桉树焦枯病菌ABC转运蛋白的鉴定与分析

[目的]利用生物信息学方法探讨ABC转运蛋白在焦枯病菌对桉树侵染过程中的解毒作用,为揭示桉树焦枯病致病机制奠定基础。[方法]本文利用BLAST、HMMER、Pfam数据库、TCDB数据库在全基因组内对桉树焦枯病菌的ABC转运蛋白进行鉴定和分类,并通过Prot Camp和IBS分别进行亚细胞定位和结构域图绘制,依据同源性对其功能进行推测分析。[结果]表明:桉树焦枯病菌共有70个ABC转运蛋白,它们分属于8个亚族。71%的转运蛋白位于细胞膜,10%位于液泡,其余部分位于线粒体、过氧化物酶体、内质网等内膜系统上。桉树焦枯病菌ABC转运蛋白包含全分子、四分之三分子、半分子及四分之一分子。根据同源性推测桉树焦枯病菌ABC转运蛋白与MDR、PDR、HMT、MPE、STE、P-FAT等几种转运蛋白具有较高相似性,同时还与核糖体合成、翻译、过氧化物酶体合成的ABC转运蛋白具有较高相似性。[结论]桉树焦枯病菌ABC转运蛋白除作为外排泵转运外源化学物质、疏水性化学分子等物质。还参与细胞代谢、翻译、核糖体的合成、mRNA的输出、β氧化,并通过为辅酶Q的辅助因子增强呼吸代谢等多项生命活动为焦枯病菌的侵染提供能量。     

桉树焦枯病对桉树生长量的损失估计研究

按照桉树焦枯病不同发病等级调查桉树各因子生长量,分析不同病级对桉树胸径、树高和材积生长的影响。结果表明,当发病等级达到Ⅳ级时对胸径、Ⅲ级时对树高、Ⅱ级时对材积的生长已经造成极显著影响。根据不同发病等级与损失率的关系进行回归分析,建立了胸径、树高和材积的损失率估测模型,该模型估测结果与调查实测数据相对误差1.32%(精度为98.68%)。以此模型估算福建省桉树人工林焦枯病危害,材积年损失率23.53%,年经济损失0.518亿元。     

桉树焦枯病防治指标的研究

根据P·V·L=W,以及公顷损失率估测模型,建立了经济危害允许水平时的病情指数XEIL的数学模型:XEIL=(100WPV-3.6107)/1.2914,以及防治指标或经济阈值XET的数学模型:XET=(XEIL-T·R)·Q=[(100WPV-3.6107)/1.2914-T·R]·Q。当病害的病情指数大于XET时应及时采取防治措施,而当病害的病情指数低于XET时则不需要防治。另外,根据不同防治措施的防治效果及防治费用等得出了不同防治措施下具体的经济危害允许水平和防治指标值。     

AtMET1基因克隆及化学诱导表达分析

正DNA甲基化是植物基因组中普遍存在的一种的重要表观遗传学机制,对植物生长发育及进化起着重要的调节作用[1-2]。植物体DNA甲基化的建立和维持受多个基因的协同调控,其中MET1(DN-MT1-like METHYLTRANSFERASE 1 gene)是在植物中最早分离出来的甲基化相关基因,编码DNA甲基化转移酶1(MET1,Methytransferase1),该酶主要负责保持CG位点的甲基化,通过DNA甲基化作用影     

桉树萌芽林焦枯病预防营林技术及效益分析

指出了广西属亚热带地区,是我国桉树人工林种植的主要栽培区,桉树种植面积达到3000多万亩,桉树具有生长迅速、可多次萌芽更新的生物学特性。大部分种植户对采伐林地进行萌芽更新利用,但焦枯病是广西桉树萌芽林较严重的病害之一。为此,深入探讨了桉树萌芽林焦枯病预防营林技术,并分析了桉树萌芽林焦枯病预防营林技术对桉树种植的经济、生态、社会效益的影响。     

