筛选猪瘟抗体阴性猪检测方法的比较

评价ELISA法用于筛选猪瘟抗体阴性猪的可行性,分别采用两种商品化猪瘟抗体ELISA检测试剂盒检测了61份猪血清样品,并与兔体中和试验方法进行了比较。兔体中和试验法检测出4份阳性、2份可疑、55份阴性,而两种ELISA试剂盒均检测出6份阳性、55份阴性;两种ELISA方法与兔体中和试验检测结果阴性符合率均为100%（55/55）。结果表明,ELISA法更加敏感,可以替代兔体中和试验方法用于筛选猪瘟抗体阴性猪。     

两种不同检测法对猪瘟抗体阴性猪筛检的比较

猪瘟抗体阴性猪是猪瘟活疫苗安检的重要实验动物,目前对于猪瘟抗体阴性猪筛选是采用兔体中和反应法,实验复杂,工作量大并且易受实验兔个体差异等因素影响。随着生物学及其技术的发展,ELISA被广泛用于生物制品的各个领域。本试验应用ELISA法和兔体中和反应法对猪瘟抗体阴性猪进行筛选,共检测160份血清,检测结果显示两种方法结果有很高的一致性,但ELISA法更为敏感,快捷,更适用于猪瘟抗体阴性猪的筛选。     

猪瘟抗体检测技术的研究现状及发展趋势

简要叙述了FAVN、NPLA、ELISA、兔体中和等猪瘟抗体检测技术的原理及其应用现状,并通过对猪瘟抗体检测技术发展趋势的介绍,显示了猪瘟参考血清等相关标准物质在猪瘟抗体检测技术应用与发展中的价值及其今后的发展前景.     

应用三种方法筛选猪瘟抗体阴性猪的比较试验

为了寻找筛选猪瘟抗体阴性猪更简便的方法,本试验应用猪瘟中和试验(SN)、阻断ELISA和正向间接血凝(IHA)三种方法分别对170份未经猪瘟活疫苗免疫的仔猪血清进行猪瘟抗体检测。结果显示,SN、ELISA和IHA检测出的猪瘟阴性血清分别为144份、150份和131份,表明三种检测方法有较好的符合率,其中SN与ELISA的检测符合率为90.59%,SN与IHA的检测符合率为82.94%,而ELISA法与另两种方法比较阴性符合率最高。本结果表明,ELISA法具有较高的敏感性,适合应用于猪瘟活疫苗安全检验抗体阴性猪的筛选。     

猪瘟抗体检测技术研究现状及发展趋势

简要叙述了FAVN、NPLA、ELISA、兔体中和等猪瘟抗体检测技术的原理及其应用现状,并通过对猪瘟抗体检测技术发展趋势的介绍,显示了猪瘟参考血清等相关标准物质在猪瘟抗体检测技术应用与发展中的价值及其今后的发展前景。     

金华猪仔猪猪瘟母源抗体衰减规律初探

仔猪吸吮经猪瘟疫苗免疫的母猪的初乳后,对10头母猪和各所产仔猪中的任意2头在14、21、28、35日龄分别采血,采用正向间接血凝试验检测猪瘟抗体水平,监测母源抗体在仔猪体内的消长规律,以探索金华猪仔猪猪瘟疫苗最佳首免时间;检测母猪抗体水平以探索对仔猪母源抗体的影响。结果发现,仔猪母源抗体水平随着日龄增大而逐级降低,半衰期为17d左右;仔猪母源抗体水平与母猪抗体水平成正比,随着日龄的增加母猪对仔猪母源抗体影响越来越低。     

兔体中和试验用猪瘟病毒阴、阳性血清国家参考品的研制

为制备和标定兔体中和试验用猪瘟病毒阴、阳性血清国家参考品,本试验制备了猪瘟病毒阴性、弱阳性和强阳性血清,通过过滤、分装、冻干、熔封,获得3亚批候选物,并进行了检验、协作标定和定值。结果显示：物理性状、无菌检验、安全检验、支原体检验、真空度测定、均匀性检验和保存有效期试验均合格;剩余水分均小于4％;特异性检验结果均为口蹄疫、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻／粘膜病抗体阴性,并且弱阳性和强阳性血清能中和猪瘟兔化弱毒而阴性血清不能中和;残余猪瘟病毒免疫荧光和套式RT—PCR核酸检测结果均为阴性;经协作标定定值,其兔体中和效价分别为：阴性、1：100.928±0.103、1：102.928±0.103,表明该候选物可以作为国家参考品。     

