黄瓜枯萎病接种方法及抗性遗传的研究

黄瓜枯萎病是严重危害黄瓜生产的一种世界性土传病害,建立黄瓜枯萎病接种方法,从而实现快速、准确地对黄瓜种质资源进行抗病性筛选,明确不同黄瓜种质材料对枯萎病的抗性水平,可为黄瓜抗病育种提供重要依据.试验选用5份抗感枯萎病黄瓜材料及其杂交后代,以危害我国黄瓜生产的优势枯萎病生理小种4为供试菌源,开展了苗期人工接种枯萎病抗性鉴定方法以及枯萎病抗性遗传规律研究.结果表明,浸根接种法,以1×106孢子/mL的接种液接种子叶期幼苗,在白天24～28℃,夜晚16～20℃的温室中培养,接种后10～14 d即可正确区分品种之间的抗感性差异.该方法发病迅速,整齐度、重复性好,是较理想的黄瓜枯萎病接种方法.运用浸根接种法对以WIS2757和津研2号为双亲构建的F1、F2、F4 52个株系的各世代接种结果表明,WIS2757抗枯萎病,津研2号感枯萎病,F1群体抗枯萎病.根据F2群体和F4株系的抗病表现推断WIS2757对黄瓜枯萎病的抗性符合显性单基因的遗传模式.同时通过对Cu13和京育202及其F1的接种鉴定表明,Cu13抗枯萎病,京育202感枯萎病,F1群体表现中抗,初步认为抗病材料Cu13由多基因调控.     

柏木枯萎病病原菌的形态特征及分子鉴定

采用温室接种致病性测定、形态学观察和分子鉴定方法对柏木枯萎病病原进行了研究.从云南省昆明市、石林县及玉溪市采集柏木枯萎病病样13份,分离获得来自柏木树根部、茎干及枝的18个真菌分离物.经过致病性试验证实,分离物CWC1-CWC10均为柏木枯萎病病原菌.经形态学鉴定,CWC1 -CWC10均为Neofusicoccum ...     

四川黄瓜品种对黄瓜枯萎病抗性鉴定简报

黄瓜枯萎病是最常见的黄瓜病害之一,危害日趋加重。1988～1900年结合我们的抗病育种工作,在收集、整理和研究四川省黄瓜资源的基础上,进行了地方品种对枯萎病的抗性鉴定。一、鉴定方法鉴定用的病原菌是从成都市郊菜地黄瓜枯萎病株上分离的。经鉴定为黄瓜枯萎病菌F. oxysporum f. sp. cucumerinum。将纯化的PDA平板培养基上的枯萎病     

北京延庆甘蓝枯萎病发生和危害调查

【研究目的】对北京市延庆县2002—2006年期间甘蓝枯萎病的田间发生和危害进行了追踪和实地调查,旨在为后续研究和病害综合控制实践提供参考。【方法】文献追溯法、田间实地调查、数据分析方法;【结果】近五年来甘蓝枯萎病在北京市延庆县的发生呈现快速上升趋势,由2002年的2个村约13.3 hm2发展到2006年的25个村86.7hm2,提高了6.5倍。病害造成的产量损失高达30%以上,甚至绝收。甘蓝枯萎病的发生和危害与田间土壤、气候和品种抗病性关系密切;生产中目前尚无有效的预防控制措施。系统研究病原种类、初侵染来源和病害传播方式具有紧迫性。【结论】加速甘蓝种子健康检测和杀菌剂预防保健处理、筛选适合与土壤消毒的化学药进行应急防治的配套技术措施研究是病害综合防治的重点。     

黄瓜抗枯萎病相关基因cDNA的分离及鉴定

黄瓜枯萎病是造成黄瓜减产的主要病害之一,研究黄瓜枯萎病抗性分子机理对黄瓜抗病育种有重要意义。以黄瓜抗枯萎病材料Cu14为试材,采用基因差异显示技术(DDRT-PCR)研究黄瓜接种枯萎病生理小种4后基因的表达情况,分离出1个接种后在根茎部特异表达的差异cDNA片断,命名为A178-2。A178-2基因片段的328个核苷酸中有145个核苷酸与拟南芥泛素蛋白同源,氨基酸序列同源性达到85%。     