桉树焦枯病病原菌特性的观察

对桉树焦枯病病原菌３种典型的５隔膜、３隔膜和１隔膜分生孢子进行了研究。５隔膜病原菌致病力最强，３隔膜次之，１隔膜较弱。匀菌剂菌毒清对３种病原菌有明显的抑制作用。     

桉树的严重病害——焦枯病

近年来,随着桉树速生品种在我区引进、推广,桉树种植面积迅速增加,病虫害的问题越来越突出。据1991年、1992年调查,焦枯病在我区只是零星发生,而1993年桉树的主要种植区青枯病严重发生,焦枯病也很严重,这是历年来所没有过的。桉焦枯病在一、二年生桉幼林普遍发生,尤以钦州市那彭镇、来宾县铁帽山林场、东门林场的二年生桉幼林最为严重。病害严重发生的林地,大片植株中、下部叶子焦枯脱落,有的甚至枯死。一年生桉树下部叶子发病的现象也很普遍,但严重程度不及二年生桉树。桉焦枯病虽然尚未造成大片桉树枯死,但在生长高峰期     

水杨酸诱导桉树对焦枯病的抗性与叶绿素荧光参数的关系

以巨尾桉(Eucalyptus grandis×Eucalyptus urophylla)为试验材料,研究不同浓度水杨酸(SA)诱导桉树对焦枯病抗性与叶绿素荧光参数的关系。结果表明,SA能降低Fo值,提高Fm、Fv值,表现为先上升后下降的变化趋势。SA处理的桉树叶片Fv/Fo、Fv/Fm值,第3天达到最大值,说明SA 1～3 mmol.L-1处理的抗焦枯病的持久期为3 d。SA 1 mmol.L-1处理的桉树叶片Fo值最小,Fm、Fv、Fv/Fo和Fv/Fm值最高;说明SA 1mmol.L-1处理的效果最好,能有效地减轻光合机构的损伤,一定程度上抑制焦枯病菌的侵害。     

12种桉树焦枯病病原菌对10种桉树无性系致病性初步分析

为了明确在中国发现的桉树叶片焦枯病病原菌Calonectria spp.对桉树的致病力大小,并测定不同桉树无性系对Calonectria病原菌抗病性的强弱,本试验采用在中国发现的12种Calonectria属（Ca. cerciana、Ca. chinensis、Ca. hongkongensis、Ca. microconidialis、Ca. papillata、Ca.parakyotensis、Ca. pauciramosa、Ca. pentaseptata、Ca. pseudoreteaudii、Ca. seminaria、Ca. terrestris、Ca. tetraramosa）共29株致病菌对10个桉树无性系（DH32-22、DH32-29、EC152、EC153、EC155、G1、K31、OC14、U6、W5）进行了室内离体叶片致病性测定。结果显示：12种被测试Calonectria病原菌均能在不同程度上使10个桉树无性系离体叶片产生病斑;不同种Calnectria病原菌对同一桉树无性系的致病性差异显著,不同桉树无性系对同种Calonectria致病菌的抗病能力也存在显著差异。     

广西桉树焦枯病的流行规律研究

桉树焦枯病是广西近年来较严重的桉树病害之一。经常规组织分离鉴定确定广西桉树焦枯病病原菌主要有5种:Cylindrocladium quinqueseptatum,Cy.floridanum,Cy.scoparium,Calonectria sulawesiensis,Ca.hongkongensis。其中Ca.sulawesiensis和Ca.hongkongensis是国内新发现的2种焦枯病菌。在广西,桉树焦枯病4月下旬开始发病,12月初结束,高峰期在7—8月。病害的发展与当地气候条件关系密切,尤其是降雨量、相对湿度和温度直接影响病害的发生程度。该病的发生程度与桉树的树龄、品种、所处地理位置、坡向、坡位有关。一年生以下桉林或桉苗、北坡和山脚洼地的树林发病较重;广西的两大主栽无性系中,广林9号抗病性较强,而DH 32-29相对较感病。     