重庆市甘规模化猪场猪瘟的诊断

重庆某猪场4头濒死仔猪病理变化疑以猪瘟，病科脾、淋巴结用兔体交互免疫试验检测也为猪瘟阳性。采用中国兽药监察所的猪瘟单抗纯化的强、弱毒抗原酶联免疫吸附试验（ELISA）对该场的母猪及仔猪进行了血清流行病学调查，9.69%（19/196）的母猪及16.83%（33/188）的仔猪血清中即为猪瘟强毒（野毒）抗体阳性，又为猪瘟兔化弱毒抗体阳性。试验结果显示，猪瘟是该场母猪繁殖障碍及仔猪死亡的原因之一。     

猪瘟兔化弱毒间接免疫荧光鉴定方法的建立

为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IFA检测HCLV感染的ST细胞清晰、特异,检测猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒感染细胞阴性。对不同猪瘟疫苗半成品的检测结果显示,IFA测定半数组织感染量(TCID50)与兔体定型热试验测定兔体感染量(RID)具有较好的相关性,其拟合曲线为RID/m L=2.783TCID50/m L+110107.213。     

RT-PCR与兔体交叉试验检测猪瘟病毒感染的相关性研究

对猪瘟RT-PCR诊断方法与兔体交叉试验诊断方法的相关性进行了研究。通过计算机软件设计了猪瘟病毒E2基因保守区的1对引物，建立了猪瘟病毒RT-PCR检测方法，同时应用兔体交叉试验进行对比，对7份临床送检病例进行了检测。结果表明，二者的符合率为100％，但RT-PCR可大大降低检测所用的时间，更便于猪瘟的快速诊断。     

猪瘟间接血凝抗体与猪瘟病毒感染的相关性分析

运用猪瘟间接血凝方法和猪瘟抗原ELISA方法对广西6个规模猪场送检的1614份血清进行猪瘟免疫抗体滴度和猪瘟病毒的检测,观察不同间接血凝抗体与感染猪瘟病毒是否存在一定关系。结果发现在任何一个免疫抗体滴度,都有可能有感染猪瘟病毒,二者无明显相关性,当间接血凝抗体滴度过低(小于1:16)或过高(大于1:512)时猪感染猪瘟病毒的机会相对大一些。     

ELISA法检测猪瘟抗体消长规律的试验研究

本试验采用间接ELISA方法,检测猪瘟(CSF)常规免疫仔猪的CSF抗体水平。试验分A、B两组,A组首免注射4头份猪瘟兔化弱毒疫苗,B组首免注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗;二免两组均注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗。试验结果表明,注射疫苗后10d,开始产生抗体,20d-30d抗体达到峰值,二免后抗体峰值维持40d以上。首免4头份的仔猪比首免2头份的仔猪CSF抗体峰值出现的早,维持时间长。     

5种商品化猪瘟疫苗免疫猪后的抗体水平监测比较

对国内几个市场占有份额量较大的猪瘟弱毒疫苗免疫接种仔猪展开血清抗体水平测定,比较不同生产厂家所生产的疫苗对猪群的两次免疫效果。随机选取30头日龄相同的猪瘟抗原检测为阴性的仔猪,于首次免疫后0、7、14、21、28、35 d和二次免疫后7、14、21、28、35 d采血,每头2 mL,共采血11次,总计330头份仔猪血样,按照IDEXX猪瘟抗体检测阻断ELISA试剂盒的中文操作说明书对待检猪血清进行检测,并分析阴性、阳性及其差异。结果表明,二免之前,5组试验组的抗体水平与对照组(生理盐水组)之间无显著差异(P0.05);二免之后,5组试验组的抗体水平与对照组(生理盐水组)之间差异显著(P0.05);5种商品化猪瘟弱毒疫苗免疫效果之间无差异显著(P0.05)。监测试验表明这5个厂家的疫苗质量合格。     

规模猪场猪瘟野毒感染情况调查

利用ELISA方法对广西6个规模猪场送检的1626份猪血清进行猪瘟野毒感染情况调查.结果6个规模猪场均存在猪瘟野毒感染,其中母猪感染率为7.86%～29.21%,平均为17.52%,种公猪感染率为0%～23.52%,平均为11.83%,育肥猪感染率为5%～22.45%,平均为15.5%,断奶仔猪感染率为8.24%～18.57%,平均为12.69%.此检测结果与猪场临床发病情况基本一致,病猪多表现为繁殖障碍型、温和型的非典型猪瘟.     