向日葵菌核病田间接种方法及品种抗病性研究

建立有效的向日葵菌核病盘腐田间接种鉴定方法,对向日葵抗性资源筛选和抗病育种具有重要意义。试验以菌核病菌PDA菌丝体悬浮液、高粱粒菌丝体和子囊孢子悬浮液作为接种物,分别对不同抗感向日葵品种在R5.1（始花期）、R5.5（半开花期）和R6（盛花期）进行人工接种,从而筛选出最佳接菌物类型、浓度及接种时期,并用此方法对18个品种连续2年进行了抗性评价。试验结果表明：3种接种物均可使不同向日葵抗感品种产生盘腐症状。PDA菌丝体为30.0 g/L、高梁粒菌丝体为0.4 g/盘和子囊孢子为1×10³个/mL浓度即可区分出向日葵品种间抗感性差异。R5.1~R5.5接种较R6可获得更高的发病率及病情指数。正交试验结果表明,田间盘腐接种的最佳条件为：接种物为子囊孢子悬浮液,浓度为1×10³个/mL,接种时期为R5.1,保湿时间为48 h。同时筛选出4个对盘腐型菌核病表现抗病的向日葵品种。本研究所建立的向日葵田间接种方法能够有效地对向日葵进行抗菌核病筛选和鉴定。     

影响大豆胞囊线虫生理小种鉴定因素探讨

大豆胞囊线虫(soybean cyst nematode,SCN)引起的病害能给大豆生产造成严重损失。探索影响大豆胞囊线虫(soybean cyst nematode,SCN)生理小种鉴定的因素对指导抗线育种工作具有重要意义。本研究以Lee68为材料,接种一定浓度的SCN4虫卵,在不同温度梯度的培养箱中培养,研究温度对大豆胞囊线虫生长的影响;以Riggs鉴定模式中的5个寄主为材料,接种一定浓度梯度的SCN2虫卵,研究接种浓度对鉴定结果的影响;从土壤相对含水量方面研究水分对大豆根系发育的影响。研究结果表明:在设定的温度梯度中,培养温度25℃/22℃(光/暗),Lee68上生长的胞囊数目最多,与其它几个温度培养条件相比,单株胞囊平均数达到差异显著水平,是胞囊生长最适宜温度;接种虫卵为1 200~24 000个/杯时,鉴定结果是正确的,超出这个接种范围,鉴定结果不稳定;一天浇水两次,浇水前/后土壤含水量为4%~7%/15%~18%,最有利于根系发育。本研究结果可为大豆胞囊线虫生理小种鉴定和抗线育种工作提供参考。     

北疆棉区棉花推广品种抗枯萎病鉴定结果初报

栽培抗病品种是防治棉花枯萎病的主要措施。2002年新疆农垦科学院棉花所在枯萎病团中对北疆棉区棉花推广品种进行了全生育期抗枯萎病鉴定。参与鉴定的l0个棉花品种经苗期、蕾期、生长中期及收获期剖秆检查，结果表明：近2年我区自育品种表现出较好的抗病性，抗病育种工作成效显著。     

木薯抗细菌性枯萎病鉴定技术初报

对各种抗性鉴定接种方法进行比较,结果表明:木薯抗细菌性枯萎病鉴定接种细菌悬浮液适宜浓度为3×107~3×108cfu/mL;抗性鉴定初筛宜采用改良针刺法或剪叶法,而复筛阶段宜用普通针刺法,其他接种方法难以区别品种的抗感反应;接种部位以叶片为宜。     

辣椒炭疽病抗病性鉴定技术及利用

通过单因子和双因子实验,研究了辣椒炭疽病接种体制备方法及接种时期、接种方法、接种浓度、调查时期和保湿时间对辣椒抗炭疽病的影响,摸索出一套适合辣椒炭疽病红熟果实接种的简便、可行、稳定、准确的抗病性鉴定方法。其要点是利用豇豆荚组织培养基繁殖炭疽病菌,以3×106个/mL的孢子悬浮液,在(26±2)℃的温度下,采用多针接种法接种甜、辣椒红熟期果实,黑暗保湿3 d,甜、辣椒对炭疽病的抗性可以在接种后7 d表现出来。应用该方法对甜、辣椒育种材料进行抗病性筛选,表明我国甜、辣椒中存在着对育种具有应用价值的炭疽病抗源。     

Assessment of DNA markers for seed contamination testing and selection of disease resistance in cabbage

