolifera、大蝉草Cordyceps cicadae、拟细线虫草O.gracilioides、一种线虫草O.sp.;主要虫生真菌分别为蝉棒束孢Isaria cicadae、细脚棒束孢I.tenuipes、球孢白僵菌Beauveria bassiana、布氏白僵菌B.brongniartii、柱孢绿僵菌Metarhizium cylindrosporae。其中蝉棒束孢最多,在3个地区竹林中均占60%以上。竹林中主要寄主为蝉若虫,在3个地区竹林中均占80%以上。并且对竹林中蝉棒束孢的发生规律和发生周期进行了研究。     

茅山地区蝉花菌株的分离及其多糖生物活性的研究

对采自江苏句容茅山地区的蝉花进行组织分离,获得1株组织分离菌株,运用rNDA ITS区段对分离菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,该菌株为虫草属类的被孢霉属菌株,命名为JR＿cds1。蝉花中虫草素含量显著高于蚕蛹虫草和冬虫夏草。通过水提醇沉以及Sevage法除蛋白等方法提取蝉花多糖,研究其生物学活性及抑菌作用,结果显示,该蝉花多糖具有较高的清除DPPH自由基活性,高的Fe2＋螯合能力,抑制血管紧张素转化酶（ACE）的活性;对大肠杆菌（G－）和枯草芽孢杆菌（G＋）以及链格孢属真菌显示较好的抑菌效果。     

江苏省天王镇磨盘山金蝉花分离菌株鉴定及系统发育分析

蝉花是一种名贵的传统中药,其分离物多样性丰富,不同菌株的药理作用及生物活性物质含量差异明显,因此,分离物的确证是蝉花研究的关键环节.对江苏省句容市天王镇磨盘山采集的金蝉花标本分离物进行菌落形态、产孢结构观察,并依据ITS区序列进行系统发育分析,确定为蝉棒束孢菌的不同地理株.该研究对于扩大传统中药资源,进一步深入研究该菌株的药理作用及活性成分具有重要意义.     

茶树菇多糖脱蛋白方法研究

将传统的多糖提取方法、胰蛋白酶的"酶解-透析"作用及活性炭处理相结合去除茶树菇多糖提取液中的蛋白质。结果表明:蛋白质去除较完全,多糖的损失率较少,同时还可去除色素、果胶和核酸等杂质。