活猪携带猪瘟病毒检测方法比较

对2个猪场的母猪血清、扁桃体、全血样品和公猪精液分别应用荧光抗体染色法、RT-PCR、CS-FV抗原ELISA、CSFV糖蛋白Erns ELISA 4种方法进行CSFV对应检测和比较。结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,但与其他3种方法存在较大差异,RT-PCR方法检出率和重复性次之;猪瘟抗原ELISA方法检出率第3,重复性第1;CSFV糖蛋白Erns检出率和重复性均最低,但可筛选是否感染猪瘟病毒野毒。在母猪3种样品中扁桃体的检出率最高,全血样品次之,血清检出率最低。4种样品中公猪精液重复性最好,其次是母猪全血样品,母猪扁桃体第3;母猪血清样品最差。     

猪瘟病毒3种检测方法的比较

本研究旨在比较3种检测猪瘟病毒方法的优缺点。应用反转录—复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)、荧光抗体法、胶体金免疫层析试纸条3种方法,分别对 30份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒进行检测。试验结果显示,RT-nPCR方法检出阳性样品数为11份,荧光抗体法为13份,胶体金免疫层析试纸条为8份;3种方法检测全为阳性8份,全为阴性17份。试验结果表明,荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果, 敏感性比较差;胶体金免疫层析试纸条诊断方法最大的优点就是简便快速,且适合基层的应用,该方法的不足之处就是敏感性较低;RT-nPCR检测法具有快速、敏感等优点,但需一定仪器设备及成熟的技术方法。RT-nPCR还能区分待检样品为疫苗毒株(弱毒)还是野毒株感染(强毒),这是其他2种方法所不可比拟的。     

猪瘟三种快速诊断方法的比较

本试验运用电镜负染、荧光抗体染色、间接－ELISA三种方法对新疆南疆地区收集的7份猪瘟RT－PCR阳性病料进行了检测，发现：电镜负染法检出阳性病料2份，荧光抗体染色法检出阳性病料6份、间接－ELISA法检出阳性病料6份。结果表明荧光抗体染色、间接－ELISA都有很好的敏感性和特异性，其中间接－ELISA法可作为基层对猪瘟进行快速诊断的首选方法。     

模猪场猪瘟野毒感染情况调查

利用ELISA方法对广西6个规模猪场送检的1626份猪血清进行猪瘟野毒感染情况调查。结果6个规模猪场均存在猪瘟野毒感染,其中母猪感染率为7.86%~29.21%,平均为17.52%,种公猪感染率为0%~23.52%,平均为11.83%,育肥猪感染率为5%~22.45%,平均为15.5%,断奶仔猪感染率为8.24%~18.57%,平均为12.69%。此检测结果与猪场临床发病情况基本一致,病猪多表现为繁殖障碍型、温和型的非典型猪瘟。     

间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用

间接ELISA以其灵敏、特异、简单、快速、稳定、高通量及易于操作等优点,在猪瘟免疫猪群抗体水平监测、猪瘟的快速诊断与流行病学调查中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就间接ELISA方法及其在猪瘟诊断上的应用概况做一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

猪瘟疫苗田间免疫效果监测

为准确掌握猪瘟疫苗免疫效果,2010-2012年对投放安徽省的猪瘟疫苗免疫效果进行了监测。采用抗体阻断ELISA方法,检测了454个猪场7439份免疫猪瘟弱毒活疫苗1个月左右的血清中猪瘟免疫抗体水平。结果显示,安徽省猪瘟疫苗免疫效果总体良好,免疫抗体合格率超过了70％：脾淋组织苗和细胞苗免疫效果相当,但脾淋组织苗免疫效果稳定,细胞苗免疫效果稳定性较差：不同厂家疫苗免疫效果参差不齐。