Cabbage (Brassica oleracea L. var. capitata) is an important vegetable worldwide. Most Japanese commercial cultivars of cabbage use an F₁ hybrid seed production system. The purity of F₁ hybrid seeds is important and the assessment of purity based on DNA markers can be highly accurate. In addition, selection of agronomically important traits such as disease resistance based on DNA markers is useful for breeding of cabbage. The aim of this study is to demonstrate the effectiveness of DNA marker-assisted selection in cabbage. In this study we distinguished the parental S haplotypes in 35 F₁ hybrid cultivars by combining several linked DNA markers. Thirty-one highly polymorphic simple sequence repeats (SSR) markers were screened from 175 reported SSR markers, which are useful for assessment of the purity of F₁ hybrid seeds. We examined the relationship between the DNA marker based genotype and the phenotype by an inoculation test of clubroot disease. A co-dominant PCR–RFLP marker was developed for selection of Fusarium yellows resistance and the genotypes using this marker were consistent with inoculation test in all tested samples.     

一种新的棉花黄、枯萎病快速接种方法的研究

 3种不伤根的棉花黄、枯萎病接种方法,即全生育期的田间病圃鉴定法、液体培养棉花苗期孢子悬浮液浸根法和土壤种植棉花苗期孢子悬浮液灌根法进行对比,结果表明,液体培养棉花苗期孢子悬浮液浸根法（接种浓度为10⁷个分生孢子·mL^-1）全周期只需要30 d。通过这种方法,不仅可以鉴定出棉花品种对黄、枯萎病菌的抗、感病性,还可以鉴定不同黄、枯萎病菌菌株的致病力。对比不同浸根接种时间（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min）对结果的影响,发现浸根接种40 min可加快发病,鉴定结果和田间病圃鉴定的比较一致。     

两株抗香蕉枯萎病菌链霉菌固态发酵条件的优化及混合菌载体的选择

将具有抗香蕉枯萎病菌活性链霉菌通过固体发酵的优化,提高其菌丝生长以及孢子产量,并选择合适的吸附载体,为后期的香蕉枯萎病大田生物防治研究提供技术基础。采用单因子和4因子3水平正交试验法优化白刺链霉菌BWL15-4菌株及不吸水链霉菌BWL58菌株的固态法发酵培养基配方,通过单因子试验探讨了初始pH、接种量以及培养温度对2株菌生长情况的影响,并以孢子存活量多少确定了混合菌株的最适载体。BWL58优化后的固态发酵条件为：pH 7.0左右,接种量2%,发酵温度28℃,培养基配方为：无机盐水占大米重量的150%,黄豆粉占大米重量的5%,麸皮占大米重量的20%,沙土占大米重量的30%。BWL15-4优化后的固体发酵条件为：初始pH 6.3左右,接种量3%,发酵温度29.5℃。培养基配方为无机盐水占大米重量的130%,黄豆粉占大米重量的10%,麸皮占大米重量的20%,沙土占大米重量的20%。非耕作层土与混合菌以2:1的比例混合时,在常温下保存3个月后,孢子数只降低一个数量级。按照此优化条件进行固态发酵,白刺链霉菌BWL58菌株及不吸水链霉菌BWL15-4菌株孢子含量可分别达到1013 cfu/g和1012 cfu/g数量级以上。通过筛选得到了混合菌的最佳填料为非耕作层土。     

阿魏氯仿提取物对7种玉米病害的离体抑菌活性比较

采用生长速率法和孢子萌发法测定了阿魏氯仿提取物对引起玉米病害的7种病原菌(小斑病菌、弯孢霉叶斑病菌、链格孢叶斑病病菌、圆斑病菌、顶腐病菌、青枯病菌和瘤黑粉病菌)的菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明,对于同一种病原菌来说,阿魏氯仿提取物对其菌丝生长的抑制效果好于对其孢子萌发的抑制效果;对顶腐病菌菌丝生长的抑制效果最好,EC50只有46.66 mg/L;可引起大中型分生孢子畸形。     

豫中南地区露地春大白菜品种比较试验

通过对豫中南地区5个春露地大白菜品种的抗抽苔性、抗病性及产量比较试验,筛选出豫新5号、 京春早、小杂55适合该区春露地栽培,为该区发展春大白菜生产提供了理论依据。     

Screening of Chinese cabbage mutants produced by 60Co γ‐ray mutagenesis of isolated microspore cultures

Since the release of the Chinese cabbage genome sequence, increasing interest has focused on the functional analysis of unidentified genes in Chinese cabbage. Mutant analysis forms the basis of functional genomics research. To produce a variety of Chinese cabbage mutants in the same genetic background, buds containing late uninucleate spores from a doubled haploid line of the Chinese cabbage variety ‘Fukuda 50’ were irradiated with ⁶⁰Co γ‐rays at doses of 20, 40 and 60 Gy. Then, the treated microspores were isolated and cultured. A total of 492 putative M₀ mutants were isolated from 1483 regenerated plants. Of these, six M₁ mutants were verified; the mutant frequency was 0.41%. These mutants comprise a mutant library that includes one plant shape mutant, two flower mutants and three male sterile mutants. Pollen viability detection and DNA flow cytometry were used to determine the ploidy of the regenerated plants. Some of the mutants isolated in this study may be useful for Chinese cabbage breeding and functional genomics research.     