桉树种系对焦枯病抗性的初步测定

为研究福建省有关桉树种系对焦枯病的抗性差异,选育抗病种系,2006年通过野外自然发病情况调查和室内人工接种测定,将收集的11个在福建主栽的桉树种系初步划分为抗病种系——巨尾桉9224、尾细桉M1;中抗种系——巨赤桉201-2、邓恩桉、柳桉、巨尾桉广9和尾巨桉Ug9;中感种系——本沁桉、尾巨桉3229;感病种系——巨桉3号、巨桉5号。     

板栗叶焦枯病相关病菌分离及病因初探

目的 近年河北板栗主产区大面积严重发生板栗叶焦枯病,造成板栗减产和栗农经济损失,该病害发病原因亟待明确,尽早进行有效的防控。 方法 通过林间症状调查和病叶组织样本微生物分离、离体叶片及盆栽苗接种致病柯赫法则验证,结合果园管理措施和环境因素分析,对病因进行了探讨。 结果 该病栗园病树率可达10%~50%,单株树病叶率可至90%以上,病叶主要症状为叶缘及叶脉间组织干枯。林间、室内湿培及显微镜切片均未发现病组织存在病症或病原菌组织。组织分离纯化获得相关微生物菌株102株,均为真菌,归属10科12属15种,丰度最高为Alternaria alternata。致病性接种试验表明,其中的Ophiognomonia setacea和Coniothyrium pyrinum能引起接种组织局部褐变发病,但症状表现与林间叶焦枯病有差异。 结论 研究发现Ophiognomonia setacea和Coniothyrium pyrinum两种真菌具有致病性,可在中国板栗引发叶斑病,但症状不同于发生于栗园的板栗叶焦枯病。当前频发性树叶焦枯病类病害常见诱发因素,多与气候变暖、异常天气、环境污染以及生产和病虫害管理措施不当引起的品种生长不适应密切关联。河北大面积发生的板栗叶焦枯病病因有待综合非侵染因子进行深入研究和探明,以期为尽快采取有效防控措施奠定基础。     

桉树焦枯病和青枯病的分离鉴定与防治方法

简要概述了危害我国华南地区桉树产业发展的主要病害——桉树焦枯病和青枯病,介绍了两种病害的部分研究方法,分析了两种病害的防治方法及其研究方向,以期为相关研究提供借鉴。     

桉树溃疡病菌的生物学特性研究

经鉴定,桉树溃疡病的病原为Phoma eucalyptica Sacc.。该病原菌菌丝生长的最适温度是25～30℃,最适pH为5～7.5。病原菌分生孢子在25℃下24 h内萌发率93%,葡萄糖和蔗糖溶液对孢子的萌发有一定促进作用。病原菌对高温的耐受性较强,菌丝和分生孢子的致死温度分别为58℃和65℃。病原菌菌丝和孢子通过伤口侵入寄主体内,无伤接种不发病。     

慈竹WRKY转录因子基因克隆及其胁迫诱导表达

为了解慈竹WRKY生物学功能以及通过基因工程手段改良竹类植物。利用已获得慈竹转录组数据,克隆获得2条WRKY转录因子,分别命名为BeWRKY1(Gen Bank:KJ462124)和Be WRKY2(Gen Bank:KJ462125),两者分别编码189和295个氨基酸残基。序列分析表明,两者编码的蛋白均含有一个完整的WRKY superfamily的保守结构域。BeWRKY1属于Ⅱc亚家族;Be WRKY2则与Ta WRKY16和AtWRKY39等聚为一枝,属于Ⅱd亚家族。定量PCR分析表明,Be WRKY1和Be WRKY2分别在茎和完全展开叶中具有较高表达量。200mmol·L~(–1)NaCl和20%PEG 6000胁迫处理激活了Be WRKY1表达,却减少了BeWRKY2的转录积累。结果表明BeWRKY1可能短时间内迅速参与逆境响应;Be WRKY2对干旱和ABA胁迫伤害更为敏感,而可能不参与高盐类胁迫保护反应。     

水曲柳CUC1基因克隆及瞬时表达分析

[目的]本研究克隆了水曲柳(Fraxinus mandshurica?Rupr.)CUC1基因,分析其表达特性,为该基因在水曲柳再生的调控研究中奠定基础.[方法]从水曲柳苗克隆FmCUC1基因,利用生物信息学软件分析Fm-CUC1基因的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列,并构建系统进化树;利用农杆菌介导法将FmCUC1...     

6种杀菌剂对不同桉树焦枯病病原菌的室内毒力测定

由丽赤壳属（Calonectria）真菌引起的桉树焦枯病是桉树世界范围内的重要病害之一。为了筛选能有效抑制丽赤壳属病原菌的杀菌剂,本研究采用6种杀菌剂（百菌清、代森锰锌、多菌灵、甲基硫菌灵、嘧菌酯、咪鲜胺）对5种桉树丽赤壳属病原菌（Ca. cerciana、Ca. crousiana、Ca. fujianensis、Ca. pauciramosa、Ca. pseudoreteaudii）通过菌丝生长法测定其室内毒力强弱。结果显示：6种杀菌剂对5种丽赤壳属病原菌均有一定的抑制作用,且差异显著。不同杀菌剂对同一丽赤壳属病原菌的抑制效果差异显著,不同丽赤壳属病原菌对同一杀菌剂的敏感性也存在差异。综合比较分析,咪鲜胺能有效发地抑制本研究中测定的丽赤壳属病原菌菌丝生长。     

毛竹PeAMT2;1基因克隆及表达分析

铵态氮是植物吸收利用的主要氮源之一,铵态氮的吸收主要通过铵转运蛋白(AMT)进行。为从分子水平上探讨竹子中AMT的分子特征,本研究通过RT-PCR的方法对毛竹(Phyllostachys edulis)中的一个AMT基因编码区进行了克隆分析,并对其系统进化和表达模式进行了分析。结果表明,该基因的开放阅读框为1458 bp,与NCBI数据库中毛竹序列(FP095543)的一致性为99.04%,被命名为PeAMT2;1。PeAMT2;1编码485个氨基酸,分子量为51.62 kDa。蛋白序列分析表明,PeAMT2;1编码的蛋白序列具有11个跨膜结构域,与其他植物的AMT2亚家族具有较高的同源性,聚类分析与水稻、二穗短柄草等的AMT2亚家族成员在同一个分支。组织表达分析表明,PeAMT2;1在毛竹的根、茎、叶中均表达,但在根和茎中表达量相对较高。本研究对于今后深入了解PeAMT2;1的基因功能奠定了基础。     

暴马桑黄SbLSD基因克隆及差异表达分析

【目的】暴马桑黄是一种重要的药用资源,三萜是其发挥药用功效的主要成分,但是目前获取大量三萜仍然非常困难。通过对暴马桑黄三萜合成途径中的羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因进行克隆及差异表达分析,以期深入了解暴马桑黄三萜合成的调控机理,进而提高三萜产量。【方法】采用PCR扩增得到LSD基因cDNA序列全长,利用生物信息学软件对该基因编码的氨基酸序列进行分析;采取同源重组方法构建原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,SDS-PAGE检测;qRT-PCR技术分析LSD基因在暴马桑黄不同发育阶段转录水平差异。【结果】暴马桑黄LSD基因cDNA全长1 662 bp,编码553个氨基酸,相对分子量为62.26 kDa,命名为SbLSD(登录号为MN864180);跨膜区和亚细胞定位预测显示SbLSD蛋白是在内质网和高尔基体发挥作用的跨膜蛋白;系统进化树结果表明暴马桑黄和灵芝的LSD蛋白同源性最高,符合物种经典分类;SDS-PAGE结果证实在62.26 kDa附近出现目的蛋白条带,说明所获得的基因可以成功表达出蛋白;从荧光定量分析结果中可以看出SbLSD基因转录水平在不同发育阶段有差异性,并且在子实体阶段该基因转录水平最高,与羊毛甾醇合成的基因变化规律相吻合。【结论】通过对SbLSD基因的分子鉴定解析,为进一步揭示该基因在暴马桑黄三萜合成途径中的功能奠定基础。