马铃薯干腐病主要致病菌DNA提取方法比较

马铃薯干腐病是由镰刀菌导致的马铃薯窖储真菌病害之一,获得高质量镰刀菌的DNA是建立马铃薯干腐病分子检测的前提。本试验采用改良SDS法和2×CTAB法对黑龙江省马铃薯干腐病五种镰刀菌的DNA提取方法进行了比较。结果表明,在腐皮镰刀菌（Fusarium solani (Mart.)）和拟丝孢镰刀菌（Fusarium trichothecioides Wollenw）的DNA提取过程中,改良SDS法优于2×CTAB,获得的DNA含量较高、条带较亮、纯度较高、完整性较好,而对于燕麦镰刀菌（Fusarium avenaceum (Corda & Fr.) Sacc）、接骨木镰刀(Fusarium sambucinum Fuckel)和拟枝镰刀菌（Fusarium sporotrioides Sherb）的DNA提取两种方法差异不大,但获得的DNA都可以很好的应用到后面的分子实验过程中,此试验获得的结果可以为马铃薯干腐病致病菌的分子生物学研究提供基础。     

黄瓜枯萎病生防芽孢杆菌的定向筛选及其抑菌活性物质特性分析

研究拟从北京郊区黄瓜根际土壤中定向筛选黄瓜枯萎病菌生防芽孢杆菌,并研究其抑菌活性物质的基本特性。采用热处理和形态观察结合平板对峙法定向筛选黄瓜枯萎病菌拮抗菌。从北京郊区黄瓜根际土壤中定向分离到63株产芽胞的菌株,从中筛选到2株对黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumarinum Owen.）具有较好拮抗作用的菌株,命名为j-28和j-50。拮抗菌j-28对黄瓜枯萎病菌的抑菌带达到11.0 mm。此外,拮抗菌j-28有较广的抑菌谱,对黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea）、马铃薯干腐病菌（Fusarium sulphureum）和茄子黄萎病菌（Verticilllium albo-atrum）等具有很强的拮抗作用。经过形态观察、理化分析和分子鉴定,j-28和j-50鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。研究还发现拮抗菌j-28的发酵液经过高温和强酸碱处理后抑菌效果会明显减弱,说明拮抗菌j-28产生的主要抑菌活性物质可能是蛋白类。笔者定向筛选到针对北京郊区多发的黄瓜枯萎病菌拮抗菌枯草芽孢杆菌j-28,具有潜在的应用价值,为今后北京郊区黄瓜枯萎病菌的防治提供新的生物防治资源。     

Optimization of an Inoculation Method for Cotton Alternaria Leaf Spot

[Objective] Cotton Alternaria leaf spot disease causes serious damage during cotton production. The aim of this study was the optimization of an inoculation method for cotton Alternaria leaf spot. [Method] An Alternaria alternata spore suspension was used as the inoculum. Three inoculation methods were tested and compared: smearing with spores plus retaining moisture using a sealed plastic bag; smearing with spores plus retaining moisture by intermittently spraying with water; and spraying spores plus retaining moisture by intermittently spraying with water. [Result] Inoculated cotton leaves were most readily infected by smearing with spores plus intermittently spraying with water. This inoculation method was effective for distinguishing resistant cotton cultivars from susceptible ones, but often caused nonuniform disease lesions on cotton leaves; thus, the incidence of diseased leaves was random and somewhat nonuniform. Spraying spores plus retaining moisture by intermittently spraying with water led to a relatively longer disease pathogenesis and slower disease progression; however, the incidence of diseased leaves was relatively consistent and uniform, thus providing repeatable inoculation experimental conditions compared with the other two inoculation methods. [Conclusion] Spraying spores plus retaining moisture by intermittently spraying with water is a suitable inoculation method for studying cotton resistance to Alternaria leaf spot.